乙型脑炎病毒激活天然免疫应答的特点

流行性乙型脑炎(JE)是由乙型脑炎病毒(JEV)感染引起的人兽共患病,威胁人类健康和畜牧业健康发展。天然免疫作为机体防御的第一道防线,在抵抗病原感染过程中发挥重要作用。病原微生物感染机体后,宿主模式识别受体(PRRs)通过识别病原相关分子模式(PAMPs)诱导天然免疫发挥抗病毒功能,其中干扰素和炎性因子至关重要。为了逃逸宿主的免疫清除,JEV进化出多种策略抑制天然免疫,促进自身复制。本文通过论述JEV基因组结构和致病机理,总结机体天然免疫分子识别JEV PAMPs激活天然免疫应答的方式,并进一步阐释JEV调控天然免疫应答的策略,有利于深入理解该病毒的致病机理,为JE的防控提供思路。

广西猪乙型脑炎病毒的分离及初步鉴定

【目的】了解广西猪乙型脑炎(JE)地方流行毒株特点,为有效防控广西猪JE奠定基础。【方法】对从广西各地猪场采集疑似JE病例猪的脑组织、流产胎儿、死胎、木乃伊胎、公猪精液、猪舍蚊子等靶组织样品进行猪乙型脑炎病毒(JEV)检测,并选择部分阳性样品进行JEV分离鉴定及病毒E基因遗传进化分析。【结果】在采集的465份JE疑似病料样品中,有72份为JEV阳性;通过接种BHK-21细胞、乳鼠及SPF鸡胚,分离获得两株JEV地方分离毒株,分别命名为GP株和LC株;遗传进化分析显示,GP株和LC株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为99.9%和99.8%;两株分离株与疫苗毒株SA14-14-2的核苷酸同源性分别为99.7%和99.9%,氨基酸同源性分别为99.4%和99.6%,且均属GIII型JEV。【结论】广西受检猪群存在较严重的JEV感染,应引起重视并加强防控。

褐藻多糖硫酸脂对小鼠免疫及抗日本乙型脑炎病毒的影响

为了研究褐藻多糖硫酸脂(fucoidan)对小鼠免疫及抗病毒调节作用,研究采用体内和体外试验研究褐藻多糖硫酸脂的免疫调节及抗日本乙型病毒(JEV)作用。结果表明:褐藻多糖硫酸脂能够促进脾脏淋巴细胞增殖,调节CD_4^+T细胞(CD_3^+ CD_4^+)/CD8T细胞(CD_3^+ CD_8^+)/B细胞(B 220+)亚群。说明褐藻多糖硫酸脂能够上调JEV灭活疫苗的抗体水平,同时促进Th1细胞因子IFN-γ及Th2细胞因子IL-4的表达。进一步研究发现褐藻多糖硫酸脂能够直接抑制JEV的复制。说明褐藻多糖硫酸脂具有潜在的抗病毒及免疫调节作用,可作为免疫增强剂及抗日本乙型脑炎的新型药物。

日本乙型脑炎病毒强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-NS2A诱导小鼠CD4^+T细胞应答的研究

为了解日本乙型脑炎病毒(JEV)强、弱毒株非结构蛋白的免疫效果,笔者分析了JEV强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A真核表达的差异。通过观察JE减毒活疫苗(SA14-14-2株)和JEV贵州分离株(GZ株)分别在BHK-21细胞上出现的CPE,并收集强、弱毒株的细胞悬液,提取总RNA,分别设计6对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A的编码基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NS1r、pcDNA3.1(+)-NS2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1-2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1q、pcDNA3.1(+)-NS2Aq和pcDNA3.1(+)-NS1-2Aq,将构建成功的6种真核表达质粒免疫健康小鼠,最后采集小鼠的血液和组织分别进行JEV抗体检测和细胞免疫水平检测。研究结果显示:JEV GZ强毒株与JEV SA14-14-2弱毒株能在BHK21细胞上增殖并产生CPE现象;构建的6种真核表达质粒免疫小鼠后经血常规和T淋巴亚群检测可以极显著或显著增加CD4+和CD8+细胞的含量。表明JEV强毒株非结构蛋白所诱导的细胞免疫略优于弱毒株非结构蛋白诱导的细胞免疫,但差异不明显。本研究结果可为日本乙型脑炎病毒的病原基础研究提供参考。

HRP-SPA ELISA检测猪日本乙型脑炎病毒抗体的研究

将盐析法提纯的、用Hela细胞系增殖的猪日本乙型脑炎病毒JapaneseBencephalitis(JEV)抗原包被酶标板,以HRP-SPA作为第二抗体,建立了检测JEV抗体的ELISA试验方法。结果表明,抗原的最适包被浓度为1∶800,待检血清最适稀释度为1∶50,HRP-SPA最佳工作浓度为1∶1000,各步反应时间确定为5min。交叉试验、阻断试验、重复性试验、敏感性试验证明本实验特异性强,重复性好,敏感性高。包被的病毒抗原经甲醛固定15min即可进行正式试验。确定其测定标准为:S/N≥14.81为阳性,S/N<12.53为阴性,12.53≤S/N<14.81为可疑。

雏鸡实验感染乙型脑炎和登革病毒的研究

用乙型脑炎（ＪＥ）和登革４型（ＤＥＮ４）病毒人工感染雏鸡，结果表明，雏鸡能产生１～４天的ＪＥ病毒血症和１～５天的ＤＥＮ４病毒血症；ＪＥ血凝抑制（ＨＩ）抗体和中和（ＮＴ）抗体于第６～８天产生，ＤＥＮ４的ＨＩ和ＮＴ抗体于第８～１０天产生，两种病毒的特异性抗体均于１６～２０天达到高峰。感染蚊虫叮咬，能将ＪＥ和ＤＥＮ４病毒传给雏鸡。实验证明，雏鸡对这两种病毒敏感。认为雏鸡在ＪＥ和ＤＥＮ病毒的保存和扩散中起一定作用。

乙型脑炎病毒NS1和NS1-2A蛋白的真核表达及其差异性研究

为深入研究乙型脑炎病毒(JEV)NS1和NS1-2A蛋白的表达和免疫效果差异,本试验构建并扩增C-端含Flag标签的NS1和NS1-2A基因,利用T4 DNA连接酶分别连接到质粒pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag。将这两种真核表达质粒分别转染BHK-21细胞,利用RT-PCR、IFA和Western blotting检测NS1和NS1-2A蛋白在体外的表达情况,用pcDNA3.1-NS1-Flag、pcDNA3.1-NS1-2A-Flag和pcDNA3.1(+)免疫BALB/c小鼠,检测这两种蛋白在体内的表达差异。结果显示,试验成功构建了NS1和NS1-2A基因的真核表达载体pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag,IFA和Western blotting鉴定NS1和NS1-2A蛋白成功表达,重组质粒pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag免疫小鼠后可诱发机体产生特异性体液免疫,pcDNA3.1-NS1-2A-Flag联合免疫组小鼠血清抗体效价和INF-γ细胞因子分泌水平比pcDNA3.1-NS1-Flag免疫组高,且与pcDNA3.1(+)空载体免疫组差异极显著(P<0.01);pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag免疫组小鼠体内的INF-γ分泌量会增多,免疫第4周达到最高后逐渐降低。pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag免疫小鼠能够刺激JEV特异性抗体的分泌和增强机体的细胞免疫功能,且NS1-2A联合基因的免疫效果优于NS1单一基因,为进一步研究JEV的非结构蛋白功能、研发NS1和NS1-2A基因疫苗奠定基础。

猪乙型脑炎病毒在Vero细胞上的繁殖特性及其灭活疫苗的免疫原性研究

试验旨在对猪乙型脑炎病毒(JEV,SA14-14-2株)在传代细胞上的繁殖培养特性及其制备的灭活疫苗免疫原性进行研究,确定猪JEV在细胞培养瓶中培养的关键技术参数及其灭活疫苗的免疫原性。以Vero细胞培养病毒,通过接种时间、接毒量、吸附时间、吸附温度、维持液pH、维持培养温度及培养时间7个条件的优化,将繁殖的病毒液冻融一次,采用病毒蚀斑数测定方法测定病毒滴度。按照优化好的条件繁殖一批毒液,经β-丙内酯灭活,与双相佐剂混合,制备成猪乙型脑炎灭活疫苗。两次免疫(间隔14d)接种乙型脑炎抗体阴性仔猪,首次免疫前(0d)、免疫后第7、14、21、28、35、42天采集血清,检测血清中和抗体。二免后第28天进行乙型脑炎P3强毒的攻击,攻毒前(0d)、攻毒后第1、2、3、5、7、9天采集血浆,攻毒后第14天剖杀免疫猪,采集脑组织,检测血浆和脑组织中JEV。结果显示,用细胞培养瓶进行培养,将Vero细胞培养至48h进行病毒接种,接种量为1 000PFU/mL,病毒吸附温度为37℃,吸附时间为90min,吸附后用pH 7.6～8.8维持液继续培养,培养温度为35℃,培养96h后收获毒液,冻融一次,可获得较高滴度的病毒。仔猪免疫制备的灭活疫苗后血清抗体水平迅速升高,血浆和脑组织中均未检测出JEV,免疫组试验猪能抵抗强毒攻击,可获得有效免疫保护。本试验结果为猪乙型脑炎疫苗的生产提供了参考依据。

柴石退热颗粒对乙型脑炎感染BHK-21细胞的抑制作用

目的:研究柴石退热颗粒对乙型脑炎病毒(JEV)感染BHK-21细胞的抑制作用。方法:分别采用不同浓度的柴石退热颗粒药液(40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL及320μg/mL)及10μg/mL利巴韦林处理JEV感染的细胞,24 h后观察各组细胞的形态及蚀斑形成,比较各组的细胞病变效应抑制率(CPE抑制率)及蚀斑抑制率。结果:不同浓度的柴石退热颗粒的CPE抑制率及蚀斑抑制率的差异具有统计学意义(P<0.05)。320μg/mL的柴石退热颗粒及利巴韦林的CPE抑制率及蚀斑抑制率的差异无统计学意义(P>0.05),40μg/mL、80μg/mL及160μg/mL的药液的CPE抑制率及蚀斑抑制率显著低于利巴韦林(P<0.05)。结论:柴石退热颗粒能抑制乙型脑炎病毒感染对BHK-21细胞造成的损伤。

柴石退热颗粒对乙型脑炎感染BHK-21细胞的抑制作用

目的：研究柴石退热颗粒对乙型脑炎病毒（JEV）感染BHK一21细胞的抑制作用。方法：分别采用不同浓度的柴石退热颗粒药液（40μg／mL、80μg/mL、160μg/mL及320μg/mL）及10μg/mL利巴韦林处理JEV感染的细胞，24h后观察各组细胞的形态及蚀斑形成，比较各组的细胞病变效应抑制率（CPE抑制率）及蚀斑抑制率。结果：不同浓度的柴石退热颗粒的CPE抑制率及蚀斑抑制率的差异具有统计学意义（P〈0．05）。320μg/mL的柴石退热颗粒及利巴韦林的CPE抑制率及蚀斑抑制率的差异无统计学意义（P〉0．05），40μg/mL、80μg/mL及160μg/mL的药液的CPE抑制率及蚀斑抑制率显著低于利巴韦林（P〈0．05）。结论：柴石退热颗粒能抑制乙型脑炎病毒感染对BHK-21细胞造成的损伤。

怎样综合防治猪流行性乙型脑炎

猪流行性脑炎，最早发生在日本，又称日本乙型脑炎。猪流行性乙型脑炎是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种人畜共患传染病。病猪主要表现怀孕母猪高热、流产、死胎，公猪睾丸炎则发生睾丸肿胀。

猪乙型脑炎传代细胞活疫苗保护剂的效力试验

为了提高活疫苗的稳定性,便于活疫苗的保存和运输,本试验将猪乙型脑炎病毒分别与耐热冻干保护剂和传统冻干保护剂进行配比、冻干,制备活疫苗,分别将疫苗置2~8℃保存,定期测定其病毒含量,同时进行25℃、37℃耐老化试验和小鼠免疫原性试验。结果显示,疫苗在2~8℃条件下保存24个月,使用耐热冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降不超过1.0 Log PFU/mL,使用传统冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降超过3.0 Log PFU/mL;25℃常温保存2个月,使用耐热冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降不超过1.0 Log PFU/mL,而使用传统冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降约2.0 Log PFU/mL;37℃保存10 d,使用耐热冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降不超过1.5 Log PFU/mL,使用传统冻干保护剂制备的疫苗下降超过1.5 Log PFU/mL。使用耐热冻干保护剂制备的活疫苗和使用传统冻干保护剂制备的活疫苗对小鼠的免疫原性相当,半数有效剂量分别为10^(-3.12)/0.1 mL和10^(-3.11)/0.1 mL。试验结果表明,耐热冻干保护剂对病毒的保护效力明显优于传统冻干保护剂,具有良好的热稳定性,使用耐热冻干保护剂制备的活疫苗具有良好的免疫原性。

猪乙型脑炎的防治

猪乙型脑炎是由乙型脑炎病毒引起的一种人畜共患病,猪被感染后大多数不呈现症状,妊娠母猪则出现流产和产死胎,公猪呈现出高热和睾丸炎等病症,少数猪呈现神经症状.

猪乙型脑炎的诊断及防治

猪乙脑炎是由乙脑病毒引起的一种人畜共患病,也是导致猪繁殖障碍的主要疾病之一。母猪染病后会导致死胎出现、公猪会出现急性睾丸炎、育肥猪持续高热、仔猪呈现脑炎症状。

家畜流行性乙型脑炎的流行症状及防制

本病又称日本乙型脑炎,是由流行性乙型脑炎病毒引起的人畜共患传染病。在人和马呈现脑炎症状,猪表现流产、死胎和睾丸炎,其他家畜和家禽大多呈隐性感染。

猪流行性乙型脑炎综合防制

流行性乙型脑炎,简称乙脑,是由乙型脑炎病毒(JEV)引起的一种蚊媒传播的人畜共患病。猪是乙脑病毒最主要的增殖宿主、扩散宿主和传染源,在易感季节管理不善的猪群中感染率极高,常呈散发性或地方性流行,严重危害养猪业的健康发展,需要采取综合性措施加以防制。

羊日本乙型脑炎的流行与防治

羊日本乙型脑炎的病原体为流行性乙型脑炎病毒，是羊的一种传染病，也可传染给人。典型临床症状为公羊发生睾丸炎；孕羊发生流产，产木乃伊胎或死胎。由于该病最先在日本发现，故得此名。一般于每年的夏、秋两季发生，主要发病于亚洲各国，我国大部分地区时有发生。

猪日本乙型脑炎的诊治

猪日本乙型脑炎，又称流行性乙型脑炎，是由日本乙型脑炎病毒引起的一种急性人畜共患传染病。主要特征为高热、流产、死胎和公猪睾丸炎。本病多发于夏季和初秋（7～9月份），猪群发病率一般为20％～30％，但死亡率较低。