鸡卵黄乙肝病毒特异性转移因子的制备及鉴定

目的制备鸡卵黄乙肝病毒特异性转移因子(EYHBV-TF),并检测其免疫活性。方法用乙肝疫苗免疫母鸡,收集鸡蛋,取卵黄进行透析,制备EYHBV-TF,参照药典要求,采用光谱法、高效液相色谱法(HPLC)、Lowry法等检测其理化性质。采用白细胞粘附抑制法(LAI)和迟发型皮肤超敏试验(DTH)检测特异免疫活性。结果EYHBV-TF是一种可透析、含有18种氨基酸、相对分子质量小于12000的小分子物质,其多肽含量为1·2mg/ml,核糖含量为152·94μg/ml,pH6·9±0·5,蛋白反应阴性,最大紫外吸收光谱在270nm处。该EYHBV-TF能明显抑制小鼠白细胞粘附(P<0·01),并能诱导小鼠跖趾部皮肤的迟发型超敏反应(P<0·01),与猪脾淋巴细胞制取的乙肝特异性转移因子(PSHBV-TF)检测结果接近(P>0·05)。而正常卵黄提取液组、非特异性转移因子和甲肝抗原(HAAg)对照组均不能表现出这两种效应(P>0·05)。结论EYHBV-TF与PS-TF主要理化性质和作用相类似,均具有乙肝抗原特异性细胞免疫活性。

体外免疫法制备乙肝病毒特异性转移因子的工艺研究

目的:优化体外免疫法制备乙肝病毒特异性转移因子的工艺。方法:采用猪脾细胞与植物血凝素、乙肝疫苗共同培养,收集致敏细胞在组织捣碎机中破碎,用蒸馏水1∶1稀释,-25℃反复冻融6次,自来水融化后装入透析袋中,用1∶4的蒸馏水作透析外液,于4℃透析48 h,透析液即为乙肝病毒特异性转移因子(HBV-STF)。结果:本品为黄色澄明液体,多肽含量0.493 g/L,核糖含量0.372 g/L,蛋白质反应阴性,紫外光谱在253 nm有最大吸收,E260/E280=2.47。最佳PHA剂量为100 m g/L,最佳乙肝疫苗剂量为20μg/L。结论:用体外免疫法制备乙肝病毒特异性转移因子工艺稳定,制备的转移因子符合质量标准,具有对乙肝病毒抗原的特异性。

乙肝病毒特异性转移因子联合胸腺素对乙型肝炎病毒标志物阴转的疗效观察

乙肝病毒特异性转移因子联合胸腺素对乙型肝炎病毒标志物阴转的疗效观察吴树荣，周志华（番禺市人民医院传染科广东５１４０００）关键词乙型肝炎病毒特异性转移因子，胸腺素，联合用药中图号Ｒ５１２．６０５目前，抗病毒疗法已被公认为治疗乙型肝炎的主要方法。近几年来...

乙肝病毒特异性转移因子治疗慢性乙型肝炎的临床研究

目的 评价乙肝病毒特异性转移因子治疗慢性乙型肝炎的临床疗效。方法 选择慢性乙型肝炎 86例 ,随机分为两组。对照组 40例 ,应用常规保肝降酶疗法 ;研究组 46例 ,在保肝降酶疗法的基础上加用乙肝病毒特异性转移因子。结果 研究组HBeAg及HBVDNA的阴转率显著高于对照组 (P <0 0 5 ) ,抗 HBe阳转率亦显著高于对照组 (P <0 0 1)。结论 乙肝病毒特异性转移因子用于治疗慢性乙型肝炎 ,可以改善患者的乙肝病毒病原学指标。

阿糖腺苷联合乙肝特异性转移因子治疗慢性乙肝病毒携带者14例

我科自1989-1990年采用广东石岐制药厂生产阿糖腺苷与西安医学院病毒研究室提供乙肝特异性转移因子，联合治疗慢性乙肝病毒携带者14例，取得一定的疗效，现将其近期疗效报道如下：

多对型特异性引物巢式PCR检测湖南省乙肝病毒基因型

目的:采用多对型特异性引物,通过巢式PCR法检测湖南省乙肝患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况.方法:根据从前S1基因到S基因中的保守序列设计出10条内外引物,并将其中8条内引物分成A、B两组,分别扩增A、B、C和D、E、F型HBV,然后将第2轮PCR的两组产物分别用3%琼脂糖进行电泳,根据PCR产物片断大小直接判定HBV基因型.与目前常用的PCR-RFLP法进行了比较,并做重复试验以证实该方法的可靠性和准确性.用此法检测了220例湖南籍慢性乙肝血清中的HBV基因型,以了解湖南人群的HBV基因型分布情况.结果:多对型特异性引物巢式PCR与PCR-RFLP法的检测结果完全一致,重现率(100%);湖南人群HBV基因分型结果为B型190例(86.4%)、C型30例(13.6%).结论:这种新的巢式PCR分型法能清晰直观地辨别HBV基因型,结果准确可靠.用此法证实了湖南人群的HBV优势基因型以B型为主,C型次之.

乙型肝炎病毒特异性转移因子制备方法的改进

我室近年来用ＨＢｓＡｇ阳性胎盘为原料制备了乙型肝炎病毒特异性转移因子（ＨＢＶ－ＳＴＦ），并对其有关性质进行了研究［１～３］。在制备乙型肝炎病毒特异性转移因子的具体过程中，发现ＨＢＶＳＴＦ的制备质量与所加匀浆液、冻融时间及透析液量有很大关系，现将此研...

乙肝特异性转移因子的制备及鉴定

从HBsAg阳性患者血清中提取纯化的HBsAg和Dane颗粒,经灭活后免疫猪,从猪脾脏和白细胞透析物中制备出乙肝特异性转移因子(TF_(HBV))。经一系列理化性状及药典规定项目的检测均符合生物制品标准,用^(51)Cr白细胞粘附抑制实验(^(51)Cr-LAI)证实该TF_(HBV)具有抗原特异性,体外能转移对HBV的免疫性。

乙肝特异性转移因子治疗慢性乙肝29例疗效观察

对29例慢性乙肝患著用乙肝特异性转移因子(TF_(HBV))进行治疗。结果表明对照组、非特异性转移因子(TF_n)治疗组以及TF_(HBV)治疗组,肝功能和HBV感染指标均有改善或阴转,其效果依次为TF_(HBV)>TF_n>对照。在感染指标阴转率上经X^2检验,HBsAg3组之间无显著差异,而HBeAg、抗-HBc、pre-S_1以及HBV DNA3组之间却有显著差异。

抗乙肝特异性转移因子联合胸腺肽穴位注射治疗慢性乙型肝炎40例疗效观察

目的 :比较抗乙肝特异性转移因子联合胸腺肽穴位注射与干扰素肌注治疗慢性乙型肝炎的临床疗效。方法 :治疗组以抗乙肝特异性转移因子和胸腺肽进行穴位注射 ,对照组用干扰素 30 0万u肌注。结果 :治疗组中HBsAg、HBeAg ,HBV DNA转阴率分别为 12 5 %、 5 2 5 %、 5 2 5 % ,总有效率为 90 % ;对照组中相应为 12 %、5 6 %、 5 2 5 %。经统计学处理 ,两者无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :抗乙肝特异性转移因子联合胸腺肽穴位注射 ,治疗慢性乙型肝炎 ,有较好的疗效 ,且副作用小。

不同原料制备乙型肝炎病毒特异性转移因子的研究

目的 为临床治疗乙肝提供一种安全、有效的免疫调节剂。方法 用组织匀浆、反复冻融破碎细胞、透析灭活和过滤除菌等技术 ,获得乙型肝炎病毒特异性转移因子 (HBV STF) ;用Lowry法测多肽含量 ;用苔黑酚显色法测定核糖核酸 (RNA)含量 ,用氨基酸分析仪分析测定HBV STF的水解氨基酸总含量。结果 来源于HbsAg阳性胎盘和HbsAg阳性血液的多肽含量分别为 0 4 9± 0 0 14和 0 2 9± 0 0 13(P <0 0 1) ,RNA含量分别为 0 34± 0 0 10和 0 2 2± 0 0 0 8(P <0 0 1)氨基酸总含量为 198 6± 1 5 6 2和 12 3 4± 1 5 2 1(P <0 0 1)。结论 用HbsAg阳性胎盘制备的乙型肝炎病毒特异性转移因子质量优于HbsAg阳性血液。

大鼠神经母细胞特异性转移因子基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

背景:研究表明,神经母细胞特异性转移因子(ASCL1)是神经发育过程中的关键调控因子,因此通过对成体细胞进行ASCL1基因修饰,有可能将成体细胞转分化为神经细胞,为视神经再生治疗提供新策略。目的:构建携带鼠ASCL1基因的重组腺病毒表达载体,获得重组腺病毒pA d-rat-ASCL1-EGFP,以期为进一步研究ASCL1基因的功能奠定基础。方法:用XhoⅠ和EcoRⅠ将目的基因ASCL1及带有增强型绿色荧光蛋白表达盒的腺病毒穿梭载体p Yr-adshuttle-4进行双酶切;回收酶切质粒的目的片段进行连接,产物转化至DH5α感受态;提取质粒酶切鉴定正确后测序。然后通过LR体外同源重组将rat-ASCL1表达框构建至pA d/PL-DEST腺病毒表达载体,PacⅠ酶切线性化后用脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增,采用PCR法对重组腺病毒进行鉴定,TCID50法测定病毒滴度,荧光显微镜观察病毒感染效率。结果与结论:通过酶切鉴定和DNA测序鉴定,证实重组腺病毒载体pA d-rat-ASCL1-EGFP构建正确,PCR鉴定扩增出862 bp的目的条带,TCID50法测定病毒滴度为2×1010pfu/mL。荧光显微镜观察HEK293细胞的病毒感染效率为80%以上。提示含ASCL1基因的重组腺病毒载体构建成功,获得的病毒具有高滴度,高效感染率,为下一步进行ASCL1基因功能研究和视神经再生治疗研究奠定了基础。

巨细胞病毒特异性转移因子对其活动性感染孕妇的防治

①目的研制人巨细胞病毒特异性转移因子（ＨＣＭＶ－ＳＴＦ），并试用于ＨＣＭＶ－ＩｇＭ和（或）ＩｇＡ阳性孕妇，观察其临床防治效果。②方法将ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株病毒感染人二倍体细胞，制备抗原，免疫成猪，待猪的免疫指标明显提高并稳定后，取脾及淋巴结，制备ＨＣＭＶ－ＳＴＦ，并用于治疗ＨＣＭＶ－ＩｇＭ和（或）ＩｇＡ阳性孕妇，采用间接ＥＬＩＳＡ法测血清ＨＣＭＶ－ＩｇＭ和ＩｇＡ，同时对羊水、脐血和婴儿尿做ＰＣＲ检测。③结果制备的ＨＣＭＶ－ＳＴＦ符合肌肉注射用药制剂标准，同时具有明显的促进ＬＡＣＡ小鼠脾细胞分化增殖效应。临床疗效验证表明，治疗组和对照组其血清ＩｇＭ及ＩｇＡ转阴率分别为７４．００％和６．６７％，两组比较差异有显著性（χ２＝１９１．１２，Ｐ＜０．０１）；治疗组和对照组先天性感染率分别为８．０４％和２２．２２％，两组比较差异有显著性（χ２＝９．９５，Ｐ＜０．０１）。④结论ＨＣＭＶ－ＳＴＦ对孕妇活动性巨细胞病毒感染及胎儿先天性感染有明显的防治作用。

特异性标签序列快速鉴定乙肝病毒B、C基因型的方法及应用

目的建立一种乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)基因分型方法,并观察其临床应用效果。方法利用HBV大S区的型间特异性位点密集序列,建立了一种直接多重PCR方法,并对重庆地区250例临床样本进行应用性观察。结果使用该方法对重庆地区250例随机临床HBV阳性血清进行了检测,结果显示B基因型占73.6%(184/250),C基因型占16.4%(41/250),BC混合型占6.4%(16/250),总检出率为97%左右,与重庆周边地区HBV基因型的区域分布具有一致性。结论该方法能够快捷而准确地鉴定乙肝病毒B、C基因型。

抗流感病毒特异性转移因子的制备及性质

转移因子（transfer factor，TF）是一种能转移和调节免疫反应的小分子物质。目前，多种动物源性的非特异性TF已大量应用于人的临床上，并取得了良好的疗效。而特异性TF的研究的开发也在世界范围内蓬勃开展，因为特异性TF比非特异性TF有着更高效的应用前景，它能够将特异性的细胞免疫功能从供者转移给受者。

乙肝病毒蛋白抗原表位特异性CTL体外扩增条件优化

目的优化乙肝蛋白抗原表位特异性CTL体外扩增条件。方法选择急性自限性HBV感染者外周血,分离PBMC,体外用乙肝蛋白抗原表位多肽特异性刺激,特定天数后收集细胞,用CD8抗体与MHC-I类分子HBV抗原肽四聚体进行染色流式检测,检测扩增后乙肝蛋白抗原表位特异性CTL在CD8阳性细胞群中所占的频率。结果1)在不同多肽浓度刺激下,当浓度在20 ug/mL时,所测得特异性CTL占PBMC中CD8+T细胞的频率达到最高峰;2)固定刺激多肽浓度,在不同的刺激天数获得的特异性CTL频率第10天时最高;3)在不同的细胞因子培养条件中,当加入的细胞因子IL-2,IL-7,IL-15组合时所获得的特异性CTL频率最高。结论在刺激肽浓度为20μg/mL,并加入适量的细胞因子(IL-2,IL-7,IL-15),刺激10天的条件下,所获得的乙肝蛋白抗原特异性CTL频率最高。

病毒特异性转移因子研究近况

本文综述了病毒特异性转移因子的制备、增强组分的纯化与分离、特异活性的检测、实验性治疗和临床应用的评价。

特异性主动免疫疗法治疗慢性乙肝病毒感染的疗效观察

目的 观察特异性主动免疫疗法治疗慢性乙肝病毒感染的疗效。方法 慢性乙肝病毒感染患者 12 0例 ,随机分为两组即A组 (特异性主动免疫疗法组 )和B组 (干扰素治疗组 ) ,A组应用含细胞因子的佐剂 1支和乙肝疫苗 30 μg ,每月肌肉注射 1次 ;B组应用α 干扰素 30 0万U ,隔日 1次肌肉注射 ,两组疗程均为 6个月。结果 疗程结束后慢性HBsAg携带者和慢性乙型肝炎HBsAg阴转者分别为 :A组 5例 ( 14 .71% )和 6例 ( 2 3.0 3% ) ;B组均为 0 ,两组差异显著 ,P <0 .0 5。结论 特异性主动免疫疗法可调节患者免疫功能 ,促使HBV复制指标阴转。

叶下珠复方胶囊合抗乙肝特异性转移因子治疗慢性乙型肝炎40例观察

目的 :观察叶下珠复方胶囊联合抗乙肝特异性转移因子治疗慢性乙型肝炎的疗效。方法 :治疗组用叶下珠复方胶囊每次 4粒 ,每天 3次 ;抗乙肝特异性转移因子 2 m g肌肉注射 ,每周 2次。对照组单用叶下珠复方胶囊每次 4粒 ,每天 3次。均治疗 6个月。结果 :治疗组总有效率 92 .5 % ,对照组总有效率 73.3% ,两组比较有显著性差异 (P<0 .0 5 )。但 HBe Ag、HBV- DNA阴转率治疗组分别为 5 5 .5 %、5 6 .2 % ,对照组分别为 4 4 .0 %、4 3.4 % ,两组比较无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 :叶下珠复方胶囊联合抗乙肝特异性转移因子可提高疗效 。

乙型肝炎病毒特异性转移因子制备方法的改进

[目的 ]进一步探索羊脾乙型肝炎病毒特异性转移因子的制备方法 ,以制备出更高效的乙型肝炎病毒特异性转移因子 .[方法 ]用乙型肝炎疫苗辅以佐剂对羊进行全程免疫 ,然后从羊脾中提取乙型肝炎病毒特异性转移因子 ,通过研究不同的冻融次数及透析液量等因素 ,观察其对乙型肝炎病毒特异性转移因子含量的影响 .[结果 ]乙型肝炎病毒特异性转移因子的制备质量与免疫佐剂加入与否、制备时冻融次数及透析液量有关系 .[结论 ]用改良的制备方法可获得更高质量的乙型肝炎病毒特异性转移因子 .