从感染TMV的番茄叶纯化胞外β-N-乙酰氨基己糖苷酶

番茄系统感染ＴＭＶ（ｔｏｂａｃｃｏ ｍ ｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ）诱导叶β－Ｎ－乙酰氨基己糖苷酶活性升高。番茄叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩、－ ２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５ 离子交换层析，ＰＢＥ ９４（Ｐｏｌｙｂｕｆｆｅｒ Ｅｘｃｈａｎｇｅｒ ９４， Ｓｉｇｍ ａ）聚焦层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１５０ 凝胶层析纯化，获得纯化的β－Ｎ－乙酰氨基己糖苷酶。凝胶层析测得该酶的分子量为１４５ ｋＤ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得该酶的分子量为７５ ｋＤ，证明该酶由两个亚基构成。该酶能水解ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基葡萄糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧｌｃＮＡｃ）和Ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基半乳糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧａｌＮＡｃ）两种底物，能被过碘酸氧化，Ｓｃｈｉｆｆ试剂染色。在感染ＴＭＶ 的番茄叶片中。

尿N-乙酰-β-D-氨基-葡萄糖苷酶及尿β_2微球蛋白在过敏性紫癜肾损害早期诊断中的意义

目的探讨联合检测尿N-乙酰-β-D-氨基-葡萄糖苷酶(NAG)及尿β2微球蛋白(β2-MG)在过敏性紫癜(AP)肾损害早期诊断中的意义。方法以双夹心酶免疫法及放射免疫法检测94例AP患儿尿NAG、β2-MG水平。结果94例AP患儿中15例尿NAG异常,12例尿β2微球蛋白异常,5例尿NAG、β2微球蛋白均异常,尿NAG异常阳性率为15.96%(15/94),尿β2微球蛋白异常阳性率为12.78%(12/94);尿NAG及尿β2-MG异常的联合阳性率为28.72%(27/94),以上阳性率间两两比较:尿NAG与尿β2-MG阳性率无差异(X2=0.39P>0.05),而两者联合阳性率高于尿NAG(X2=4.41P<0.05),也高于尿β2-MG(X2=7.28P<0.05)。结论尿NAG及尿β2-MG均可作为早期诊断AP肾损害的尿标志性蛋白;应用两者联合指标,可提高其早期诊断阳性率。

尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶对监测早期肾功能损害的价值

目的探讨尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)监测早期肾功能损坏的价值。方法根据内生肌酐清除率(Ccr)将120例肾病患者分为A、B两组,A组58例,其Ccr≥80 mL/min。B组62例,其Ccr<80 mL/min。分别检查A、B两组和50例健康人的尿NAG(U/mmol Cr),并与其尿微量清蛋白〔mAlb(mg/mmol Cr)〕和血肌酐(Cr)含量进行比较。结果A、B两组肾病患者尿NAG、mAlb检测结果显著高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),B组患者尿NAG、mAlb检测结果显著高于A组,差异有统计学意义(P<0.05);在A、B两组中,尿NAG的阳性率显著高于尿mAlb和血Cr,差异也有统计学意义(P<0.05);肾病患者尿NAG活性与Ccr具有良好的相关性,差异有统计学意义(r=0.876,P<0.05)。结论尿NAG在肾病早期有较高的检出率,可作为监测早期肾功能损害的敏感指标。

血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C和尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶测定在糖尿病肾损害治疗监测中的作用

目的探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)和尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定在糖尿病肾损害治疗监测中的作用。方法测定64例糖尿病患者应用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)或血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ATIIRA)治疗前后血清Cystatin C、肌酐(Scr)、尿微量清蛋白(mAlb)、NAG,其中微量清蛋白尿期患者36例,临床蛋白尿期患者28例,在HITACHI7060自动生化分析仪上,采用乳胶颗粒增强免疫比浊法测定血清Cystatin C,终点比色法测定尿NAG,免疫透射比浊法测定尿mAlb,酶法测定血、尿肌酐。结果36例微量清蛋白尿期患者治疗6周后尿mAlb、血清CystatinC与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05),平均下降68.9%和22.0%,而Scr、尿NAG与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05);28例临床蛋白尿期患者治疗后血清CystatinC、Scr、尿mAlb、NAG与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05),平均下降25.6%、17.2%、40.7%和19.5%。血清Cystatin C与Scr的变化率呈显著正相关(r=0.796 3,P<0.01),尿NAG与Scr和血清Cystatin C的变化率不相关(r=0.306 5,P>0.05和r=0.269 6,P>0.05)。结论血清CystatinC可作为糖尿病早期肾损害患者治疗的一项肾功能监测指标;对临床蛋白尿期DN患者,用血清Cystatin C作为治疗监测和疗效评价的指标,比用Scr更加敏感,尿NAG可作为一项独立指标用于有尿NAG活性增高的DN患者治疗效果的观察和评价。

简并引物法克隆保加利亚乳杆菌β-N-乙酰氨基己糖苷酶基因

β-N-乙酰氨基己糖苷酶(β-Hexcase)在细菌、植物和动物中广泛存在,具有典型的外切酶活性并可以催化切除β-N-乙酰氨基己糖的非还原性氨基己糖残基,在细菌细胞分裂中具有重要作用.选取与保加利亚乳杆菌LJJ亲缘关系近的菌种的β-N-乙酰氨基己糖苷酶蛋白序列,利用ICO-DEHOP和CODEHOP在线简并引物设计软件设计β-Hexcase简并引物,选取Hex1-f和Hex1-r引物对,以LJJ基因组DNA为模板经PCR扩增得到614 bp产物.PCR产物连接pGEM-T质粒载体后克隆至大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆提取质粒进行测序.测序结果显示产物长度为614 bp,该DNA序列经blastx比对发现与其他已知β-Hexcase基因具有相似性,表明所克隆的序列即为LJJβ-Hexcase的基因片段.β-N-乙酰氨基己糖苷酶基因的获得为进一步研究β-N-乙酰氨基己糖苷酶与保加利亚乳杆菌自溶的关系奠定了基础.

检测阴道分泌物中β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶的临床应用评估

目的对化学法检测阴道分泌物中β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶的临床应用进行评估。方法在自动化仪器上用化学法检测200例患者阴道分泌物中β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶,同时对受检样本进行假丝酵母菌的培养鉴定。结果β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶阳性110例,阴性90例,培养出白色假丝酵母菌阳性69例。以培养法为标准,化学法检测阴道分泌物中白色假丝酵母菌的灵敏度、特异性、阳性预示值、阴性预示值分别为:62.3%、48.9%、39.0%、71.1%。结论化学法还不能作为检测阴道分泌物中白色假丝酵母菌阳性的过筛试验。

N-乙酰-β-D氨基葡糖苷酶在肾病早查中的临床意义

目的探讨N-乙酰-β-D氨基葡糖苷酶(NAG)检测在肾病早查中的临床意义。方法分析28例IgA肾病患者的临床及病理资料,探讨肾小球及间质病理损害程度与NAG的关系。结果肾小管间质损害情况:肾小管间质损害轻度者占46.43%,中重度者占32.14%,无肾小管间质损害者21.43%。肾小管间质损害与NAG的关系:肾小管间质损害中、重度者尿NAG酶(5.141±1.821)U/(mmol.cr);小管间质损害轻度者尿NAG酶(1.659±1.485)U/(mmol.cr);无肾小管间质损害者尿NAG酶(1.447±1.816)U/(mmol.cr)。小管间质中重度损害者同其他两组比较,其尿NAG酶有显著统计学差异,P<0.05。结论 IgA肾病常合并小管间质损害,肾小管功能中尿NAG酶改变与肾脏小管间质损害程度成对应关系。

血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验在诊断2型糖尿病早期肾损伤中的应用

目的探讨血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验在诊断2型糖尿病早期肾损伤中的应用。方法选择2018年1月~2019年6月我院收治的50例2型糖尿病早期肾损伤患者作为为研究组,另选取同时间段收治的50例单纯2型糖尿病患者作为对照1组,另选取同时间段来我院进行常规体检的50例自愿者作为对照2组。三组均接受血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验诊断,并进行比较分析。结果研究组的糖尿病病程长于对照1组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组的空腹血糖、尿微量白蛋白/肌酐比值水平均高于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组的糖化血红蛋白、N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶水平均高于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组的血清C肽水平低于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);对照1组的空腹血糖、尿微量白蛋白/肌酐比值水平均高于对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);对照1组的糖化血红蛋白、N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶水平均高于对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);对照1组的血清C肽水平低于对照2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在临床检查诊断糖尿病早期肾损伤过程中,应用血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验方法可以起到有效作用,能够提供准确检查诊断参考依据,具有重要应用价值。

糖尿病患者血尿酸、肌酐及尿N-乙酰-β-D氨基葡糖苷酶的相关性研究

目的探讨糖尿病(DM)患者血尿酸、血肌酐、尿N-乙酰-β-D氨基葡糖苷酶(NAG)测定的相关性。方法检测62例糖尿病患者[尿微量白蛋白正常(尿微量白蛋白<30mg/24h)41例(DM-1组)、升高(30mg/24h<尿微量白蛋白<300mg/24h)21例(DM-2组)]血生化(尿酸、肌酐)指标及尿NAG水平,并对尿NAG与血生化指标(尿酸、肌酐)的相关性进行分析。结果 DM-2组尿NAG均显著高于DM-1组(P<0.01),其升高与血尿酸呈正相关,与血肌酐无明显相关性。结论尿NAG在早期预测与筛选糖尿病肾病(DN)方面灵敏度高,是DN的早期诊断有价值的指标。

八字地老虎β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因cDNA序列的克隆及原核表达研究

[目的]克隆八字地老虎β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因的cDNA序列并进行原核表达。[方法]以八字地老虎预蛹期幼虫为材料提取总RNA,利用RT-PCR和RACE技术克隆基因cDNA序列,将cDNA序列编码区连接到原核表达载体pET21b并转化BL21进行原核表达,并使用His-tag纯化试剂盒将目的蛋白进行纯化。[结果]得到cDNA全长序列,含有2 488个碱基,包括一个1 785个碱基的开放阅读框,编码一个含594个氨基酸的蛋白,分子量为67.8 ku,等电点5.38,该序列登录GenBank并获得登录号FJ848784。诱导表达蛋白经SDS-PAGE电泳得到目的蛋白带,纯化结果也获得了目的蛋白带。[结论]获得了一条新的八字地老虎β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因的cDNA序列并对其在原核表达系统中进行了成功表达和纯化。

血清β-N-乙酰氨基己糖苷酶自动分析法改进

目的 对血清 β N 乙酰氨基己糖苷酶总活性自动分析法进行改进 ,使其整个试验过程实现全自动。方法 利用SYNCHRONCX9ALX全自动生化分析仪的操作功能 ,对原法的试验过程、试验条件、测定参数等重新设计 ,并对本法进行评价。结果 本法的检测波长为 4 10 / 5 2 0nm ,酶促反应时间 8.2 6 6 7min ,色原PNP在4 10 / 5 2 0nm下的毫摩尔吸光系数为 18.5 ,线性达 80 0U/L ,批内CV为 0 .4 9%～ 2 .2 1% ,批间CV为 0 .6 9%～2 .93% , x± 2s参考范围为 7.5 8～ 2 8.4 6U/L。本法无须另做样品空白 ,从样品上机到结果打印一气呵成。结论 本法不但简便快捷 ,真正实现了全自动 ,而且精密度及线性优于原法。

2型糖尿病患者尿N-乙酰-β—D一氨基糖苷酶和尿微量白蛋白联合检测在早期肾损伤诊断中的价值

目的探讨尿N-乙酰-β-D-氨基糖苷酶（尿NAG）、尿微量白蛋白（尿MAlb）对2型糖尿病早期肾损伤的诊断价值。方法2型糖尿病组60例，正常X,JN组30名，分别用速率法和免疫透射比浊法检测尿NAG、尿Malb。结果糖尿病组尿NAG20．14±13．3U／L、尿MAlb39．8±33．Img／L，对照组分别为5．34±1．2U／L、4．4±2．3mg／L，糖尿病高组于正常对照组3～9倍，，检验差别有高度统计意义（P〈0．01）；糖尿病组尿NAG阳性率88．3％、尿MA｜b81．6％，X^2检验差异无显著性（P〉0．05）；两两比较尿NAG、尿MAIb各自灵敏度100％、90．7％；特异性87．8％、100％；准确性均为94．4％。结论尿NAG、尿MAIb联合检测可提高糖尿病早期肾损伤诊断的敏感性与特异性。

自制尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶与尿微量白蛋白两项复合室内质量控制物质量评价

目的研制出1种包含尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和尿微量白蛋白(UMA)2项复合室内质量控制物,并初步评价其质量。方法收集临床肾病患者新鲜尿液,经过一定的处理,研制出1种包含尿NAG和UMA 2个项目的复合室内质量控制物;并对研制的质量控制物进行不同保存温度下的稳定性和瓶间均一性检测。结果在各保存温度下,尿NAG的稳定天数:4℃12 d,-20℃>300 d,-80℃>365 d;UMA的稳定天数:4℃27 d,-20℃>300 d,-80℃>365 d;各个保存阶段测得瓶间均一性良好。结论本次研制的尿NAG和UMA 2项复合室内质量控制物在合适的保存条件下,具备较好的稳定性与瓶间均一性,符合临床使用要求。

昆虫β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶研究进展

β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶是昆虫几丁质代谢中的一种关键酶,在昆虫的多种生理活动中发挥重要作用。因其能够水解几丁质,从而破坏昆虫体壁和围食膜。可以将此酶导入昆虫的体内来破坏其正常的组织结构,也可以通过调控此酶的活性来影响昆虫的生长发育,并为进一步构建杀虫工程菌以及转基因植物提供基因来源。

用中国仓鼠卵巢细胞构建内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶筛选系统

糖苷水解酶85家族的内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶具有糖基转移酶活性,利用该类酶,可以合成特定结构N-糖链修饰的糖基化复合物。为构建糖基转移酶筛选系统,将N-乙酰氨基葡萄糖转移酶的跨膜定位区域与绿色荧光蛋白融合表达,成功把带有天冬酰胺连接糖基化位点的单体增强绿色荧光蛋白定位到中国仓鼠卵巢细胞的高尔基体中。流式细胞仪分析显示,融合了定位区域后,绿色荧光蛋白仍可以发出荧光,且在引入糖基化位点后,细胞荧光强度约降低10倍。经衣霉素处理,细胞糖基化被抑制,同时荧光强度减弱。此细胞株荧光强度对于糖基化水平的依赖性表明其在糖基转移酶的进化筛选方面的应用潜力。

链球菌gordonii FSS2 N-乙酰氨基葡糖苷酶基因的克隆和表达

目的 :N -乙酰氨基葡糖苷酶 (N -acetylglucosaminidase)是链球菌gordonii六种胞外糖苷酶之一。为研究该酶 ,克隆和表达该基因片段。方法 :将链球菌gordoniiFSS2染色体DNA分离提纯 ,用限制性内切酶Sau 3AI不完全酶切 ,产生长度不等的随机片段 ,琼脂糖凝胶电泳分离和回收 2 - 8kpb的随机片段 ,然后与BamHI线性化及 5’端脱磷处理的载体pUC 18连接 ,转化大肠杆菌XL1-Blue;β—半乳糖苷酶筛选系统及酶切 ,检测插入片段。根据N -乙酰氨基葡糖苷酶与特异人工底物X -GlucNac反应 ,有色物质X被释放原理 ,筛选表达克隆。结果 :共有 6×10 6个转化子 ,约 5 0 %转化子含有插入片段 ;检测到 8个N—乙酰氨基葡糖苷酶表达克隆。结论 :所构建的基因组文库具有完整性 ,该基因在大肠杆菌XL1-Blue中成功表达。

过期妊娠孕妇血清β-N-乙酰氨基己糖苷酶测定及临床意义

目的 :探讨过期妊娠孕妇血清 β N 乙酰氨基己糖苷酶 (HEX ,EC3.2 .1.5 2 )和胎盘功能状态的关系。方法 :采用自动分析法和放射免疫法分别检测 15 0例初孕妇 (其中 2 8例为过期妊娠 )血清HEX和胎盘生乳素 (hpL)水平 ,产后做胎盘病理检查。结果 :孕妇血清HEX和hpL水平和妊娠周数有关 ,妊娠 37周～ 39周处峰值 ,随妊娠周数的增加呈下降趋势 ,过期妊娠孕妇血清HEX水平和胎盘功能有关。结论

O连接N-乙酰葡萄糖胺糖基化修饰在神经退行性疾病中的研究进展

O连接N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)糖基化是一种由O-键连接的乙酰氨基葡萄糖和胞内蛋白上的丝氨酸/苏氨酸残基形成的蛋白质翻译后修饰。O-GlcNAc糖基化修饰在脑内普遍存在,其与转录、翻译和蛋白稳态等关系密切。O-GlcNAc糖基化修饰参与多种神经系统变性疾病的发生发展,但其调控机制尚不清楚。现就O-GlcNAc糖基化修饰与神经系统退行性病变的关系作一综述。

利用N-乙酰葡糖胺糖苷酶在乳酸乳球菌表面展示超氧化物歧化酶

分别将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因(acmA)的信号肽序列(ss)、C-末端结构域(cA)及全长基因,与来自大肠杆菌(Escherichiacoli)的超氧化物歧化酶(SOD)基因sod构建成融合基因ss-cA-sod和acmA-sod,并连接于表达载体pMG36K,然后导入乳酸乳球菌ATCC11454菌株,获得了能在细胞表面展示SOD的重组工程菌MB193和MB194。经SDS-PAGE验证,重组菌MB193和MB194可分别表达产生分子量约为46和64kD的融合酶蛋白cA-SOD和AcmA-SOD。通过黄嘌呤氧化酶法测定MB193和MB194菌株的全细胞Mn-SOD酶活力分别为(2.63±0.51)U/mL和(3.51±0.64)U/mL,明显高于仅在细胞内表达产生SOD的对照重组菌MB192的酶活性(1.53±0.38)U/mL,且表达融合酶AcmA-SOD的重组菌MB194具有最大的表面展示效率(56.4%)。

联合尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶和血半胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测在糖尿病肾病早期诊断中的意义

目的探讨联合检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）和血半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CystatinC）对糖尿病肾病（DN）早期诊断的临床意义。方法62例2型糖尿病患者（糖尿病组）根据24h尿白蛋白排泄量（24hUAE）分为三组，A组（正常白蛋白尿组，24hUAE〈30mg）20例；B组（微量白蛋白尿组，24hUAE30～300mg）22例；C组（大量自蛋白尿组，24hUAE〉300nag）20例。另选择30例健康人作为对照组。收集并测定各组24hUAE、尿NAG活性，同时检测血清肌酐（SCr）及Cystalin C、采用Coekcroft—Gault公式计算内生肌酐清除率（Ccr），比较各组上述指标的变化。结果糖尿病组尿NAG活性、血清CystatinC水平均较对照组明显升高（P〈0．01），Ccr显著降低（P〈0．01）；尿NAG活性、血清CystatinC水平在糖尿病分组问逐渐升高（P〈0．05或〈0．01），而SCr增高在A组、B组差异无统计学意义（P〉0．05）。糖尿病组尿NAG活性、血清CystatinC、24hUAE、SCr两两比较差异均有统计学意义，呈正相关（P〈0．01），与Ccr均呈显著负相关（P〈0．01）。尿NAG活性和血清CystatinC联合检测阳性率（80．6％，50／62）高于单项检测阳性率[分别为58．1％（36／62）和61．3％（38／62）]（P〈0．05）。结论尿NAG和血清CystatinC是反映DN的敏感指标，联合检测可提高DN早期损害的检出率，有利于早期诊断。