HBeAg阴性血清中乙肝病毒基本核心启动子变异研究

目的:了解本地区乙型肝炎病毒(HBV)流行株基本核心启动子(BCP)的变异特点,为临床提供诊疗信息。方法:通过设计3条特异性引物进行半巢式PCR扩增患者血清中HBVBCP序列,克隆入pUCm-T载体中进行DNA测序和比对分析。结果:BCP变异主要集中在TATA样盒中的TA1、TA2、TA3区,而TA4极为保守,TA1-TA4未见插入或缺失突变。结论:BCP变异具有一定的地域特点,BCP变异可使HBeAg阴转。

慢性乙型肝炎乙肝病毒基本核心启动子变异的实验与临床研究

目的研究乙型肝炎基本核心启动子(BCP)变异与慢性乙型肝炎病情的关系。方法通过PCR及其产物直接检测128例慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV,同时检测患者HBV定量及血清生化指标。结果128例标本中nt1762、1764变异(双变异)共检出56例,nt1753、1762、1764变异(三变异)共检出10例,肝炎肝硬化(LC)组中双变异明显高于其他CHB组(P<0.05);双变异组的HBeAg、ALB明显低于无变异组(P<0.05),三变异组HBeAg明显低于双变异组(P<0.05)。结论BCP区双变异可减少HBeAg的表达,引起肝功能受损严重并导致肝硬化的发生,BCP区尚有新发现的变异如三变异也可影响HBeAg的表达。

细胞因子对HBVDNA基本核心C基因启动子变异、乙肝病情及HBVDNA复制的影响

目的 :探讨细胞因子 IL- 2、IFN- γ、IL- 4、IL- 1 0对 HBVDNA基本核心 C基因启动子 (BCP)变异、慢乙肝患者的病情及乙肝病毒 (HBV) DNA复制的影响。方法 :采用 PCR微板核酸杂交结合 EL ISA技术检测 HBVDNA BCP变异 ;荧光定量 PCR技术测定 HBVDNA含量 ;双抗体夹心 EL ISA法检测 IL- 2、IFN- γ、IL- 4和 IL- 1 0水平。结果 :1 HBVDNA BCP变异病人和非变异病人的 IL- 2、IFN- γ、IL- 4和 IL- 1 0水平无差别 (均 P >0 .1 ) ;2慢性重症肝炎组的 IL- 2、IFN- γ和 IL- 1 0水平高于肝炎后肝硬化和慢乙肝病人 (P <0 .0 5 ) ;而 IL- 4水平在各组无差别 (P >0 .0 5 ) ;3患者 HBVDNA水平随着 IL- 2水平的增高而下降 ,呈高度负相关 (r=- 0 .84 0 2 ;P <0 .0 1 ) ,其余 3种细胞因子水平与 HBVDNA水平未见相关关系。结论 :1机体的免疫压力可能对HBVDNA BCP变异无明显影响。2 IL- 2、IFN- γ和 IL- 1 0水平可能影响慢乙肝病情发展。3机体的 IL- 2水平对

HBeAg阴性血清中乙型肝炎病毒基本核心启动子和前C区变异研究

目的了解本地区乙型肝炎病毒(HBV)流行株基本核心启动子(BCP)和前C(PreC)基因的变异热点,为临床提供诊疗信息。方法通过设计3条特异性引物进行半巢式聚合酶链反应(PCR)扩增患者血清中HBV BCP和PreC基因序列,回收和纯化PCR产物,用引物P1、P2直接进行正反测序,然后进行比对分析。结果BCP变异主要集中在TATA样盒(TATA-like box)中的TA1、TA2、TA3区,而TA4极为保守,TA1-TA4未见插入或缺失突变,PreC变异主要集中在nt1896位G→A。另外,发现1例新奇的插入突变。结论BCP和PreC变异可使HBeAg阴转。

原发性肝癌患者乙型肝炎病毒前C区联合基本核心启动子变异的分析

目的:研究原发性肝癌患者乙型肝炎病毒前C区联合基本核心启动子变异情况及与基因型的关系。方法:收集乙型肝病毒感染者血清132份,HBVDNA均阳性,用半巢式聚合酶链反应扩增HBV前C及C基因部分片段,产物纯化后直接测序,检测前CA1896联合BCPT1762/A1764变异。用S基因PCR-RFLP方法确定HBV基因型。结果:乙型肝炎病毒前C区联合基本核心启动子变异在原发性肝癌组的阳性率为41.18%(14/34),显著高于慢性肝病组的11.22%(11/98)(P<0.01)。前C A1896联合BCP T1762/A1764变异在B基因型检出率与C基因型相比,差异无显著性(P>0.05)。结论:乙型肝炎病毒前C区联合基本核心启动子变异与原发性肝癌关系密切,与基因型无相关性。

132例乙型肝炎病毒感染者基本核心启动子变异分析

目的研究乙型肝炎病毒（HBV）感染者基本核心启动子（BCP）变异情况。方法收集HBV感染者血清标本132份（HBVDNA均阳性），用半巢式聚合酶链反应扩增HBVC基因部分片段，产物纯化后直接测序，检测BCPT1762／A1764变异。用S基因错配聚合酶链反应（PCR-RFLP）法确定HBV基因型。结果51例乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性患者BCPT1762／A1764双变异检出率为27．45％，81例HBeAg阴性患者BCPT1762／A1764双变异检出率为62．96％，两组比较，差异有高度显著性（χ^2=15．79，P=0．00）。BCPT1762／A1764双变异的HBV感染者B基因型检出率为33．85％，明显低于C基因型的检出率66．15％（χ^2=24．25，P=0．00）。结论HBV感染者普遍存在BCPT1762／A1764双变异，以C基因型感染者多见。

焦磷酸测序技术检测HBV基本核心启动子变异的研究

目的建立HBV基本核心启动子(BCP)区变异的快速检测方法。方法采用焦磷酸测序(pyrose-quencing)技术,设计一对引物,其中一条经生物素标记,PCR扩增产物含HBVBCP A1762T/G1764A双突变的区域,借用生物素包被葡聚珠纯化单链PCR产物,设计一条测序引物,运用焦磷酸测序技术对A1762T/G1764A两个变异点进行变异分析。通过对已知变异类型的HBV分离株进行测定分析,评价所建立方法的检测敏感性和特异性。结果PCR扩增后,可在2 h内得到A1762T/G1764A两个变异点的突变情况。所建立方法的检测灵敏度达到HBV-DNA血清中的含量为103copies/ml;在所分析的HBV BCP区均可检测出变异株、非变异株及混合株,且所检测的结果与直接测序方法结果符合率为95%。结论Pyrosequencing技术用于检测病毒基因突变有高通量、自动化程度高和结果准确等特点,适用于对HBV BCP区突变进行快速高通量检测。

愈肝颗粒治疗慢性乙型肝炎基本核心区启动子变异患者的疗效观察

目的:观察中药制剂愈肝颗粒治疗慢性乙型肝炎（CHB）基本核心区启动子（BCP）变异患者的疗效。方法:用微孔板杂交法和酶联免疫吸附试验联合检测乙型肝炎病毒（HBV）BCP变异,变异阳性组（简称P组,46例）和变异阴性组（简称N组,69例）。所有患者均给予愈肝颗粒治疗,观察患者治疗前后临床表现及实验室有关指标。结果:治疗结束后,两组患者症状积分显著减低,血清ALT、TBiL水平明显下降。P组HBeAg阴转率（60％）显著高于N组（30％,P<0.05）,而HBV-DNA阴转两组比较差异无显著性,两组综合疗效相似。结论:愈肝颗粒能够显著改善CHB患者的症状,降低血清ALT和TBiL水平,同时具有抗HBV作用,且对于BCP变异株感染与野生株感染同等有效。

慢性乙型肝炎45例HBV基本核心启动子变异及HBV-DNA定量检测

采用聚合酶链反应 -酶联免疫吸附法检测 4 5例慢性乙型肝炎乙肝病毒基本核心启动子 (HBV-Bcp)变异及 HBV- DNA定量 ,结果 HBV - Bcp变异阴性组 HBV- DNA定量值明显低于 HBV- Bcp变异阳性组 (P<0 .0 5 ) ,提示 HBV- Bcp变异可促进乙肝病毒繁殖 ,对慢性乙型肝炎患者检测 HBV- Bcp变异有一定的临床意义。

儿童慢性乙型肝炎患者HBV前C/基本核心启动子区基因变异特点研究

目的探讨慢性乙型肝炎(慢乙肝)患儿HBV前C(procore, PC)/基本核心启动子(basic core promoter,BCP)区的变异特点。方法收集符合慢乙肝和肝硬化诊断标准的患儿血清166例。采用DNAout方法提取血清HBV DNA;巢式PCR方法扩增HBVPC/BCP区序列,PCR产物纯化后直接测序。分析HBVPC/BCP区相关位点变异情况。结果 166例患儿中,HBV B基因型的患儿占比20.83%,HBV C基因型的患儿占比79.17%。在感染HBV B基因型的患儿中,乙型肝炎(乙肝)肝硬化患儿与慢乙肝患儿的HBV DNA水平无明显差异,但前者G1899A位点突变率高于后者。在感染HBV C基因型的患儿中,与慢乙肝患儿相比,乙肝肝硬化患儿发生A1762T/G1764A、G1896A突变的比率明显升高且ALT水平较高。结论 HBV C基因型,ALT水平升高,发生A1762T/G1764A,G1896A位点变异的患儿,更容易发展为乙肝相关肝硬化。

江苏省常州市乙型肝炎病毒基因分型与基本核心启动子突变分析

近年来大量研究表明乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）基因型与乙型肝炎的临床表现、治疗及预后密切相关。变异是生物适应环境生存的重要方式，HBV具有较高的变异性，其中基本核心启动子（basecorepromoter，BCP）A1762T／G1764A双位点突变是HBV变异的重要方式之一，与重症肝炎、肝硬化和肝癌的发生密切相关，本研究旨在分析HBV基因分型与基本核心启动子A1762T／G1764A突变的临床特点及相关性，为临床优化治疗乙型肝炎提供依据。

乙型肝炎病毒基本核心启动子T^(1762)A^(1764)联合突变的临床意义

目的 :研究乙型肝炎患者乙型肝炎病毒 (HBV)基本核心启动子 (BCP) T1 76 2 A1 76 4联合突变情况及其临床意义。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)与限制性长度片段多态性分析 (RFL P)相结合 ,检测 130例乙型肝炎患者 BCP区核苷酸 (nt) 176 2碱基 A→ T和 176 4碱基 G→ A联合突变。结果 :HBe Ag(+)和 HBe Ab(+)两组患者中 BCP T1 76 2A1 76 4联合突变率的不同频率分别为慢性乙型肝炎患者 (Chronic hepatitis B,CHB) 4 0 .0 %和 85 .7% ,无症状携带者(Asym ptom atic carrier,ASC) 2 2 .2 %和 6 5 .0 % ,献血员为 5 %。BCP T1 76 2 A1 76 4双点联合突变组 HBV- DNA≥ 10 5cps/ml检出例数 81例 (96 .4 % ) ,非突变组 HBV- DNA≥ 10 5cps/ml检出例数 2 5例 (5 4 .3% )。结论 :BCP T1 76 2 A1 76 4联合突变与乙型肝炎的发生、发展以及预后有关 ,可能是 CHB与 ASC患者 HBe Ag(- )的原因之一 ,可促进乙肝病毒繁殖。对慢性乙型肝炎患者检测 HBV BCP T1 76 2 A1 76

乙型肝炎病毒基因型对乙型肝炎病毒变异的影响

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因型对病毒前核心区(前C区,nt1896)及基本核心启动子(BCP,nt1762/1764)变异的影响。方法416例血清HBsAg阳性、HBVDNA定量大于1.0×104拷贝/ml的患者,采用微流基因芯片检测HBV基因型、前C区及BCP变异。结果416例HBV感染者中406例有基因分型结果:B型20.9%、C型65.9%、BC混合型10.8%,10例患者未分出基因型。302例为HBeAg(-)且HBVDNA(+)患者,其中248例(82.12%)有前C区或BCP变异,41.06%为前C区变异,31.12%BCP变异,2种同时变异为9.94%。B型患者前C区变异率为22.9%(20/87),与C型患者前C区变异率39.4%(108/274)及B、C混合型变异率40.0%相比均有显著差异(P<0.01)。在BCP变异及双变异,C型患者变异率均大于B型患者,但差异无统计学意义(P>0.05)。B、C混合型患者前C区及BCP变异率与C型相似。结论HBV基因型可影响病毒前C区及BCP变异,以C型为著。

原发性肝癌与乙型肝炎病毒基本核心启动子和前C区基因变异的相关性

目的 研究原发性肝癌（PLC）与HBV基本核心启动子（BCP）和前C区基因变异的相关性。方法对144例HBsAg（＋）PLC患者的血清进行HBV标志物和HBVDNA检测，对HBeAg（-）但HBVDNA（＋）的样本再采用实时荧光定量PCR进行前C区和BCP区基因变异检测。随机选取120例慢性乙型肝炎（CHB）患者作为对照组。结果PLC患者血清HBV标志物中HBeAg（＋）46例，占31．94％，HBeAg（-）98例，占68．06％。在98例HBeAg（-）患者的血清中，HBVDNA（＋）56例，占57．14％，其中前C1896变异43例，占76．79％，BCP1762／1764基因变异50例，占89．29％，共同变异38例，占67．86％。PLC患者中的前C1896和BCP1762／1764基因变异率高于CHB患者，且差异有统计学意义（X^2值分别为9．36和5．77，P值均〈0．05）。结论PLC的发生可能与前C区和BCP区基因变异有关。

儿童乙型肝炎病毒基本核心启动子变异的检测及其意义

目的 探讨儿童慢性乙肝病毒基本核心启动子 (BCP)基因双变异 (nt176 2A→T和nt176 4G→A)的临床特征和意义。方法 采集空腹肘静脉血 ,分离血清备检 ;以金标层析方法检测乙肝病毒 (HBV)免疫标志物 ,以微板核酸探针杂交技术检测HBVBCP区双位点变异及其DNA定性 ;将研究对象分为轻、中、重 3组 ,分别统计各组BCP双变异阳性率 ,分析BCP区双变异与血清HBeAg的相关性。结果 慢性乙肝患儿HBVDNA检测阳性率82 98% (78/ 94 ) ,HBeAg阳性组显著高于阴性组 (P <0 0 0 1) ;BCP区双变异阳性率为 15 96 % (15 / 94 ) ,HBeAg阳性组明显低于阴性组 (χ2 =5 36 ,P <0 0 5 ) ;轻、中、重 3组HBVBCP变异率分别为 4 4 4 %、13 79%和 4 5 0 0 % ,中、重两组比较差异有显著性 (χ2 =5 91,P <0 0 5 )。结论 儿童慢性乙肝病毒BCP双变异检出率血清HBeAg阴性组明显高于HBeAg阳性组 ,此处双变异减少了但未完全终止HBeAg的产生 ;儿童慢性乙肝HBVBCP双变异发生率与病变程度呈正相关 ,检测BCP区双变异对病情预后的判断有一定参考价值。

乙型肝炎病毒BCP变异与拉米夫定治疗后HBVDNA反弹关系的研究

目的探讨HBV BCP变异与拉米夫定抗病毒治疗后HBVDNA反弹的关系。方法应用PCR-序列分析法,检测拉米夫定治疗(100mg/d)1年以上,达到病毒学应答半年以上,再出现HBV DNA反弹(HBV DNA拷贝数≥1.0×104拷贝/ml)的27例乙型肝炎患者(治疗组),以及19例从未用过抗病毒治疗患者(对照组)的HBV C区基本核心启动子(BCP)的突变位点。结果1.治疗组HBVDNA反弹的27例BCP(A1762T+G1764A)变异检出率44.44%(12/27)高于对照组26.32%(5/19),但无统计学差异,P>0.05。2.4例HBVDNA反弹患者治疗前未检出BCP(A1762T+G1764A)变异,治疗后有2例检出BCP(A1762T+G1764A)变异。结论BCP(T1762/A1764)变异可能与拉米夫定治疗后HBVDNA反弹有关。

HBV基本核心启动子区和前C区变异与肝病进展的关系

乙型肝炎病毒（HBV）感染是我国严重的卫生健康问题，目前大约有1．7亿慢性HBV感染者，约占世界慢性HBV感染者的一半。HBV基因组结构为部分环状双链DNA，全长约3．2kb，其核心启动子对于HBV的复制和形态构成发挥了关键性作用。

内江市东兴区乙型肝炎病毒基因型、基本核心启动子和前C区变异分析

目的了解内江市东兴区乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)慢性感染者中的HBV基因型和基本核心启动子(basal core promoter,BCP)、前C(Precore,PC)区变异。方法从慢性HBV感染者血清标本中提取病毒DNA,进行核苷酸测序,构建进化树确定基因型,分析BCP和前C区位点变异。结果S基因序列进化树分析显示,64份标本为B基因型,7份为C基因型,1份为I基因型;获取的53份BCP和PC序列标本中,25份标本发生A1762T/G1764A或G1896A变异;7份C基因型标本中6份发生A1762T/G1764A变异;B基因型标本以G1896A变异为主,并与A1762T/G1764A联合变异,HBeAg阳性组和阴性组之间G1896A和A1762T/G1764A变异率有差异(P均<0.05)。其他包括HBeAg前体启动子变异、1846位点核苷酸缺失等。结论内江市东兴区慢性HBV感染者以B基因型感染为主,1例为I基因型。B基因型HBV以G1896A变异最常见,并与A1762T/G1764A联合变异,C基因型HBV更容易发生A1762T/G1764A变异;BCP区的A1762T/G1764A变异和PC区的G1896A变异与疾病严重程度、肝硬化和肝癌发生相关。通过对HBV基因型和变异分析,能为病情诊断和治疗提供帮助。

福建省慢性HBV感染者HBV基因S区、基本核心启动子区和前C区基因变异特征分析

为研究福建省慢性HBV感染者HBV基因多样性及变异规律,了解该人群HBV-DNA的病毒学特征。收集慢性HBV感染者血清标本,通过巢式PCR法扩增其HBV基因序列,比对NCBI数据库中标准基因型序列,分析HBV基因S区,基本核心启动子区（BCP）及前C区的序列变异情况,并对这些变异可能造成的病毒抗原表达,疫苗逃逸,患者病症改变等情况进行探讨。最终成功扩增82例HBV全长基因序列,其中B基因型56例,C基因型26例。基因组特定功能区序列分析发现慢性HBV感染者HBV基因在S区（23.2%）、BCP区（61.0%）和前C区（29.3%）均出现了不同程度的变异。其中主蛋白（HBsAg）主要抗原决定簇a决定簇45.8%位点出现了变异,这些变异位点中包括与肝炎重症化及免疫逃逸密切相关的位点（aa126、aa129、aa145等）。位点G1896A（19.5%）,G1764A（11.0%）和A1762T（9.8%）依然是BCP/前C区的主要突变位点。而位点A1752G（25.6%）高突变率的出现在BCP区应引起关注。此外位点G1764A（χ2=5.742,P=0.030）、A1896G（χ2=14.392,P=0.000）以及A1762T/G1764A（χ2=7.289,P=0.012）的突变更容易发生在HBeAg阴性的样品中;而位点A1846T（χ2=11.882,P=0.003）、A1762T（χ2=6.561,P=0.038）和A1896G（χ2=6.958,P=0.030）的突变与HBV-DNA的病毒载量存在一定相关性。总之,福建省慢性HBV感染者在HBV不同基因功能区域均存在不同程度的变异,一些与HBeAg表达情况、HBV-DNA载量、疫苗免疫逃避及肝细胞癌发生具有相关联的变异位点已经出现,BCP区A1752G位点的高频率出现应值得关注,对于这些变异位点的患者应加强监测。