BAY41-4109对乙肝病毒衣壳组装的影响

乙肝病毒衣壳蛋白成功组装成衣壳二十面体的过程是病毒前基因组RNA逆转录形成成熟DNA的必要步骤。衣壳结构的轻微改变或破坏能对病毒子代传播产生巨大影响。应用透射电子显微镜研究发现小分子抗病毒化合物(heteroaryldihydropyrimidine,HAP)BAY41-4109在与衣壳蛋白二聚体摩尔浓度比达到1∶2时,能干扰乙肝病毒衣壳蛋白组装成衣壳二十面体。在BAY41-4109的作用下,衣壳蛋白发生错误组装,形成不规则球体、平面片状结构和管状结构。应用图像处理技术对管状结构进行分析,发现它是衣壳蛋白重新装配形成的具有螺旋对称性的规则组装体,衣壳蛋白按六角晶格方式排列,其最小组成单位是衣壳蛋白的二聚体。

登革病毒衣壳蛋白在大肠杆菌中的表达及其自组装活性的研究

采用高保真RT-PCR自登革2型病毒43株基因组RNA中扩增全长C基因及缺失羧基端Cv片段,分别构建可表达C及Cv的重组质粒pLEX-C和pLEX-Cv,转化E.coliGI724后用色氨酸诱导表达。经SDS-PAGE分析,表达的C及Cv蛋白相对分子质量分别约为12000和10000,分别约占菌体蛋白总量的19%和13%。Western印迹检测表明重组表达的C蛋白均可被特异识别登革病毒衣壳蛋白的单克隆抗体特异识别。表达的蛋白经过硫酸铵沉淀和蔗糖密度梯度离心后,通过琼脂糖凝胶电泳和负染电镜均未能检测到衣壳样颗粒的存在,说明登革病毒衣壳蛋白可能不具体外自组装活性。

乙型肝炎病毒核心蛋白赖氨酸位点K96对病毒衣壳组装的影响

通过构建突变型蛋白表达质粒,将乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitis B virus core protein, HBc)的赖氨酸位点K96突变为谷氨酰胺(Q)或精氨酸(R),以分别模拟HBc的持续性乙酰化状态以及去乙酰化状态,分析赖氨酸位点K96在病毒衣壳组装过程中的关键性作用;通过建立瞬时转染模型,将野生型及突变型核心蛋白表达质粒转染至细胞中,分别检测突变后的核心蛋白的表达水平和衣壳组装水平,比较分析不同突变对衣壳组装的影响。结果表明:阻断赖氨酸位点K96的乙酰化修饰能够抑制HBc的表达,并且显著降低病毒衣壳的组装水平;而赖氨酸位点K96的持续性乙酰化状态对HBc的表达和病毒衣壳组装水平没有显著影响。

干扰正常衣壳蛋白组装的小分子物质可发展成抗病毒制剂

已知乙型肝炎病毒(HBV)核衣壳由120个拷贝的衣壳蛋白二聚体组成,衣壳蛋白的微小改变会对子代病毒的活性产生极大的影响,因而衣壳的组装可能作为慢性乙型肝炎治疗的有效靶标。作者以bis-ANS〔5,5′-bis(8-phenylamino-1-naphthalenesul-fonate),5,5′-双(8-苯胺基-1-萘磺酸盐)〕为荧光探针,研究了bis-ANS与一种核衣壳蛋白缺失突变体(缺失C端34个氨基酸)Cp149_2的相互作用及bis-ANS对Cp149_2组装成衣壳的影响,并探讨了bis-ANS作为组装误导剂的特征。

二十面体病毒衣壳自组装的热力学参数

球状病毒衣壳采用二十面体对称。本文就二十面体病毒蛋白质骨架的自组装提出一个统计热力学模型。统计结果 表明病毒衣壳二十面体对称不是自由能最小化的结果,而是衣壳内部蛋白结构参数最优化的结果。

蓝舌病毒结构与组装机制研究进展

蓝舌病毒(Bluetongue virus,BTV)是一种以媒介昆虫为传播媒介侵染野生反刍动物和家畜的世界范围流行的病原微生物。BTV颗粒是由10个基因片段组成的双股RNA病毒,分别编码7个结构蛋白(VP1-VP7)和至少4个非结构蛋白(NS1、NS2、NS3/3a和NS4)组成的连续蛋白质层的复杂结构,BTV已被作为大型无囊膜dsRNA病毒研究的模型系统。近年来,通过反向遗传学(RG)、低温电子显微镜(Cryo-EM)、蛋白晶体结构解析等研究分析方法,为BTV病毒蛋白结构、病毒蛋白之间功能关系、病毒组装/拆卸等方面取得了相当大的研究进展,该文对BTV病毒衣壳蛋白结构、核心蛋白的组装、基因组RNA组装等方面机制进行了综述。

BAY41-4109对乙肝病毒衣壳组装的影响

乙肝病毒衣壳蛋白成功组装成衣壳二十面体的过程是病毒前基因组RNA逆转录形成成熟DNA的必要步骤。衣壳结构的轻微改变或破坏能对病毒子代传播产生巨大影响。

体外组装的病毒样颗粒在疫苗和药物递送中的应用

病毒样颗粒(virus like particles,VLPs)近年来被广泛应用于疫苗和治疗性药物递送系统领域。与体内组装VLPs相比,体外组装VLPs具有组装寡聚体成分明确、反应条件可控、避免宿主成分的引入以及能实现药物活性成分的包裹和递送功能等诸多优势。概述了体外VLPs的生产方法、影响体外VLPs形成的因素、VLPs的特征分析方法,综述了体外VLPs在疫苗和治疗性药物递送方面的应用进展,期望对体外VLPs组装技术的发展提供参考思路,促进体外VLPs组装技术在疾病预防和治疗应用方面发挥更大的作用。

核酸／蛋白质纳米结构组装研究

利用生物分子进行纳米结构组装是生物纳米技术的研究前沿热点之一。国家纳米科学中心刘冬生研究员领导的研究小组和中科院微生物所方荣祥院士课题组合作，利用最小为50个碱基对长度的双链核酸为模版，成功实现了黄瓜花叶病毒衣壳蛋白的组装，获得了微米级长度的蛋白纳米线。此结果突破了前人利用烟草花叶病毒时所需核酸序列过长及不适于大规模制备的限制，

杆状病毒核衣壳组装相关蛋白研究进展

杆状病毒生命周期中会产生包埋型和芽生型两种病毒粒子,这两种病毒粒子的包膜组成存在明显的差异,但拥有相同的核衣壳结构。杆状病毒核衣壳是由衣壳蛋白和杆状病毒基因组两部分组成,核衣壳的正常组装对两种病毒粒子的形成都是不可或缺的,因此核衣壳的正常组装在病毒的整个感染传播过程中发挥着重要作用。尽管越来越多参与核衣壳组装的蛋白被鉴定出来,目前还有许多核衣壳组装细节不明了,例如这些衣壳蛋白之间的互作关系是怎样的,宿主通过何种方式参与到病毒核衣壳组装过程等。本文主要以杆状病毒模式物种苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)为例综述了参与杆状病毒核衣壳组装的相关蛋白,并对一些参与核衣壳运输有关的核衣壳蛋白也做了阐述。

人乳头瘤病毒样颗粒组装研究进展

病毒样颗粒（Virus-like particles,VLPs）作为一种形态结构与真病毒高度相似的空心颗粒,具有真病毒类似特性,在机体内能刺激免疫系统产生高滴度的中和抗体,又因为其缺乏核酸无法复制,近年来一直被作为理想的候选疫苗蛋白。目前上市的三种人类乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）疫苗都是属于基因工程VLP疫苗。对于HPV VLP组装的研究能够更好的为疫苗研发方面提供更多的优化手段。该文旨在总结这十几年人乳头瘤病毒VLP组装的研究进展,为HPV以及其它病毒的基因工程疫苗研发提供更多有价值的信息,为人类健康作出贡献。

浅析中国防控非洲猪瘟药物最新进展

中国开展了对非洲猪瘟病毒基础理论研究和防控非洲猪瘟药物研制。研究表明:非洲猪瘟病毒,为双链DNA结构、24个基因型、病毒编码150多种蛋白,基因组由两层衣壳和两层外膜保护,衣壳主要由病毒编码蛋白p72构成。研究出非洲猪瘟病毒的DNA连接酶(AsfvDNAL)结构和p72蛋白折叠结构,正确折叠的p72蛋白以及确定其高分辨率结构有助于开发靶向病毒衣壳组装的药物。中国对非洲猪瘟病毒基础理论研究处于世界先进水平,为研制防治非洲猪瘟药物打下了坚实基础。针对性研究非洲猪瘟病毒DNA修复通路蛋白,抑制和阻断非洲猪瘟病毒复制,抑制II型拓扑异构酶药物,或直接杀灭病毒和预防药物作用的药物。本文介绍的海洋生物、病毒DNA修复通路蛋白药物、伊曲康唑、25-羟基胆固醇盐酸、恩诺沙星、刺五加、银蟾散等防治非洲猪瘟药物,对非洲猪瘟病毒防治针对性强,作用机理明确,代表了中国传统中医药与现代兽药制药技术结合的方向。展望中国防控非洲猪瘟的药物防治效果达85%以上,高的可达92%,在1年内形成防控非洲猪瘟药物产品,将发挥防治非洲猪瘟巨大作用。

可激活并使HBV错配的杂环二氢嘧啶类药物

HAPs（杂环二氢嘧啶类）是一类能够在活体中抑制乙肝病毒（HBV）复制的新型抗病毒药物。本文对其中的一种有代表性的药物（HAP-1）在HBV衣壳蛋白装配过程中的作用进行了测试。HAP-1可在很宽的浓度窗中增强衣壳蛋白的装配效率，并延伸其装配范围；浓度较高时可生成以衣壳蛋白六聚体为特征的畸形产物。

GLSP4前药的设计、合成及体外HepG2.2.15细胞抗HBV活性

为改善目前处于临床Ⅱ期中的乙肝病毒衣壳蛋白抑制剂甲磺酸莫非塞定(GLS4)水溶性差、口服生物利用度低的缺点,设计合成了一种前药,并且进行了前药的体外研究,包括细胞毒性和细胞水平抗HBV4效应(抑制HBV DNA复制和HBsAg、HBeAg分泌);进行了前药的水溶性、小鼠急性毒性及大鼠单剂量口服和静脉药代动力学研究。与GLS4相比,所设计的前药具有相似的抗HBV活性,对HepG2.2.15细胞的细胞毒性显著降低,水溶性增强,急性毒性较弱,但体内研究不稳定。