乙型肝炎表面抗原检测结果分析及灰区设置探讨

目的通过对血液标本乙型肝炎表面抗原(HBsAg)检测反应性和弱反应性结果的分析,探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)设置灰区的意义。方法采用高灵敏度进口和常规国产ELISA试剂对献血标本进行HBsAg血液筛查,比较两种试剂的检测结果 ;对0.7≤S/CO<1灰区范围的弱反应性标本进行复检,探讨HBsAg检测灰区设置的范围及意义。结果共检测13965份无偿献血者标本,其中进口试剂检测HBsAg的阳性率为0.87%,国产试剂检测的阳性率为0.77%,进口试剂比国产试剂的检出阳性率高;对0.8≤S/CO<1灰区范围的26例弱反应性标本进行再检,两种试剂合计有3份标本S/CO≥1,占11.5%。结论 HBsAg检测进口试剂比国产试剂的灵敏度高,有条件的血站在选择HBsAg检测试剂时应选择一遍进口试剂进行检测;HBsAg检测的灰区范围建议设定为域值(cut-off值)下的80%。

乙型肝炎表面抗原(HBsAg)酶联免疫吸附试验检测灰区设置的探讨

目的对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)酶联免疫吸附试验检测结果分析,探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)灰区设置的意义。方法对2016年1月—2017年6月无偿献血者27214份标本同时采用两个厂家酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂检测,该实验室两种试剂均设有灰区,0.5≤S/CO<1,双试剂有反应性,则报告有反应性;单试剂有反应性,双孔复查,复查只要其中一孔有反应性,则报告有反应性,两孔均为无反应性,则报告无反应性。报告为反应性标本。所有检验标本均同时进行HBV-DNA检测。结果共检测27214份血液标本,双试剂有反应性57份,双试剂有反应性中核酸检测有反应性43份;单灰区标本70份,核酸检测均为无反应性;单试剂反应性标本84份,核酸检测均为无反应性;双试剂酶免检测均无反应性标27003份,核酸检测有反应性23份。临界值(Cot off)S/CO为0.5时,A试剂ROC曲线下面积为0.845,95%信置区间为0.719~0.970,B试剂ROC曲线下面积为0.837,95%信置区间为0.725~0.984;临界值S/CO为1时,A试剂ROC曲线下面积为0.792,95%信置区间为0.632~0.953,B试剂ROC曲线下面积为0.792,95%信置区间为0.653~0.930。该实验室试剂A和试剂B最佳临界值(Cut off)为(S/CO值)0.9。结论随着检测技术的提高,乙型肝炎表面抗原(HBsAg)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测灰区的设置是否取消,需要进行科学的性能评价,寻找适合该实验室的最佳临界值。

核酸检测对酶联免疫吸附试验法检测乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎病毒抗体结果呈灰区及弱反应性标本复检的必要性探讨

目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测呈灰区、弱反应性标本采用核酸检测(NAT)的复检情况。方法选取2011年1月‐2016年12月于该院就诊并经ELISA法检测HBsAg、抗-HCV结果呈灰区及弱反应性的标本741例为研究对象,所有研究对象均采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)复检,对两种方法检测结果进行比较。结果 ELISA法检测HBsAg、抗-HCV双试剂灰区标本HBV-DNA、HCV-RNA阳性率均高于单试剂灰区,差异均有统计学意义(P<0.05);ELISA检测HBsAg和抗-HCV单试剂、双试剂弱反应性标本NAT检测阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 ELISA法检测HBsAg、抗-HCV结果呈灰区、弱反应性标本存在一定的HBV-DNA、HCV-RNA阳性漏检和误诊,NAT检测对于HBV和HCV感染的早期诊断、治疗以及避免医疗纠纷的发生具有重要作用。

低水平乙型肝炎病毒表面抗原S区序列分析

目的对低水平乙型肝炎病毒表面抗原进行病毒S区基因分析。方法利用套式PCR法(Nested PCR)特异性扩增乙型肝炎病毒DNA的S区,对PCR扩增产物直接进行DNA序列分析,测序结果经Genotyping软件分型并与美国GeneBank中基因序列进行BLAST比对。结果 37例低水平乙型肝炎病毒表面抗原标本中,成功扩增并测序32份,其余5份扩增产物因不满足测序要求无法进行S区序列分析,32份成功测序标本经Genotyping分型,B型20例,C型12例,分别与GeneBank中收录的AF100309、AB014381同源性最高;血清学分型18例为adr,10例为adw,3例为ayw,1例为ayr,并发现21例S区核酸序列发生点突变,其中15例突变不会引起编码抗原决定簇氨基酸突变,为无义突变,而其他6例点突变均可引起抗原决定族编码的氨基酸的改变,从而导致表面抗原结构改变。结论对低水平乙型肝炎病毒表面抗原患者S区序列研究将为低水平乙型肝炎发病机制、流行病学以及个体化治疗奠定理论基础。

乙型肝炎表面抗原酶联免疫吸附试验试剂在血液筛查中的临界值设置

目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂设置灰区的范围及必要性。方法使用国产试剂和进口试剂平行检测HBsAg阳性血清样本(423份)和HBsAg阴性献血者样本(2996份),计算2种试剂不同吸光度值/临界值(S/CO值)下的灵敏度及特异度,并通过约登指数分析2种试剂设置灰区的合理范围。结果S/CO值为0.4时,国产试剂的约登指数(0.957)最大;S/CO值为0.7时,进口试剂的约登指数(0.971)最大。结论若对献血者HBsAg实施1遍ELISA试剂检测策略,本实验室使用的2种试剂均有必要设置灰区,其中国产试剂的反应性判定值宜设置为S/CO值≥0.4,进口试剂宜设置为S/CO值≥0.7。

乙型肝炎病毒表面抗原118位氨基酸变异研究

目的研究献血者乙型肝炎病毒表面抗原118位氮基酸变异对ELISA检测的影响。方法PCR扩增献血者表面抗原基因,恢复变异点氨基酸为野生型,构建不同的表达载体,在293T细胞株中表达,检测各自在不同试剂中的反应格局。结果117位点对检测反应格局不产生明显影响,118位点的变异明显影响检测格局,恢复变异点氨基酸明显提高了检出率和灵敏度。结论118位氮基酸变异影响了乙肝表面抗原的筛查,改变了其的免疫反应原性。

动态观察处于灰区的乙肝表面抗原的变化趋势

目的:对乙肝表面抗原(HBsAg)检测中处于灰区范围内的患者进行动态观察,分析其发展趋势,提高检测准确度。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,选取HBsAg初检结果在灰区范围的117例,并在1年后对117例复检标本进行HBsAg复检实验。结果:117例标本1年后的复检试验中,24例ELISA结果≥1.2,阳性率为20.5%;29例ELISA结果≤0.8,阴性率为24.8%;诊断明确标本数53例,占总标本的45.3%;其余64例复检标本ELISA结果仍处于0.8～1.2之间,其占总标本的54.7%。结论:检测HBsAg实验结果处于灰区范围的被检者进行动态观察,特别在一定时间间隔内重新取样检查,可以明显提高检测的准确度及HBsAg检验的应用价值,有的甚至还可以发现产生灰区的原因。

乙型肝炎病毒表面抗原ELISA实验C50浓度的确定及意义

目的 确定ELISA实验检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的临界点浓度C50,从而得到乙型肝炎病毒表面抗原测定的＂灰区＂范围,并比较两种HBsAg检测试剂.方法 根据定性实验临界点的定义,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）,分别用两种HBsAg试剂测定一系列血清浓度的标本,确定HBsAg的临界点浓度C50和C5及C95浓度,继而分别确定两种HBsAg试剂的＂灰区＂.结果 A试剂HBsAg C50浓度为0.40 IU/ml,＂灰区＂S/CO值为0.84~1.19;B试剂HBsAg C50浓度为0.35 IU/ml,＂灰区＂S/CO值为0.72~1.26.结论 HBsAg不同检测试剂的临界点浓度C50不一样,相应的＂灰区＂也不一样.实验室应对所用的试剂、方法进行评价,建立自己的C50浓度和＂灰区＂范围.

探讨核酸检测后取消乙肝表面抗原ELISA灰区的设定

目的探讨实施核酸检测后献血者血液标本的乙肝表面抗原(HBsAg)取消酶联免疫吸附试验(ELISA)灰区设定的可行性。方法对肇庆市中心血站的2016—2017年共78 690份献血者血液标本进行ELISA检测HBsAg;ELISA检测HBsAg结果为阴性和灰区的标本再进行乙肝病毒(HBV-DNA)核酸检测;对ELISA检测HBsAg结果为灰区的标本进行跟踪回访。结果2016—2017年的78 690份献血者血液标本进行ELISA检测Hbs Ag,共有122份标本在灰区范围;ELISA检测HBsAg结果为阴性和灰区的77 193份标本进行乙肝病毒(HBV)核酸检测,共检出HBV-DNA阳性标本81份,检出率为0.105%(81/77193),其中ELISA检测HBsAg结果为灰区的标本,核酸检测仅有1份为阳性检出率为0.820%(1/122);对ELISA检测HBsAg结果为灰区的标本进行跟踪回访,与第一次核酸检测结果一致。结论 ELISA检测HBsAg结果为灰区的标本,其真阳性率较低,随着病毒核酸检测的开展,其灵敏度和特异性均大大提高,可取消ELISAHBsAg灰区的设定,减少血液的浪费。

三种方法检测乙型肝炎表面抗原的结果分析

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒引起的一种乙类传染病，也是目前流行最广泛、危害最严重的病毒性肝炎之一，我国为乙型肝炎病毒感染的高流行区，健康人群的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）携带率一般为10％～15％m，目前检测乙型肝炎表面抗原的方法主要有金标法、酶联免疫吸附试验（ELISA）、电化学发光法（ECLIA）等。

TRFIA法检测HBV表面抗原最佳临界值及灰区探讨

目的探讨时间分辨荧光免疫试验(TRFIA)检测乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原诊断阳性的最佳临界值及其灰区。方法选取某三甲医院住院或体检的150例经TRFIA法定量检测阳性的血清或血浆标本和30例接近临界值(阴性)标本(0.03~0.05 IU/mL),采用化学发光微粒子免疫分析法确认其阴、阳性。绘制ROC曲线,判断最佳临界值,进一步探讨其灰区。结果在试剂说明给定的临界值下,TRFIA法检测结果与确证试验结果比较,差异有统计学意义(P<0.05),两试验结果一致性的Kappa值为0.690。TRFIA法检测HBV表面抗原诊断阳性的最佳临界值为0.074 IU/mL,此时,TRFIA法检测结果与确证试验结果一致性的Kappa值为0.814,其灰区范围为0.05~0.274 IU/mL。结论不同实验室应根据自身实验室的情况,制定适合本实验室最佳临界值和灰区,为临床诊断提供可靠的依据。

乙肝病毒表面抗原和抗体双阳性者中病毒S区基因序列分析

为了解乙肝病毒 (HBV)表面抗原和抗体双阳性患者中病毒的基因型及其HVBS区是否有变异。用放射免疫试剂检测HBsAg阳性样品中的抗 HBs抗体 ,用聚合酶链反应法检测双阳性样品中的HBVDNA ,然后对阳性样品进行克隆和基因序列分析 ,并将所得序列与HBV不同基因型的代表株进行比较分析。结果显示 389例HBsAg阳性样品中有 10例为抗HBs抗体阳性 ;该 10例双阳性样品中有 5例为HBVDNA阳性 ;序列分析显示该 5株HBV均为B基因型 ,其中 4株为adw亚型 ,1株为adr亚型 ;其中有 2株在S区的“a”

乙型肝炎病毒表面抗体两种检测方法的一致性研究

目的：研究外周血乙肝病毒表面抗体定量和定性检测结果之间的一致性。方法采用微粒子酶免疫分析法定量检测，酶联免疫吸附法定性检测。结果以 CMIA 为参考实验，ELISA 法检测 anti-HBs 的 Se 、Sp 、J 、PV ＋、PV －分别为0.95、0.53、0.48、0.74、0.88，k ＝0.51；吸光度为0.4009时 Se 、Sp 、J 、PV ＋、PV －分别为0.50、0.95、0.45、0.93、0.43；对吸光度0.1043～0.4009范围外样本分析，ELISA 定性检测的 Se 、Sp 、J 、PV＋、PV－分别为0.90、0.91、0.81、0.93、0.88，k ＝0.81。结论吸光度值0.105为 ELISA 检测结果判定的 Cut-off 值具有良好的检测灵敏度（Se ＝0.95）和较好的阴性预测值（PV－＝0.88），ELISA 检测 Anti-HBs 阴性可认为 Anti-HBs 浓度小于10 mIU／mL 而不具有保护价值；当样本吸光度大于或等于0.4009时可认为 Anti-HBs 浓度大于或等于10 mIU／mL，具有保护意义；ELISA 检测 Anti-HBs 灰区范围主要是吸光度0.105～0.4009，应定量检测以判定 Anti-HBs 真实水平。

ELISA联合化学发光免疫分析法诊断HBsAg灰区的效果分析

目的分析酶联免疫吸附实验(ELISA)联合化学发光免疫分析法诊断乙型肝炎表面抗原(HBsAg)灰区的效果。方法选取该院2019年1-10月间有参与无偿献血意愿的体检人员标本,以ELISA方法检测后HBsAg水平在灰区范围的90例患者标本作为本文的观察对象,并对其进一步采取化学发光法复检。结果90例灰区标本中,经化学发光法复检后,发现有25例为阳性,占比27.78%,有50例为阴性,占比55.56%,剩余15例为灰区,占比16.67%。结论ELISA检测漏检率较高,需引起高度重视,可联合化学发光免疫分析法进行复检,进一步降低HBsAg漏检的可能,提高输血的安全性。

血液HBsAg、抗HCV复检中应采用不同试剂和设置低限灰区

临床用血前复检采用不同试剂和设置低限灰区，可有效地防止ＨＢｓＡｇ和抗ＨＣＶ的漏检，减少输血后肝炎的发生。随机抽取被淘汰血液的部分标本进行ＰＣＲ检测，发现ＥＬＩＳＡ阳性及灰区标本均有一定的阳性率（ＨＢｓＡｇ为５７％，抗ＨＣＶ为２１％）。

化学发光法对ELISA检测HBsAg“灰区”标本的再分析探讨

目的探讨用化学发光法对乙型病毒性肝炎患者,乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测灰区标本的再分析及其临床意义。方法用低浓度质控血清对两种ELISA试剂盒进行测试,同时对用ELISA法检测的80例患者HBsAg弱阳性标本用化学发光法定量复检。结果目前国内两种较好的ELISA试剂盒的A值都低于其cutoff值区域("灰区");化学发光法的阳性率与HBsAg阴性组差异有统计学意义。结论不顾及ELISA"灰区"的标本,就有一定的阳性标本漏检,对HBsAg弱阳性的研究和报道应引起临床医生的重视,对HBsAg弱阳性患者应定期随访。

ELISA定性检测HBsAg灰区和相关实验室结果分析

实际工作中，由于HBsAg浓度低或基因表达变异，出现乙肝表面抗原灰区。本实验正是运用酶免法定性检测HBsAg，同时结合化学发光定量法及核酸DNA检测相关结果，进行对比分析，从而划分灰区范围。，准确检出乙肝表面抗原灰区血清，发出正确报告单。