乙肝患者外周血单个核细胞中乙肝病毒复制中间体RNA与乙肝病毒DNA相关性的研究

采用逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)技术检测乙肝患者外周血单个核细胞 (PBMCs)乙肝病毒复制中间体RNA(HBVRNA) ,6 0例乙肝患者 5例PBMCs中HBVRNA阳性 ,2 6例PBMCs中HBVDNA阳性 ,2 7例血清HBVDNA阳性 ;PBMCsHBVDNA阳性患者中有 4例PBMCsHBVRNA阳性 ,血清HBVDNA阳性患者中有3例PBMCsHBVRNA阳性 ;17例血清HBeAg阳性患者中有 4例PBMCsHBVRNA阳性。血清HBeAg、HBVDNA及PBMCs中HBVDNA阴性患者 ,其PBMCsHBVRNA仍可能阳性 。

乙肝病毒RNA复制子疫苗与DNA疫苗对小鼠免疫效率的比较

为建立并获取更有效的乙肝疫苗,本实验通过将所构建的HBVRNA复制子疫苗和DNA疫苗分别免疫小鼠,检测细胞免疫与体液免疫的效果。结果表明,以pSFV为基础构建的疫苗载体免疫小鼠后采集的血清中抗体效价不随免疫剂量的增加而提高,在较低剂量免疫的时候,RNA复制子疫苗所产生的抗体效价优于DNA疫苗。并且RNA复制子疫苗在以较低剂量免疫后脾细胞CTL活性高于DNA疫苗。本研究证明HBVRNA疫苗比DNA疫苗表达效果更好,安全性更高,更具有应用前景。

不对称PCR制备单链探针检测登革Ⅱ型病毒复制型RNA和复制中间体RNA

登革病毒是具包膜的单股正链RNA虫媒病毒 ,病毒的复制过程发生在感染细胞胞浆 ,复制型 (RF)RNA是病毒半保留复制的循环模板 ,复制中间体 (RI)RNA的合成则是病毒复制所必需的。经RT PCR获得的DNA模板进行不对称PCR扩增 ,当限制性引物终浓度为 2 5 0nmol L ,两引物比例为 1 0 0∶1时 ,即得到不对称PCR的预计单链和双链DNA产物。此单链产物用于标记探针进行核酸杂交。

抑制乙肝病毒复制药物——拉咪夫定

拉咪夫定(Lamivudine,Epivir,3-TC)属于2,3-二脱氧3-硫代胞嘧啶的左旋体,化学名为(2R-顺)-4 氨基-1-[2-羟甲基]-1,3-噁硫烷-5-基](1H)嘧啶-2-酮;在中国注册商品名为贺普丁,该药原来由Biochem pharma公司研制,后转让给英国Glaxo公司开发,1995年获准在美国上市。

RNA干扰的抗病毒作用：阻止乙型肝炎病毒复制的新策略

近年来，科学家们发现了一种普遍存在的重要的基因调节机制，被称为RNA沉默或者是RNA干扰(RNAi)。虽然RNAi基因调节的机制并没有完全搞清楚，但科学家已将研究的重点放在治疗作用上，特别是抗病毒作用。本文介绍了近年利用小干扰RNA(siRNA)阻止乙肝病毒复制的多个成功的体内和体外研究。这些研究使我们离使用RNAi作为一种抗病毒治疗的手段越来越近。

RNA干扰抑制HepG_2-N10细胞系中HBV基因表达及复制

目的:评估以U6启动子作为启动序列(pSilencer2.0-U6)载体介导的小RNA干扰片段在培养细胞株中抑制HBV复制的效应.方法:将针对HBV基因组不同区域(S,X及C区)的核苷酸序列插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒(分别为pS,pX及pC)载体转染入HepG2-N10细胞株(可稳定表达HBsAg、HBeAg及adw2亚型Dane颗粒)中.以ELISA法检测病毒抗原,以逆转录-聚合酶链反应法(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)检测病毒mRNA,并以荧光定量PCR法检测分泌入培养基的共价闭合环状DNA(covalentclosedcircularDNA,cccDNA).结果:质粒载体介导的RNA干扰能明显抑制培养基中HBsAg及HBeAg的表达.并且RT-PCR法检测显示病毒mRNA也被降解了,从而减少了蛋白表达及病毒逆转录复制的模板.荧光定量PCR法检测显示分泌入培养基的cccDNAs明显下降(HBVDNAlog10:pS:4.00±0.13;pC:4.08±0.10;pX:4.28±0.06;pN:5.05±0.07;HepG2-N10:4.74±0.06;HepG2:<2.70).结论:RNA干扰能抑制HBV基因表达及病毒复制,并且RNA干扰可能为HBV的治疗带来巨大的变化.

HBV RNA复制子疫苗、DNA疫苗在BHK-21细胞中表达情况的比较

为建立更有效的乙肝疫苗,通过将所构建的HBVRNA疫苗和DNA疫苗分别转染BHK-21细胞,并比较其在细胞中表达情况及细胞凋亡现象。以pSFV为基础构建的疫苗载体的表达效率高于以pcDNA3.1为基础构建的疫苗载体,pSFV为基础构建的疫苗载体出现细胞凋亡的现象。HBVRNA疫苗比DNA疫苗表达效果更好,安全性更高,更具有应用前景。

靶向乙型肝炎病毒的外源性microRNA的构建及作用

【目的】探讨靶向乙型肝炎病毒的外源性microRNA(amiRNA)的构建及其抑制HBV复制的作用。【方法】应用Invitrogen公司miRNA在线设计软件(BLOCK-iT^(TM) RNAi Designer)针对HBV基因设计4条amiRNA序列;构建amiRNA真核表达质粒,Lipofectamine2000转染至人肝癌细胞株HepG2.2.15;荧光定量PCR检测HBV-DNA,ELISA检测HBsAg和HBeAg表达水平。【结果】设计合成的4条amiRNA均可下调培养体系中HBV-DNA水平以及HBsAg和HBeAg水平,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。其中以miR3抑制HBV-DNA复制的效果最为显著。【结论】靶向HBV基因适当位点设计合成的amiRNA在体外可以有效抑制HBV的复制。

链特异性RT-PCR方法检测口蹄疫病毒负链RNA

旨在建立一种快速、灵敏、特异的检测口蹄疫病毒在复制过程中产生的负链RNA的方法。根据口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)病毒5'-非编码区(5'-UTR)基因序列,设计了5条引物链特异性RT-PCR引物,建立检测口蹄疫病毒负链RNA的链特异性RT-PCR方法。提取FMD病毒RNA,应用设计的正向引物T1-H1做反转录引物,经反转录和RNA酶A消化后,再经两轮链特异性PCR扩增,可特异性地检测FMDV在复制过程中产生的负链RNA。所建立的检测口蹄疫病毒负链RNA的链特异性RT-PCR方法是一种可靠的方法,在确定细胞培养物和动物感染FMDV的病毒复制和了解病毒的致病性研究中具有应用前景。

MiR-122对乙肝病毒复制影响的研究

目的探讨微型RNA122(mi R-122)在细胞水平对乙肝病毒(HBV)复制的影响。方法将mi R-122的表达载体p SU6-mi R-122和HBV感染性克隆p HBV1.3分别转染Hep G2.2.15和Hep G2细胞;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中HBs Ag和HBe Ag含量的变化,荧光定量PCR法检测细胞HBV DNA拷贝数的变化。结果mi R-122在Hep G2.2.15细胞和Hep G2细胞中均能够抑制HBs Ag和HBe Ag的表达,还可明显降低HBV DNA的拷贝数。结论mi R-122能够在细胞水平抑制HBV的复制。

RNA干扰作为一种病毒性肝炎治疗手段的可能性（下）

若干研究已经探究了使用RNAi作为一种潜在的抗HCV感染干预治疗的可能性。作为正义的单链RNA病毒，通过负义的复制中间体提供了该技术的可能性，至少在理论上，RNAi能够清除来自受染细胞的病毒基因组、复制形式和mRNA种类并由此消除HCV感染。然而，在HCV复制的培养中缺乏适合的系统，使证明siRNA抑制病毒复制子RNA的复制可能性的研究受到了限制。在若干研究中已经证明了在NS3和NSSBORFs中siRNA对抗不同位点的作用。通过定量RT～PCR证明了在隐匿HCV复制子的细朐中HCV转录水平有21-23倍的降低。

脊髄灰质炎病毒的分子生物学

病毒结构简单,含有的遗传信息少,提供的产物易识别,是研究基本生命过程:遗传信息的复制及蛋白质转译的理想有机体。又因为病毒仅借助一个细胞结构中的臬些特殊成分进行复制,所以它又是探查细胞并研究其组分功能的极好工具。本文就有关脊髓灰质炎(小儿麻痹症)病毒和涉及到的细胞机理知识作一介绍。

几种药物对2.2.15细胞抗—HBV效果观察

开发有效的抗乙肝病毒药物一直因缺乏可靠的体外筛选药物系统而受到阻碍。为解决此问题,Sells等人用人乙肝病毒DNA成功转染了Hep—G2细胞,此细胞株定名为2.2.15细胞,可产生高水平的病毒复制中间体、成熟的Danes颗粒及病毒抗原。

RNA聚合酶复合物晶体结构获解析

中科院武汉病毒所研究员龚鹏带领研究小组解析了RNA病毒基因组复制和转录中重要物质——RdRP转位中间体的晶体结构。这将为相关抗病毒研究提供重要依据。相关成果日前发表于美国《国家科学院院刊》。