乙型肝炎低表面抗原患者乙肝病毒血清学标志物与乙肝病毒前基因组RNA的相关性分析

目的研究血清乙肝病毒前基因组RNA(HBV pgRNA)检测结果与慢性乙型肝炎(CHB)低表面抗原患者不同乙肝病毒的血清学指标之间的相关性。方法收集福建医科大学孟超肝胆医院慢性乙型肝炎低表面抗原患者共计148例纳入研究。临床样本进行HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBV DNA、HBV pgRNA的测定,检测数据采用多因素logistic回归分析、分层分析以及HBsAg、HBsAb(ROC曲线)评价血清HBV pgRNA的预测价值。结果血清HBsAg滴度对HBV pgRNA的影响具有统计学意义(P<0.05),而年龄、性别、HBsAb、HBeAg、HBV DNA与HBV pgRNA的关系无统计学意义。HBeAg阴性患者中,HBsAg滴度对HBV pgRNA的影响有统计学意义(P<0.05);HBeAg阳性患者中,HBsAg.HBsAb对HBV pgRNA的影响无统计学意义(P>0.05)。HBsAg曲线下面积为0.934,有统计学意义(P<0.001),HBsAg大于0.5,pgRNA是阳性的;HBsAb曲线下面积为0.874,有统计学意义(P<0.001),HBsAb大于1.44,pgRNA低于检测下限。结论慢性乙型肝炎低表面抗原患者在接受抗病毒治疗过程中,临床指标如血清HBsAg滴度及HBV pgRNA滴度对病情的转归有较好的预测价值。HBsAg和HBV pgRNA滴度越低,HBsAb滴度越高,预示病情稳定、不易复发。

血清低水平乙肝病毒表面抗原的临床意义分析

目的:探讨血清中低水平乙肝病毒表面抗原(HBsAg)与乙肝病毒(HBV)DNA载量及肝功能指标的关系。方法:选取2020年6月—2021年12月在宁波市镇海区人民医院就诊的低水平HBsAg患者408例,检测所有纳入患者的乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(抗-HBe)及乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)、HBV DNA载量检测及相关肝功能指标。结果:408例低水平HBsAg患者中,抗-HBe和抗-HBc均为阳性,且抗-HBs和HBeAg均为阴性的患者占比最高,共360例(88.24%);HBV DNA阳性共82例(20.10%),不同浓度HBsAg患者HBV DNA阳性率差异有统计学意义(P=0.041),HBsAg浓度在31~40 COI时,HBV DNA的阳性率最高(30.00%);不同浓度HBsAg时HBV DNA载量差异无统计学意义(P>0.05);不同浓度HBsAg及HBV DNA对应的肝功能检测结果差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:低水平HBsAg患者中,抗-HBe和抗-HBc均为阳性,且抗-HBs和HBeAg均为阴性的患者占比最高;HBsAg浓度不同时,HBV DNA阳性率也不同,但并不影响HBV DNA载量;HBsAg浓度及HBV DNA载量不同并不影响患者的肝功能。

公共核酸数据库乙肝病毒全基因组序列概况和中国HBV参照序列的建立

截至2007年1月,世界三大核酸数据库(GenBank,EMBL,DDBJ)库中已经登录来自46个国家和地区的HBV全基因组的8种基因型近900条序列.文中对公共核酸数据库中现有的HBV全部基因组序列进行了统计分析并从基因型的地理分布及其临床特征等方面进行了评述,为进一步研究病毒与宿主的关系,以及HBV的人群分布和进化历史提供帮助.同时,通过系统进化分析对所有登录的229条中国地区HBV全基因组序列及其课题组新近完成的59条全基因组序列进行了基因分型,并根据这些序列建立了中国地区B基因型和C基因型的参照序列,为中国地区HBV的突变研究提供了DNA序列参照体系.此外,对于目前不同数据库信息内容和登录情况进行了分析,提出全面结合宿主临床信息和HBV基因组信息研究的建议.

对小干扰RNA长期作用HBV转基因小鼠抑制乙肝病毒复制的评价

目的:探讨小干扰RNA长期作用HBV转基因小鼠对抑制乙肝病毒复制的评价。方法:siRNA表达载体经尾静脉注射转染HBV转基因小鼠,设立特异性siRNA组(pSilencer5.1/C2、pSilencer4.1/C2、pSilencer3.1/C2)、PBS对照组和阴性质粒对照组(n=10)。在注射后第6天、21天、1个月、3个月、6个月和9个月的不同时间经其内眦静脉采血,采用化学发光法定量检测小鼠血清中HBsAg水平,实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA水平。结果:siRNA长期作用机体可使转基因小鼠血清HBsAg和HBV-DNA水平显著降低,特异性siRNA组与PBS对照组相比,差异有显著统计学意义(P<0.05)。而阴性质粒对照组与PBS组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:基于载体的特异性siRNA长期作用HBV转基因小鼠可抑制HBV的复制和表达,该抑制作用是特异性的。

宁夏地区乙肝病毒感染者HBV基因分型与临床意义

目的研究宁夏地区乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者的HBV基因型的分布情况,探讨其与HBV感染者的性别、年龄、肝功能、HBV-DNA载量及血清标记物水平的关系。方法应用基因型特异性多对引物巢式PCR法对175例HBV感染者的血清标本进行HBV基因型检测,并针对不同的基因型进行性别、年龄、肝功能、HBV-DNA载量及血清标记物水平的相关性分析。结果宁夏地区175例HBV感染者的血清标本中(汉族136例,回族39例)有12例(6.9%)未检测出基因型。在已检测出基因型的163例样本中,B基因型84例(48%),C基因型62例(35.4%),B+C混合基因型17例(9.7%)。B基因型在宁夏地区HBV感染者中占优势。HBV基因型与HBV感染者的ALT水平有关联(P<0.05),与年龄、性别、血清标记物水平等指标无关联性(P>0.05),C基因型在肝硬化和肝癌中所占的比例较B型和B+C型差异有统计学意义(P均<0.05)。结论宁夏地区HBV感染者的基因型包括B型、C型及B+C混合基因型,其中以B基因型为主,其次为C基因型。HBV基因型与ALT水平有关联,与本研究中其他指标无相关性,C基因型较B型和B+C型在肝硬化和原发性肝癌中所占比例增高。

乙肝病毒前S/S抗原的重组表达质粒对HBV转基因小鼠的免疫治疗效应

目的:观察重组表达质粒pcDNA3.1-S2S和pcDNA3.1-S1S2S对HBVDNA复制和抗原表达的抑制效果.方法:以能表达乙肝表面抗原主蛋白S(HBsAg)的重组真核表达质粒为骨架,构建了分别含有HBV前S1抗原和/或前S2抗原编码基因的pcDNA3.1-S1S2S,pcDNA3.1-S2S,并各以100μg肌肉接种C57BL/6HBVDNA转基因小鼠,2,4wk后各加强免疫1次.然后动态检测小鼠血清HBVDNA水平的变化、抗-HBs和前S2抗体的诱生,以及肝组织内HBsAg、前S2抗原的消长情况.结果:小鼠肝组织内HBsAg,前S2抗原呈逐渐减弱的趋势,8wk后各有1/3的小鼠已不能检出.pcDNA3.1-S1S2S组接种后4,8,12wk抗-HBs阳转率分别为50%、67%、100%,明显高于pcDNA3.1-S2S组(17%、33%、50%)(P<0.05);而前S2抗体阳转率均低于17%.接种后8wk,12wk,pcDNA3.1-S1S2S组和pcDNA3.1-S2S组小鼠血清HBVDNA水平明显下降,均低于自身接种前、接种后4wk以及同期对照组(P<0.05).结论:重组表达质粒pcDNA3.1-S2S和pcDNA3.1-S1S2S接种,能够抑制转基因小鼠体内的HBV复制,而重组质粒中S1基因的共表达使抑制作用得到增强.

乙肝病毒携带者中医证型与HBV基因型及HBV DNA载量的关系

目的:探讨慢性乙肝病毒携带者不同中医证型与HBV基因型及HBV DNA载量的关系。方法:对95例慢性乙肝病毒携带者进行临床流行病学调查,组织专家组对其进行中医辨证,同时检测HBV基因型及HBV DNA载量,进行统计学分析。结果:慢性乙肝病毒携带者的中医证型以肝胃不和、肝气郁结、肝阴虚、肾阴虚证为主。4个主要证型间的HBV DNA载量比较,肝阴虚证>肝气郁结证>肝胃不和证>肾阴虚证。不同HBV基因型中HBV DNA载量比较,C型>B型。结论:不同中医证型与HBV基因型及HBV DNA载量间有一定的规律性,但无明显的相关性。

PCR扩增HBV x基因特征序列检测乙肝病毒DNA

提出了通过扩增特征序列检测乙肝病毒DNA的新方法.根据乙肝病毒DNA保守区的特点,利用Primer Premier5.0设计出乙肝病毒x基因的特异性引物,并在以血清DNA为模板的聚合酶链反应体系中进行扩增,由此检测待测血清中是否存在乙肝病毒DNA.实验结果表明,该方法较传统的酶联免疫法灵敏,可以检测出酶联免疫法所检测不到的乙肝病毒,具有与免疫印迹一样的准确度;通过与以乙肝病毒s基因为靶序列的PCR反应体系比较,发现乙肝病毒x基因比s基因在序列上更为保守,更适合做乙肝病毒DNA检测的特征序列.

1012例乙肝病毒患者HBV P区基因位点变异分析

目的研究人群中乙肝病毒(HBV)P区位点突变发生的频率和特点。方法通过高保真PCR扩增1 012例乙肝病毒患者HBV的P区基因片段,采用双脱氧末端终止法进行测序,分析HBV P区169、173、180、181、184、194、202、204、233、236和250共11个位点的变异情况。结果 HBV P区204和180位点突变频率较高;其次是181和236位点;其余位点突变频率很低。在男性患者中,204位点和180位点突变率相对较高;女性患者中存在同样的情况。30岁以下患者与31至60岁患者相比较,181位点变异率差异较大(P<0.01)。其余无显著差异(P>0.05)。结论 HBV P区位点突变主要集中在180、181、204和236位点。不同性别的患者中,HBV P区基因突变率尚不具有统计意义上的显著差异。不同年龄段的患者中,HBV P区181位点的突变率具有极显著差异。通过测序技术检测P区位点的突变,可以全面反映P区位点的变异情况,为临床用药和抗病毒新药研发提供重要依据。

原核表达系统真核化中的核定位信号对乙肝病毒(HBV)基因免疫效果的影响

研究核定位信号对真核化的T7表达系统在真核细胞及基因免疫中表达HBsAg基因效率的影响。结果发现 ,在体外培养细胞中 ,无核定位信号的T7系统表达效率比有核定位信号组明显要高。基因免疫时 ,无核定位信号组诱发小鼠产生了针对HBsAg的特异性免疫应答 ,而含核定位信号的T7表达系统则未能诱发小鼠发生明显的免疫应答。提示T7系统是一种胞浆表达系统 ,将T7RNA聚合酶引入核定位信号后该系统的表达效率降低 ,甚至不能诱发特异性免疫应答。

乙肝病毒(HBV)X基因真核表达载体构建及其表达研究

:限制性内切酶酶切含两拷贝乙肝病毒 (HBV)全基因组的 pBR32 2质粒 ,得到含X基因 894bpDNA片段与载体 pcDNA3.1连接 ,构成中间载体 .以此中间载体为模板 ,PCR扩增X基因序列 ,与载体 pcDNA3连接 ,构建成X基因真核表达载体 .用脂质体转染法 ,在体外转染正常小鼠胎肝细胞 (FL)、人肝癌细胞 (SMMC 772 1)和人宫颈癌细胞 (HeLa) .以免疫组化染色法检测细胞中X蛋白表达 .结果显示 ,细胞中X蛋白表达呈低水平 .同时 ,筛选了一株能长期表达X蛋白的细胞株 .这些为进一步研究X基因的生物学功能、分子生物学特性以及建立转基因小鼠奠定基础 .

在大肠杆菌中利用反义RNA抑制乙肝病毒（HBV）X基因的表达

将乙肝病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ株完整的Ｘ基因正向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２１的ＰＬ启动子下游，得到能表达Ｘ蛋白的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＶ（＋）；同时将Ｘ基因反向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２０的ＰＬ启动子下游，得到能转录Ｘ基因反义ＲＮＡ的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＸ（－）．利用这两个质粒，构建出能同时转录Ｘ基因ｍＲＮＡ和反义ＲＮＡ的重组质粒ＰＥＸ．ＡＮ－ＨＢＸ，并在原核水平上，证实了反义ＲＮＡ对Ｘ基因的表达具有明显的抑制作用，从而为在真核水平上利用反义ＲＮＡ对Ｘ基因进行调控的研究提供了有利的基础．

乙肝病毒基因分型与HBVDNA及临床表现的关系

目的:探讨乙肝病毒基因分型(C型和B型)与HBV DNA载量及临床表现的关系。方法:2011-2013年收治慢性乙型肝炎、肝硬化患者160例,经检测均为乙肝病毒(HBV)基因型;160例患者均进行基因分型,选测基因B型患者与基因C型患者对HBV DNA载量及临床类型作比较。结果:160例患者中,基因B型64例(40%),基因C型92例(57.5%),其他类型4例(2.5%);在HBV DNA载量方面及CHB和LC人数方面,C型均显著高于B型,差异有统计学意义(P<0.05);C型肝损害严重程度高于B型。结论:乙肝病毒基因C型患者HBV DNA载量高,病情活动相对剧烈,易发展为重度肝损伤、重型肝炎、肝硬化。

2021年重庆口岸出入境人员乙肝病毒感染情况及HBV分型检测分析

目的了解2021年重庆口岸出入境人员乙型肝炎病毒感染情况和基因分型情况。方法采集2021年在重庆国际旅行卫生保健中心进行健康监测的出入境人员血清样本,使用电化学发光法进行HBsAg检测,采用荧光PCR的方法对100份HBsAg阳性血清标本进行HBV基因检测和分型检测。结果2021年在重庆国际旅行卫生保健中心进行健康监测的出入境人员11431名,其中HBsAg阳性485例;100例HBsAg阳性血清标本中,B型47例,C型19例,D型2例,BCD以外的其他基因型3例,样本HBV DNA含量低于最低检测限29例。结论2021年重庆口岸出入境人员中HBV感染者以青壮年居多,职业以劳务为主;出境人员HBV基因型以B型为主,应加强对劳务人员健康宣传。

血清HBV DNA及HBV前基因组RNA(pgRNA)在慢性乙肝患者抗病毒不同阶段的变化分析

目的分析慢性乙肝患者抗病毒治疗的不同阶段血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)及HBV前基因组RNA(HBV pgRNA)的变化。方法选取2018年2月—2021年2月就诊的60例慢性乙肝患者,对其进行抗病毒治疗,根据不同的治疗方法分为恩替卡韦治疗组(n=30)和阿德福韦酯治疗组(n=30),并根据治疗不同阶段分为0周、12周、24周、36周、48周,对不同病况接受抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者进行HBV DNA、HBV pgRNA检测,比较抗病毒不同阶段HBV DNA、HBV pgRNA浓度的变化。结果两组患者在0周、12周、24周、36周、48周血清HBV DNA、HBV pgRNA均呈下降趋势(P<0.05),且恩替卡韦治疗组下降幅度大于阿德福韦酯治疗组(P<0.05);治疗0周、48周时,恩替卡韦治疗组、阿德福韦酯治疗组的HBV DNA、HBV pgRNA比较无统计学意义(P>0.05),而治疗12周、24周、36周时,恩替卡韦治疗组HBV DNA、HBV pgRNA低于阿德福韦酯治疗组(P<0.05)。结论HBV DNA、HBV pgRNA的浓度在治疗的不同阶段变化不一致,但均可用来反映慢性乙肝患者抗病毒治疗后的临床效果。

重庆地区乙肝病毒基因型分布及其临床意义

目的调研重庆地区乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)基因型构成,探讨HBV基因型与乙型肝炎疾病进程的相关性。方法用SSP-PCR法对360例HBV DNA阳性患者HBV基因分型,采用多因素Logistic回归分析HBV基因型与疾病表型的相关性。结果本回顾性研究人群中,HBV-B型占45.6%,HBV-C型占53.9%,分型失败0.5%。随着疾病从慢性乙型肝炎到肝硬化、原发性肝细胞癌的进展,C型HBV所占比例显著上升(χ2=23.368,P<0.001)。Logistic回归分析显示HBV基因型是HBV感染者罹患肝癌的独立风险因素(OR=3.2,P=0.01)。B、C基因型患者的HBV DNA水平和HBeAg阳性率无显著差异(P>0.05)。结论重庆地区HBV基因型以B、C型为主,C型HBV更易导致严重的肝病,HBV基因型是影响疾病进程的重要因素。

乙肝病毒Pre S1与HBV M和HBV DNA检测的相关性分析

目的 了解PreS1与HBVM和HBVDNA检测的关系及其临床应用价值。方法 PreS1检测采用ELISA方法 ,HBVM检测采用电化学免疫发光法 ,HBVDNA检测采用荧光定量PCR法。结果 PreS1在HBeAg(+)组的检出率86 9% ,明显高于其他HBVM模式组 (P <0 0 1) ;PreS1检出乙肝病毒的灵敏性高于HBeAg检测 ,检测灵敏度为 80 9%(HBeAg为 6 1 8% ) ,检测有效率为 86 1% (HBeAg为 75 7% )。结论 PreS1与HBeAg具有较好的相关性 ,其检测灵敏性 (与HBVDNA的相关性 )和检测有效率都优于HBeAg检测 ,具有较好的临床应用价值。

生物素标记乙肝病毒(Bio-HBV)基因探针检测慢性HBsAg携带者血清中的HBV-DNA

150例慢性HBsAg携带者血清经Bio-HBV探针检测发现半数以上HBV-DNA阳性,HBV-DNA的检出与HBsAg滴度不呈平行关系,比e抗原的检出率高。实验表明,用Bio-HBV探针检测HBV-DNA是判定HBsAg携带者传染性的一种更敏感、可靠的方法,值得大力提倡。

乙肝血清学标志物定量和HBV DNA定量联合检测在乙肝病毒感染诊断中的应用

目的分析乙肝患者的血清标志物和乙肝病毒(HBV)DNA联合检测在HBV感染诊断中的应用价值。方法以2013年6月-2015年6月在珠海市妇幼保健院就诊的120例乙肝患者血清样本作为研究资料,分别采用ELISA定性试验和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测HBV血清标志物(HBs Ag、抗-HBs、HBe Ag、抗-HBe、抗-HBc)和HBV DNA含量。结果Ⅰ组HBV DNA阳性率为96.15%;Ⅱ组HBV DNA阳性率为48.08%;Ⅲ组HBV DNA阳性率为4.76%。Ⅰ组HBV DNA定量显著高于Ⅱ、Ⅲ两组(P<0.01);Ⅱ组HBV DNA定量显著高于Ⅲ组(P<0.05)。HBV DNA与HBs Ag检出符合率分别为73.33%和72.50%,两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论乙肝血清标志物定量与HBV DNA定量联合检测在诊断HBV感染过程中起互相补充的作用,诊断结果更加准确,可提供更有效的参考依据。

乙肝病毒感染者血清HBeAg模式与HBVDNA定量关系的研究

探讨乙肝病毒感染者血清HBeAg模式与HBV DNA定量之间的关系。采用酶联免疫技术和实时荧光定 量PCR法,分别检测随机选择的80例乙肝病毒感染者血清HBeAg模式及HBV DNA定量。结果显示,当乙肝病毒 感染者血清HBV DNA含量为A、C级时,血清HBeAg模式与HBV DNA定量之间亦无相关性(P>0．05)。当乙肝病 毒携带者血清HBV DNA含量为B级时,HBeAg阳性模式HBV DNA含量显著高于HBeAg阴性者,血清HBeAg模式 与HBV DNA定量之间有显著相关性(r=0．28,t=1．19,P<0．05)。由此可推测,只有当机体内乙型肝炎病毒水平在 一定的范围内,机体的免疫应答能力才与乙型肝炎病毒水平相呼应。