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干旱胁迫下甘蔗幼苗cDNA文库构建与乙烯反应转录因子cDNA筛选研究 被引量:2
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作者 贺俐 许东风 吴杨 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第21期154-156,167,共4页
以甘蔗幼苗叶片为材料,建立了干旱胁迫下的甘蔗幼苗cDNA文库。文库质量鉴定结果表明,文库的滴度为1.4×106PFU/mL,重组率约为96.2%,扩增后的滴度为1.6×109PFU/mL,容量约为2.8×109PFU,插入片段大小在0.5-2.0 kb之间。利用... 以甘蔗幼苗叶片为材料,建立了干旱胁迫下的甘蔗幼苗cDNA文库。文库质量鉴定结果表明,文库的滴度为1.4×106PFU/mL,重组率约为96.2%,扩增后的滴度为1.6×109PFU/mL,容量约为2.8×109PFU,插入片段大小在0.5-2.0 kb之间。利用基于PCR技术的96孔文库筛选方法,从文库中筛选到1个响应干旱胁迫的目标基因的全长cDNA,经生物信息学分析,推测候选基因为乙烯反应转录因子(ethylene response factor,ERF)基因。 展开更多
关键词 甘蔗 干旱 CDNA文库 乙烯反应转录因子(ERF)
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芒果乙烯信号转导关键基因MiCTR1的克隆与序列分析
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作者 袁芳 王春艳 +4 位作者 李丽 许丹妮 李志红 甘婷 隆宇涵 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第10期2035-2043,共9页
芒果属于典型的呼吸跃变型果实,采后代谢旺盛且对乙烯非常敏感,CTR1是乙烯信号转导途径的负调控因子,在乙烯信号通路中发挥着核心作用。为了研究芒果CTR1在芒果采后贮藏过程中的表达模式及可能的作用,本研究从台农1号芒果转录组数据库... 芒果属于典型的呼吸跃变型果实,采后代谢旺盛且对乙烯非常敏感,CTR1是乙烯信号转导途径的负调控因子,在乙烯信号通路中发挥着核心作用。为了研究芒果CTR1在芒果采后贮藏过程中的表达模式及可能的作用,本研究从台农1号芒果转录组数据库中筛选1个CTR基因(MiCTR1),利用生物学方法对其编码的蛋白质进行测序分析,并对MiCTR1基因在芒果后熟过程中经乙烯抑制剂1-MCP处理后的表达模式进行分析。结果表明:MiCTR1的开放阅读框(ORF)长度为1551 bp,编码516个氨基酸,预测蛋白的分子式为C_(2503)H_(3932)N_(712)O_(797)S_(26),总原子数为7970,分子量为57.58 kDa,理论等电点(pI)为5.72,负电荷和正电荷的氨基酸残基总数分别为64和50个,脂肪系数为70.78,亲水性总平均值为–0.596,有111个磷酸化位点,且以丝氨酸(Ser)的磷酸化修饰为主,苏氨酸(Thr)为辅,无跨膜结构,无信号肽,亚细胞预测分析显示其定位于细胞核。蛋白质结构域预测发现,MiCTR1蛋白含有1个保守的PB1结构域,位于氨基酸序列189~285处。系统进化分析表明,MiCTR1与扁桃(Prunus dulcis)、桃(Prunus persica)、甜樱桃(Prunus avium)、杏(Prunus armeniaca)、梅(Prunus mume)的亲缘关系较近。荧光定量PCR结果显示,MiCTR1的相对表达量在芒果后熟过程中升高,且经1-MCP处理后其表达量下调。本研究结果为芒果后熟的分子机制提供基础。 展开更多
关键词 芒果 乙烯响应转录因子 CTR 克隆 表达分析
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番茄乙烯信号转录因子LeERF2多克隆抗体的制备
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作者 张红星 芮玉奎 +5 位作者 张文 谢远宏 杨祥龙 尹胜 朱本忠 罗云波 《生物技术通讯》 CAS 2006年第6期882-884,共3页
目的:作为番茄乙烯信号转录因子,LeERF2是在蛋白水平单独或同其他蛋白质协同与启动子或增强子相结合发挥其调控功能的,蛋白质的调控机制是信号转导领域中的关键研究内容。本研究目的是制备LeERF2抗体用于探讨番茄乙烯信号转录因子LeERF... 目的:作为番茄乙烯信号转录因子,LeERF2是在蛋白水平单独或同其他蛋白质协同与启动子或增强子相结合发挥其调控功能的,蛋白质的调控机制是信号转导领域中的关键研究内容。本研究目的是制备LeERF2抗体用于探讨番茄乙烯信号转录因子LeERF2在蛋白水平的生物活性及其生物学功能。方法:通过免疫新西兰大耳白雄兔和DEAE-52离子交换柱纯化分离制备了抗LeERF2多克隆抗体。结果与结论:抗体的效价大于10000,纯度达到了99%,Western印迹检测纯化后抗LeERF2多克隆抗体具有免疫特异性。 展开更多
关键词 番茄 乙烯信号转录因子 LeERF2 多克隆抗体
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芒果乙烯响应转录因子MiERF113基因的克隆及表达分析 被引量:4
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作者 易萍 黄方 +4 位作者 李丽 孙健 胡美姣 毕金峰 滕建文 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2022年第9期1751-1758,共8页
芒果(Mangnifera indica L.)是著名的热带水果,深受消费者的喜爱。我国是世界第二大芒果生产国,其中广西为全国最大的芒果产区。芒果是典型的呼吸跃变型水果,其果实在采摘后因乙烯大量释放容易软化腐烂,导致货架期短,影响产业的发展。... 芒果(Mangnifera indica L.)是著名的热带水果,深受消费者的喜爱。我国是世界第二大芒果生产国,其中广西为全国最大的芒果产区。芒果是典型的呼吸跃变型水果,其果实在采摘后因乙烯大量释放容易软化腐烂,导致货架期短,影响产业的发展。乙烯响应转录因子(ethylene response factor,ERF)是乙烯信号通路中的关键基因,参与果实内源乙烯合成的信号转导。为了探究ERF在芒果果实采后成熟调控的作用机制,以‘台农1号’芒果为研究对象,依据前期完成的芒果转录组数据结果,筛选并克隆得到1个ERF基因(MiERF113),利用生物信息学方法分析MiERF113的基本理化特征、保守结构域、蛋白质结构、进化关系等;利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术对MiERF113基因在芒果采后不同贮藏时期的特异性表达进行分析。结果表明:MiERF113基因的开放阅读框(ORF)长度为681 bp,编码227个氨基酸,预测蛋白质分子量为25.61 kDa,理论等电点(pI)为6.07,总平均亲水性为-0.883,有32个磷酸化位点,无跨膜螺旋结构,无信号肽。蛋白质结构域预测MiERF113蛋白仅含有1个保守的AP2结构域,且该结构域中第14和19位氨基酸分别为丙氨酸和天冬氨酸,符合ERF亚家族的典型结构特征。将芒果与拟南芥、猕猴桃、阿月浑子、苹果、柑橘和茶树的ERF氨基酸序列进行进化分析,发现MiERF113与阿月浑子ERF113的同源性较高,亲缘关系最近。利用qPCR检测MiERF113基因在芒果采后不同贮藏时间果皮和果肉部位的表达情况,结果显示,MiERF113基因在果皮和果肉中均有表达,且随着果实不断成熟其表达量在逐渐增加,在采后贮藏12 d时表达量达到最高。本研究为揭示MiERF113基因在芒果采后成熟过程中的调控作用提供理论依据。 展开更多
关键词 芒果 乙烯响应转录因子 基因克隆 表达分析
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菊花乙烯响应因子CmRAP2-12的克隆与表达特性分析
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作者 连青龙 田婧 +3 位作者 鲁少尉 马宁 鲍顺淑 李邵 《北方园艺》 CAS 北大核心 2018年第17期89-96,共8页
以菊花(Chrysanthemum morifolium)品种‘神马’为试材,采用RT-PCR与RACE、Real-time RT-PC等技术,克隆了菊花乙烯转录因子CmRAP2-12基因全长的cDNA序列片段,Real-time RT-PCR分析了水淹胁迫对菊花CmRAP2-12基因的表达模式的影响,以期... 以菊花(Chrysanthemum morifolium)品种‘神马’为试材,采用RT-PCR与RACE、Real-time RT-PC等技术,克隆了菊花乙烯转录因子CmRAP2-12基因全长的cDNA序列片段,Real-time RT-PCR分析了水淹胁迫对菊花CmRAP2-12基因的表达模式的影响,以期降低水淹条件下对菊花生长的迫害性影响。结果表明:得到的CmRAP2-12的cDNA序列为1 335bp;CmRAP2-12保守氨基酸的N末端含有一个具有ⅦERFs亚家族特征的氨基酸序列,且聚类到RAP2-12亚家族一类,并预测亚细胞定位在细胞核中。Real-time RT-PCR分析显示,CmRAP2-12在菊花的根、茎、叶中均有表达,并且在经过0~72h的淹水胁迫后,CmRAP2-12基因在菊花根系中的表达量均呈现一个先升高后降低的趋势,并在处理后48h达到最高值,淹水胁迫提高了菊花根系乙烯响应转录因子RAP2-12的表达水平。该试验将为进一步研究RAP2-12对提高菊花水淹低氧耐受性的调节机理与分子响应机制提供参考依据。 展开更多
关键词 菊花 乙烯转录因子 淹水胁迫 低氧 表达
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沙田柚乙烯应答因子的鉴定和生物信息学分析
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作者 李璐璐 陈玉梅 +2 位作者 罗琼 李惠敏 秦新民 《江西农业学报》 CAS 2018年第9期21-25,53,共6页
利用高通量测序对沙田柚自交和异交花柱进行转录组测序,通过差异分析得到了沙田柚乙烯应答因子基因序列。采用生物信息学方法,对其编码的蛋白质从序列特征、理化性质、跨膜结构域、高级结构以及功能域等方面进行了预测和分析。该基因全... 利用高通量测序对沙田柚自交和异交花柱进行转录组测序,通过差异分析得到了沙田柚乙烯应答因子基因序列。采用生物信息学方法,对其编码的蛋白质从序列特征、理化性质、跨膜结构域、高级结构以及功能域等方面进行了预测和分析。该基因全长为1013 bp(Gen Bank登录号为MG905213),开放阅读框(ORF)全长498 bp,编码的蛋白质含166个氨基酸。编码蛋白质的相对分子量为18.45 k Da,理论等电点为7.90。该蛋白质具有一个与AP2 superfamily蛋白相同的保守结构域,为亲水性非分泌不稳定蛋白,不属于跨膜运动,共有24个可能的磷酸化位点。氨基酸序列分析表明,该基因编码的蛋白质与芸香科的甜橙(Citrus sinensis,XP-006467696.1)和克莱门柚(Citrus clementina,XP-006449381.1)的AP2蛋白的同源性分别为100%和98%。系统进化树表明,沙田柚的乙烯应答转录因子与甜橙和克莱门柚亲缘关系很近,属于同一进化分支。 展开更多
关键词 沙田柚 乙烯转录因子基因 序列分析
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果实表面蜡质合成及乙烯和APETALA2/乙烯响应因子调控作用的研究进展 被引量:2
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作者 李丹 关军锋 韩亚楠 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第23期377-385,共9页
蜡质在保持果实良好外观、品质和营养成分,延缓果实衰老和延长果实货架期等方面具有重要作用。乙烯作为重要的果实激素,参与胁迫信号响应并调控果实生长发育和成熟衰老进程。目前,果实蜡质合成与转运途径被逐步阐明,同时参与该途径的蜡... 蜡质在保持果实良好外观、品质和营养成分,延缓果实衰老和延长果实货架期等方面具有重要作用。乙烯作为重要的果实激素,参与胁迫信号响应并调控果实生长发育和成熟衰老进程。目前,果实蜡质合成与转运途径被逐步阐明,同时参与该途径的蜡质合成酶和转运蛋白编码基因也在逐步被鉴定并完成功能验证,这些基因的表达可能受到乙烯和乙烯信号系统的调控。因此本文重点综述了果实蜡质的合成和调控,乙烯调控园艺作物果实蜡质合成,APETALA2/乙烯响应因子(APETALA2/ethylene-responsive factors,AP2/ERFs)调控模式植物、农作物和园艺作物果实蜡质合成等的研究进展,以期为调控果实蜡质合成的结构基因和AP2/ERFs转录因子的分析提供参考。 展开更多
关键词 果实蜡质 合成途径 乙烯 APETALA2/乙烯响应因子转录调控
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番茄乙烯信号转录因子LeERF1多克隆抗体制备及应用 被引量:1
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作者 张红星 朱本忠 +3 位作者 张文 谢远宏 李欣 罗云波 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 2008年第1期55-59,共5页
为研究番茄乙烯信号转录因子LeERF1在蛋白水平的生化活性及生物学功能,通过免疫兔子制备了抗LeERF1多克隆抗体,抗体的效价大于10000。抗LeERF1多克隆抗体经DEAE-52离子交换柱纯化,纯度达到99%。纯化的抗LeERF1多克隆抗体具有免疫特异性... 为研究番茄乙烯信号转录因子LeERF1在蛋白水平的生化活性及生物学功能,通过免疫兔子制备了抗LeERF1多克隆抗体,抗体的效价大于10000。抗LeERF1多克隆抗体经DEAE-52离子交换柱纯化,纯度达到99%。纯化的抗LeERF1多克隆抗体具有免疫特异性。蛋白印迹试验结果表明,粉红期番茄果实中LeERF1蛋白含量与番茄青霉菌侵染有相关性。 展开更多
关键词 番茄 乙烯信号转录因子 LeERF1 多克隆抗体
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甘蓝型油菜BnERF104超表达增强了转基因拟南芥对核盘菌的抗性 被引量:4
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作者 汪承刚 蔡丽 +4 位作者 董彩华 黄军艳 赵美霞 周瑢 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期325-330,共6页
根据拟南芥乙烯响应因子AtERF104的序列设计保守引物,从甘蓝型油菜品种中双9号中克隆到同源基因BnERF104。序列分析表明BnERF104蛋白含有一个典型的ERF domain保守结构域,属于乙烯响应转录因子ERF家族的成员。甘蓝型油菜用核盘菌(Sclero... 根据拟南芥乙烯响应因子AtERF104的序列设计保守引物,从甘蓝型油菜品种中双9号中克隆到同源基因BnERF104。序列分析表明BnERF104蛋白含有一个典型的ERF domain保守结构域,属于乙烯响应转录因子ERF家族的成员。甘蓝型油菜用核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)接种6h后,BnERF104基因被诱导显著上调表达。BnERF104基因在转基因拟南芥中的超表达提高了病原相关蛋白(PR)防御素PDF1.2和几丁质酶ChiB基因的表达量,显著增强了对腐生营养型真菌核盘菌的抗性。 展开更多
关键词 乙烯响应转录因子 BnERF104 PR蛋白基因 核盘菌
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甘蓝型油菜BnERF50的超表达增强了转基因拟南芥对核盘菌的抗性 被引量:2
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作者 汪承刚 李丹 +4 位作者 许李明 董彩华 黄军艳 方菊萍 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期427-432,共6页
从接种核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)后的甘蓝型油菜品种中双9号cDNA芯片中筛选出一个新的抗性相关基因BnERF50。序列分析表明该基因产物BnERF50蛋白含有一个典型的ERF(乙烯相应转录因子)保守结构域,属于ERF家族成员。接种核盘菌24h... 从接种核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)后的甘蓝型油菜品种中双9号cDNA芯片中筛选出一个新的抗性相关基因BnERF50。序列分析表明该基因产物BnERF50蛋白含有一个典型的ERF(乙烯相应转录因子)保守结构域,属于ERF家族成员。接种核盘菌24h后,该基因的表达量被诱导显著上调。在它的超表达转基因拟南芥中,病原相关蛋白(PR)防御素基因PDF1.2和几丁质酶基因ChiB的表达量升高,对腐生营养型真菌核盘菌的抗性显著增强。 展开更多
关键词 乙烯响应转录因子 BnERF50 病原相关蛋白基因 核盘菌
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Cloning of Brassica napus EIN3 Gene and Its Expression Induced by Sclerotinia sclerotiorum 被引量:4
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作者 许李明 黄军艳 +2 位作者 刘学群 覃瑞 刘胜毅 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第2期33-36,共4页
[Objective] The study was to investigate roles of Brassica napus EINB in ( BnEIN3 ) resistance to Sclerotinia sclerotiorum. [ Methods] Genomic PCR and RT-PCR were carded out to isolate genomic DNA and cDNA sequences... [Objective] The study was to investigate roles of Brassica napus EINB in ( BnEIN3 ) resistance to Sclerotinia sclerotiorum. [ Methods] Genomic PCR and RT-PCR were carded out to isolate genomic DNA and cDNA sequences of BnEIN3 from oilseed rape, based on the highly conserved region of EIN3 gene from Arabidopsis thaliana and the homologous sequences of oilseed rape ESTs. Expression levels of BnEIN3 were detected in three varieties of oilseed rape inoculated with S. sclerotiorum by real-time quantitative PCR.[Results] A 1 947 bp DNA fragment was obtained from oilseed rape. The fragment shared 82% identity to A. thaliana EIIV3, encoded 614 amino acids containing an EIN3 domain, and was named as BnEIN3. Real-time PCR results showed that expression patterns of BnEIN3 were drastically different in different varieties. In highly resistant oilseed rape variety D083, BnEIN3 expression level was significantly increased 72 h after S. sclerotiorum inoculation whereas in middle resistant and susceptible varieties Zhongshuang 9 and 84039, BnEIN3 expression was suppressed. [ Conclusion ] BnEIIV3 may play an important role in oilseed rape resistance to S. sclerotiorum. 展开更多
关键词 Brassica napus L. EINB RESISTANCE Sclerotinia sclerotiorum Real time PCR
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