乙肝病毒基因前C区突变与临床关系的研究

应用巢式ＰＣＲ结合碱性磷酸酶标记的ＡＳＯ探针杂交技术和ＤＮＡ测序技术对１２７例乙肝病毒（ＨＢＶ）感染后的血清标本进行了ＨＢＶ基因前Ｃ区突变的检测。结果发现：５３例为突变株感染，其中３２例为无症状携带者；１５例为慢性肝炎患者；肝硬化和肝癌患者各３例。在１２７例标本中发现４种新生突变：Ｉ１０Ｎ、Ｃ１２Ｗ、Ｃ１４Ｓ和Ｖ１７Ｆ，和４种不同数目核苷酸的插入片段。本研究认为ＨＢＶ基因前Ｃ区突变不一定导致病情加重。碱性磷酸酶标记的ＡＳＯ杂交技术安全可靠，特别适用于临床多样本的突变检测。

乙肝病毒前C区A1896变异与机体细胞免疫功能的关系

目的 :探讨慢性乙型肝炎患者乙肝病毒 (HBV)前C区A1896变异与机体细胞免疫水平的关系。方法 :对91例慢性乙肝患者通过流式细胞分析技术 (FCM )检测外周血T淋巴细胞亚群 ,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清细胞因子 (IFN -γ、TNF -α和IL -2)水平 ,采用聚合酶链反应 (PCR)扩增HBVDNAC基因区片段 ,并对PCR产物直接测序。结果 :发生A1896变异者49例 ,变异率为53 85 % ,随病情加重A1896变异率逐渐增加 ,以重型肝炎组最高 ;变异株组IFN -γ、TNF -α水平明显增高 ,CD8+细胞相对数逐渐下降 ,CD4+/CD8+比值逐渐升高 ,差别有统计学意义 ,而CD4+相对数及IL -2水平比较差别无统计学意义。结论 :A1896变异普遍存在于慢性乙型肝炎患者中 ,且随病情加重变异株感染率逐渐增加 ,单纯变异株的比例也随之增高 ;A1896变异株可能通过改变HBcAg 的表达及分布 ,激活大量的细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)释放细胞因子 。

乙肝病毒前C区变异与血T细胞亚群及TNF-a相关性

目的:探讨慢性乙型病毒性肝炎(以下简称慢性乙肝)前C区变异与宿主免疫之间关系。方法:采用msPCR法检测102例慢性乙肝患者血清乙肝病毒前C区(HBVpreC)变异,并用APAAP法检测T细胞亚群改变,用双抗体夹心ELISa法检测血清TNF-a水平。结果:在102例HBV-DNA阳性慢性乙肝(CHB)患者中HBVpreC1896变异检出率达64%(65/102)。变异株组及野生株组外周血CD4、CD4/CD8比值明显下降,而CD8明显增高,与正常对照组比较差异均有显著性意义(P<0.01)。变异株组CD4、CD4/CD8比值显著低于野生株组(P<0.05),而CD8显著高于野生株组(P<0.01)。变异株组TNFa水平均显著高于野生株组(P<0.01),两组水平均显著高于正常对照组(P<0.01)。结论:变异株组较野生株组存在更为严重的免疫紊乱,并通过多种途经激活宿主免疫,导致严重肝损伤。

乙肝病毒S基因亚型、前C区点突变与HBe系统的关系研究

为探索乙肝病毒 (HBV)S基因 (HBVS)亚型、前C区点突变与血清乙肝病毒e(HBe)系统之间的关系 ,我们对98例血清学确诊且HBVDNA阳性的乙型肝炎患者血清采用 3′端特异性引物聚合酶链反应 (3′BS PCR)进行了1896位核苷酸的检测分析 ,同时进行片段长度多态性分析 (PCR RFLP)检测HBV亚型。结果显示 :① 98例患者中 6 3例有突变株感染 (6 4.3% ) ,野生株和突变株混合感染的检出率在HBeAg阳性组为 5 7.8% ,抗 HBe阳性组中为34 .7% ,两组间有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;② 98例患者中HBVS亚型Ⅰ 6 8例 (6 9.4% ) ,其中HBeAg阳性与抗HBe阳性分别为 31与 32例 ;③HBVS亚型Ⅰ与Ⅱ突变株检出率分别为 80 .9%与 2 4.0 % ,两者有极显著差异 (P <0 .0 1) ,亚型Ⅰ中野生株和突变株混合感染率为 5 7.4%。结果表明 :HBVS亚型与HBe系统无必然的因果关系 ,但HBe系统与前C区第 1896位点突变有关。HBV前C区第 1896位点突变与HBVS亚型有关 ,以亚型Ⅰ易发生。变异株的产生可能受HBVS亚型和机体免疫压力所致。

乙肝病毒前C区1896G→A变异孕妇的胎盘细胞免疫研究

目的探讨发生前C区1896G→A变异的HBV经胎盘途径传播机制。方法将61名携带乙肝病毒孕妇分为2组，32名HBV前C区1896G→A变异的孕妇为研究组（又称为变异组），29名HBV前C区1896G→A非变异的孕妇为对照组（又称为非变异组）。结果HBV前C区1896G→A变异的胎盘中CD3阳性的T淋巴细胞和CD68阳性的巨噬细胞数（Hofbauer细胞）显著增加。两组CD68阳性的巨噬细胞相应的平均计数：研究组（22．7±4．5227），对照组（9．5±2．173），方差分析结果显示两项指标研究组与对照组比较均有显著差异（P〈0．01）。变异组IL2的表达增强，两组比较有统计学意义（X^2=25．2454：P〈0．01）。结论乙肝病毒发生前c区1896G→A变异后，胎盘感染HBV机率增加，且T淋巴细胞和Hofbauer细胞介导的细胞免疫可能有所增强。

原发性肝癌患者血清及肝癌组织中HBV前C区1896位突变株的研究

为了解HBV前C区1896位G→A突变株和原发性肝细胞癌（HCC）的关系，采用错配引物PCR（m少PCR）扩增结合限制性片段长度多态性分析（RFLP），检测了83例HBsAg阳性HCC患者血清样本中的HBV前C区突变株，并与66份HBsAg（＋）的慢性乙型肝炎患者的血清标本对照。结果发现：HCC组有47例检出HBV前C区基因（56．6％），其中16例存在HBV前C区突变株（34．0％）；慢性乙肝组有33例检出HBV前C区基因（50．0％），其中仅4例存在HBV前C区突变株（12．1％），两组HBV前C区突变株检出率有显著差异（P＜0．05）。为进一步研究HBV前C区突变株在HCC患者中的状况，同步检测了8例HBsAg阳性HCC患者肝癌组织和血清中HBV前C区突变株，发现在HBV前C区基因阳性的肝癌组织、癌周组织和血清中HBV前C区突变株分别为3／8（37．5％）、3／7（42.9％）和1／5（20．0％），均比慢性肝炎组高，提示HBV前C区1896位G→A突变珠在原发性肝癌的发生中可能有一定作用。

乙型肝炎病毒前-C区1896和基本C区启动子区1762、1764双突变及YMDD变异对拉米呋啶治疗的影响

目的 :研究乙型肝炎病毒前 - C区 G1896 A突变和基本 C区启动子区 A176 2 T、 G176 4 A双突变对拉米呋啶治疗的影响。方法 :采用直接测序法对服药前、中、后的血清标本的逆转录多聚酶区及前 - C、基本 C区启动子区进行检测。结果 :1前 - C区 G1896 A和基本 C区启动子区 A176 2 T、G176 4 A双突变在出现治疗中病毒学反弹与未出现治疗中病毒学反弹患者间及发生血清学转移与未发生血清学转换患者间差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;2 G1896 A突变在发生 YMDD变异和未发生 YMDD变异的患者间差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,发生 YMDD变异的患者很少伴有 G1896 A突变率低 (9% ) ;3出现治疗中病毒学反弹的患者 YMDD变异增加 ,与未出现治疗中病毒学反弹的患者比较差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :前 - C区 G1896 A和基本 C区启动子区 A176 2 T、 G176 4 A双突变对拉米呋啶治疗后出现的治疗中病毒学反弹和血清学转换没有影响 ;在 G1896 A突变株 YMDD变异减少 ;YMDD变异株的出现对治疗后出现的治疗中病毒学反弹有影响 ;YMDD变异可能是加剧肝细胞损伤引起治疗中病毒学反弹的因素之一。

应用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒前-C区/BCP区基因突变的研究

目的 探讨利用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒 (HBV)前 C区 /BCP区基因突变方法的临床价值及前 C区 /BCP区基因突变的临床意义。方法 应用基因芯片技术检测 4 6例急慢性肝病的HBV前 C区A1896 (nt1896G→A)、A1899(nt1899G→A)及HBVC基因启动子 (BCP)T176 2A176 4 (nt176 2A→T、nt176 4G→A)四位点突变 ,并探讨该技术的临床应用价值。结果 用基因芯片法测定HBV基因特定变异位点特异性强 ,阳性率为 87 0 %。A1896突变 18例 (4 5 0 % ) ,A1899突变 10例 (2 5 0 % ) ,T176 2A176 4联合突变 30例(75 0 % ) ,多位点突变 14例(35 0 % )。各变异组与未变异组比较 ,肝功损害均有显著性差异 (P <0 0 5～ 0 0 1)。前 C区 /BCP区基因突变在乙型肝炎肝硬化及慢性乙型肝炎中较为常见 ,在急性乙型肝炎中未检出。结论 应用基因芯片法测定HBV特定变异位点特异性强 ,可一次同时检测多个突变位点 ,具有一定的临床应用价值。

乙型肝炎病毒前C区1896点突变及临床意义

为了解兰州地区HBV前c区1896位点突变的存在及临床意义，我们对86例乙肝抗体阳性而抗原阴性慢乙肝患者进行了错配PCR限制片段长度多态性分析（ｍｐ－ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）。结果显示ＨＢＶ ＤＮＡ阳性２４．４２％（２１／８６），变异者１９．０５％（４／2１）。说明体内ＨＢＶ并未完全清除，兰州地区存在ＨＢＶ前ｃ区1896位点突变且与病情似有一定关系。

乙型肝炎病毒前C区1896位点突变的PCR分析法

目的分析乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区突变与ＨＢＶ感染患者肝脏病变的关系，建立ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变的ＰＣＲ分析方法。方法根据ＨＢＶ前Ｃ区ＤＮＡ序列，采用３′－碱基特异性聚合酶链反应分析ＨＢＶ第１８９６位核苷酸的突变，并检测了１２６例临床血清标本。结果成功分析了ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变，１２６例临床标本突变株检出率为４７．２％。结论本法操作简单，重复性好。

我国常见乙型肝炎病毒基因型与基本核心启动子及前C区突变关系的初步研究

收集81份HBV DNA阳性血清标本,经PCR扩增和序列测定确定其中有50份属于基因型C,31份属于基因型B;C基因型的基本核心启动子BCP T1762/A1764的突变率(38%)明显高于B基因型(12.9%,P<0.05);前C区A1896的突变在B、C两基因型间无显著性差异,B基因型为9.7%,C基因型为12%,P>0.05;HBeAg的表达与否与BCP双突变或前C区A1896突变均无明显相关性。经定量PCR检测证明,HBeAg阳性组中的HBV DNA含量明显高于抗-HBe阳性组,P<0.05。组内BCP双突变株和野生株及前C1896突变株和野生株的HBV DNA含量无显著性差异。

江苏省泰州地区乙肝病毒基因型与基因变异的研究

目的 研究江苏省泰州地区乙肝病毒 (HBV)基因型分布和基因变异情况及其临床意义。方法 选择江苏省泰州地区HBV感染者 15 8例 ,其中乙肝携带者 2 9例 ,急性肝炎 (AC) 18例 ,慢性轻、中度肝炎 (CH) 5 6例 ,重型肝炎 (FHF) 2 2例 ,肝硬化 (LH) 2 1例 ,肝细胞癌 (HCC) 12例 ,采用基因芯片法进行基因分型和基因变异检测。结果 15 8例乙肝患者中B型 3 5例( 2 1 1% ) ,C型 12 1例 ( 76 6% ) ,B/C混合型 2例 ( 1 3 % )。 15 8例乙肝感染者中发生前C区基因 1896变异的 95例( 60 1% ) ,发生C基因启动子 (BCP) 1762变异的 93例 ( 5 8 9% ) ,发生HBV聚合酶 (P)基因区YMDD变异的 11例 ( 7 0 % )。结论 江苏省泰州地区存在乙肝病毒基因型B和基因型C ,其中C型占优势 ;乙肝患者基因组可有多种变异 ,BCP 1762变异、前C区 1896变异与肝病的严重程度有关 ;部分乙肝患者在拉米夫定治疗过程中产生耐药 ,可能和HBV(P)

海南汉族乙型肝炎病毒基因型与BCP区和前C区基因突变的关系

目的探讨海南汉族乙型肝炎病毒(HBV)基因型与前C区G1896A和BCP区A1762T/G1764A基因突变的关系。方法采用RT-PCR方法检测乙型肝炎患者的HBV基因型,PCR方法扩增包含C启动子和前C区基因核苷酸(nt1643-nt2112),对PCR产物进行DNA测序。结果基因型C的BCP区A1762T/G1764A突变率(58.82%)显著地高于基因型B(10.53%)(P<0.05)。基因型C G1896A突变率为29.41%,基因型B G1896A突变率为47.37%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论不同基因型HBV致病能力可能与病毒基因组BCP区A1762T/G1764A突变率的不同有关,而与前C区G1896A突变无关。

乙型肝炎病毒前C区基因突变的研究进展

本文综述了乙型肝炎病毒(HBV)前C区基因突变的研究进展。前C区某些部位,特别是第1896位核苷酸的终止突变,使HBV失去分泌HBeAg的能力,但不影响其复制与传染。前C区突变的发生除与HBV前基因组逆转录过程中缺乏校验酶而发生碱基错配有关外,主要与宿主的免疫压力有关。前C区的突变常伴有其它基因特别是C基因的突变,共同影响突变株的生物学特性及宿主的临床转归,使某些突变株与重症肝炎的发生及干扰素的疗效关系密切,在母婴传播及肝移植中具有特殊意义。

乙型肝炎病毒前C区和BCP基因突变对肝脏疾病进程的影响

乙型肝炎病毒（HBV）是人类肝脏疾病的主要病原体之一,感染呈世界性流行,目前全球大约有4亿HBV慢性感染者,每年约有50万人死于HBV相关性肝硬化和肝细胞癌;我国属于HBV高流行区。研究发现,HBV比其他DNA病毒更易出现变异,在HBV感染者体内常形成以一个优势株为主的相关突变株病毒群。HBV基因突变给乙型肝炎的诊断、治疗及预后判断带来许多临床问题。现将HBV前C区和BCP突变对肝脏疾病进程度的影响综述如下。