乙肝病毒表面抗原基因在花生中的遗传转化及免疫原性检测

首次用花生半胚作为外植体,与农杆菌EHA105(含质粒p1301HBs)共培养5d,再生培养基中通过加入潮霉素进行抗性筛选,得到抗潮霉素的芽,经芽的伸长、诱导生根获得转化植株。经PCR、PCR-Southern杂交、Southern点杂交等分子检测,证实目的基因已整合到花生基因组中,ELISA检测证实了在花生中表达的HBsAg具有较好的活性。经初步定量,花生小芽的蛋白初提液中可溶性蛋白含量1.044g/L,HBsAg小蛋白的含量约占总可溶性蛋白的0.032%,每克转化植株小芽鲜重含HBsAg小蛋白约2.4×10-7g。转基因花生植株初提重组蛋白经HPLC纯化、浓缩后,注射初免一次的小鼠,有明显的特异性抗体产生。口服饲喂已免疫但抗体下降至0.025(HBsAbELISAD值)Balb/c小鼠,发现有较强的抗体回升,达3.54,表明转基因花生疫苗可以加强口服免疫。

转乙肝病毒表面抗原基因烟草发根的获得

构建了乙肝病毒表面抗原基因(HBsAg)植物表达载体,通过冻融法将HBsAg基因转入到发根农杆菌LBA1314中,采用叶盘法将HBsAg基因导入到烟草中,获得了转基因烟草发根.对转基因烟草发根的GUS检测结果表明:转HBsAg基因烟草发根可以染成蓝色,而非转基因烟草的根没有染色反应.这说明gus基因在转HBsAg基因烟草发根获得了表达.

乙肝病毒表面抗原基因转化番茄

将乙肝病毒表面抗原 (HBs Ag)基因与 Ca MV3 5 s启动子及 nos终止子构建植物表达载体 p1 3 0 1 HBs,直接法转入根癌农杆菌 EHA1 0 5 (Agrobacterium tumefaciens) ,以该菌株介导叶盘法转化番茄 ,得到抗潮霉素的再生植株 .抗性苗总 DNA经 PCR、Southern斑点杂交证实目的基因已整合到番茄基因组中 ,EILSA检测证明在番茄中正确表达了乙肝表面抗原蛋白 .

乙肝病毒表面抗原基因在人参细胞中的表达

为获得表达乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人参细胞系,构建携带HBsAg基因的植物细胞表达载体pBIBSa,采用以农杆菌LBA4404感染的方法,经G418筛选后得到13株具有抗性的人参细胞。提取基因组DNA进行PCR反应,其中8株得到约700bp的HBsAg基因片段;提取mRNA进行RT-PCR反应,其中6株得到约700bp的HBsAg基因片段;用ELISA方法检测HBsAg,6株均为阳性。每克人参细胞中最高含HBsAg184ng,占细胞可溶性蛋白的0.009%。免疫组化切片染色显示HBsAg主要分布在细胞膜上,少量位于细胞核中。这些结果表明人参细胞整合了HBsAg基因,并能稳定表达HBsAg。

乙肝病毒表面抗原基因启动子Ⅱ的结构及调节研究

0引言 乙型肝炎病毒(HBV)为含有一段单股区的双链环状DNA病毒,属嗜肝DNA病毒科,其基因组结构紧密,可分为结构基因序列和调节基因序列两部分,二者可具有相互重叠的特点.HBV基因的负链核苷酸序列中,至少有4个开放读码框(open reading frame,ORF),包括编码外膜蛋白的S基因区,编码核衣壳蛋白的C基因区,编码聚合酶的P基因区和调节病毒基因转录水平的X基因区,4种ORF分别有各自的启动子.HBV的外膜蛋白能使病毒由感染的细胞分泌,并能附着和侵入新的细胞;同时其也是引起宿主保护性应答的免疫原表位[1-6].因此,作为指导S基因组RNA转录的SP启动子序列,在HBV的生活周期中,具有较为重要的作用.

生长抑素基因与乙肝病毒表面抗原基因融合体质粒(pUC12-ss/HBs)的构建

为了将生长抑索(Somatostatin,ss)基因融合到乙肝表面抗原(HBsAg 或 HBs)基因 C 末端 Acc Ⅰ 位点(aa223位置),先将质粒 pWR13-HBs/4的多接头区 Sal Ⅰ位点消除,因为它也可被 AccⅠ酶切。在AccⅠ位点加入 Bgl Ⅱ接头,用 Sac Ⅰ和 Bg Ⅱ切下 HBs 基因片段(700bp),并将其插入到 pUC12-ss/2中 ss 基因N 末端 Sac Ⅰ和 BamH Ⅰ位置.获得基因融合体质粒 pUC12-ss/HBs。经 DNA 序列分析,两基因融合处的阅读框架正确,且 HBs 基因的起始密码 ATG 和 ss 基因全序列都得以证实.

乙肝病毒表面抗原基因对番茄的遗传转化及转基因番茄植株的获得

利用农杆菌介导法将乙肝病毒表面抗原基因转入番茄,获得了转基因植株.经GUS组织化学染色、PCR扩增以及PCR-Southern检测,证明乙肝病毒表面抗原基因已转入番茄基因组中.这为番茄乙肝口服疫苗的研究奠定基础.

乙肝病毒表面抗原基因在胡萝卜中的克隆及表达

构建HBV表面抗原 (HBsAg)植物表达载体并在胡萝卜植株中表达。采用自行构建adr亚型HBsAg基因克隆T adr,再次酶切获得 860bp含PreS2的HBsAg基因片段 ,将其插入到植物表达载体pBPC5 5 ,新质粒命名为pBPC91adr。将其与含除草剂抗性基因及GUS蛋白基因的筛选质粒 pBPC93共同经基因枪 (PDS 10 0 0 /He)转化胡萝卜悬浮细胞 ,经含除草剂 (Biolaphos)的培养基筛选及植物激素诱导分化 ,获得除草剂抗性胡萝卜幼苗。结果为转化后 8周 ,自胡萝卜细胞中分化出除草剂抗性胡萝卜幼苗。提取新分化幼苗总DNA ,特异性引物PCR扩增后可见860bp扩增带 ;Southern Blot证明有HBsAg基因整合 ,胡萝卜蛋白萃取物的Western Blot及ELISA检测证实有HBsAg蛋白表达。利用基因枪转化使质粒 pBPC91adr中HBsAg基因在胡萝卜幼苗内整合并表达 。

血清低水平乙肝病毒表面抗原的临床意义分析

目的:探讨血清中低水平乙肝病毒表面抗原(HBsAg)与乙肝病毒(HBV)DNA载量及肝功能指标的关系。方法:选取2020年6月—2021年12月在宁波市镇海区人民医院就诊的低水平HBsAg患者408例,检测所有纳入患者的乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(抗-HBe)及乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)、HBV DNA载量检测及相关肝功能指标。结果:408例低水平HBsAg患者中,抗-HBe和抗-HBc均为阳性,且抗-HBs和HBeAg均为阴性的患者占比最高,共360例(88.24%);HBV DNA阳性共82例(20.10%),不同浓度HBsAg患者HBV DNA阳性率差异有统计学意义(P=0.041),HBsAg浓度在31~40 COI时,HBV DNA的阳性率最高(30.00%);不同浓度HBsAg时HBV DNA载量差异无统计学意义(P>0.05);不同浓度HBsAg及HBV DNA对应的肝功能检测结果差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:低水平HBsAg患者中,抗-HBe和抗-HBc均为阳性,且抗-HBs和HBeAg均为阴性的患者占比最高;HBsAg浓度不同时,HBV DNA阳性率也不同,但并不影响HBV DNA载量;HBsAg浓度及HBV DNA载量不同并不影响患者的肝功能。

牛α-S1-酪蛋白-乙肝病毒表面抗原融合基因在转基因羊中的表达

利用ＤＮＡ重组技术，将牛αＳ１酪蛋白调控区基因（１６ｋｂ的片段）与乙肝表面抗原基因拼接，构建了融合基因表达构件：λ１０６。构件经转基因技术转入山羊受精卵。待受精卵发育至成熟个体并分娩、泌乳，ＥＬＩＳＡ检测其乳汁中的ＨＢｓＡｇ，证明所构建的牛αＳ１酪蛋白基因表达构件是可以在羊乳腺中表达乙肝表面抗原基因。

乙肝病毒融合表面抗原SA-28基因在酵母中的表达

利用基因工程技术，先将乙肝病毒表面抗原S－preSI融合基因SA－28置于酵母杂合启动子ADH2－SUC2的控制下，然后将SA－28基因的表达单元插入高稳定质粒PHCll的BamHI位点，构建成表达质粒YFD150和YFD150－o，并将其转化酿酒酵母Y19。对转化子表达SA－28基因的研究表明：表达受葡萄糖浓度调控；表达产物具有S和preS1双重抗原性，并形成密度为1．20—1．229／ml的颗粒。

人乙肝病毒表面抗原基因在转基因烟草中的表达

本文报道了将乙型肝炎病毒(adw亚型)表面抗原基因导入植物中并得到了表达。将人乙型肝炎病毒(adw亚型)表面抗原(HBs Ag)基因插入植物双元载体pRoK Ⅱ的CaMV 35S启动子下游,构建重组质粒pRoK Ⅱ-HBs ag,将此质粒导入农杆菌LBA4404中,利用农杆菌感染叶盘的方法转化烟G-140品种,得到了抗卡那霉素的转化植株,并进一步获得了后代植株。酶联免疫分析表明转化植株及其后代均能产生具免疫活性的HBs Ag;免疫吸附电镜观察表明,转化植株产生的HBS Ag呈典型的直径为22 nm的颗粒。本文显示了用植物廉价生产HBs Ag的可能性。

表达乙肝病毒融合表面抗原基因SA-28的二倍体酵母工程菌的选育

将乙肝病毒融合表面抗原基因SA28的单倍体酵母工程菌Y19/YFD158和与其不同接合型的单倍体酵母菌Y95接合,筛选到二倍体酵母工程菌Y95xY19/YFD158。对两种工程菌的研究表明:二倍体工程菌发酵密度为单倍体工程菌的3倍;表达质粒在二倍体酵母中的稳定性明显高于单倍体工程菌;二倍体工程菌对融合抗原的表达量为单倍体的3倍以上;表达质粒在二倍体细胞中的平均拷贝数略低于单倍体工程菌。

乙肝病毒表面抗原和抗体双阳性者中病毒S区基因序列分析

为了解乙肝病毒 (HBV)表面抗原和抗体双阳性患者中病毒的基因型及其HVBS区是否有变异。用放射免疫试剂检测HBsAg阳性样品中的抗 HBs抗体 ,用聚合酶链反应法检测双阳性样品中的HBVDNA ,然后对阳性样品进行克隆和基因序列分析 ,并将所得序列与HBV不同基因型的代表株进行比较分析。结果显示 389例HBsAg阳性样品中有 10例为抗HBs抗体阳性 ;该 10例双阳性样品中有 5例为HBVDNA阳性 ;序列分析显示该 5株HBV均为B基因型 ,其中 4株为adw亚型 ,1株为adr亚型 ;其中有 2株在S区的“a”

乙肝病毒表面抗原preS1与人肿瘤坏死因子α融合基因的表达

用ＰＣＲ法获得了ＨＢｓＡｇｐｒｅＳ１（１－６５）肽段基因，将该基因融合在肿瘤坏死因子（ｈＴＮＦα）之后，插入表达载体ＰＳＢ－９２中，使融合基因的５′端直接置于大肠肝菌ＰＬ启动子下游，采用３０℃培养，４２℃诱导，获得了ＴＮＦ与ｐｒｅＳ１（１－６５）融合蛋白的表达产物。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示表达产物为２５ｋＤ，约占细菌总蛋白的３５％。表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ验证，能分别特异地与ｈＴＮＦα抗体与ｐｒｅＳ１抗体结合，稀释复性后，该融合蛋白还具有ＴＮＦ的生理功能（对Ｌ９２９细胞的细胞毒活性）。经ＤＮＡ序列测定，ｐｒｅＳ１（１－６５）肽基因正确地融合在ｈＴＮＦα基因之后。该结果提供了一种制备ｐｒｅＳ１的新方法，为进一步开展治疗肝癌和乙肝的导向药物打下基础。

乙肝病毒表面抗原(HBsAg)基因工程疫苗的研究进展

在乙肝病毒 (HBV)的结构蛋白中 ,与疫苗有关的主要是HBsAg。HBsAg基因已在不同的生物体系中获得成功的表达 ,其基因工程疫苗的研究也取得了长足的进展 。

杂合启动子控制下乙肝病毒表面抗原SA-28融合基因在酵母中的表达

在杂合启动子 ADH2 - GAPDH控制下于酿酒酵母中表达乙肝病毒表面抗原 SA- 2 8融合基因的过程研究中 ,确定系统表达的有效阻遏条件为在 1 0 .0 g/ L的葡萄糖浓度下进行细胞的预培养 ,采用稀释操作和碳源饥饿培养等较彻底的去阻遏方式以克服葡萄糖酵解产物阻遏对表达的影响。实验还显示了溶解氧浓度对表达的影响和乙醇流加方式对表达期酵母生长与表达的调节作用。实验获得主培养 4 5h后湿菌体浓度为 1 86 g/ L,细胞内 pre S1效价为 80 0 0 u。

乙肝病毒表面抗原阳性者的体征及预防治疗方法研究

本文分析乙型病毒肝炎表面抗原(HBsAg)阳性者体征特点,并分析防治乙肝手段。方法 研究对象,82例,我院就诊,HBsAg检测者,时间选取2019.12.10/2022.11.30(开始/结束),研究对象夫妻其中一方为HBsAg阳性者,对其开展防治干预,干预时间6个月,观察HBsAg阳性者体征、治疗效果及HBsAg阴性者乙肝感染率。结果 (1)HBsAg阳性者体征:HBsAg阳性者/HBsAg阴性者,年龄、性别占比情况对比,差异不显(P>0.05)。HBsAg阳性者单项HBsAg占比高(39.02%),其次合并抗—HBc占比较高(21.95%)。(2)治疗效果:经过综合治疗后,HBsAg阳性者乙肝病毒的脱氧核糖核酸(乙肝病毒基因,HBV—DNA)转阴率较之治疗前更高(值=64.174),差异显著(P<0.05)。(3)HBsAg阴性者乙肝感染率:经过综合干预后,HBsAg阴性者乙肝感染率较之干预前无差异(值=1.012,P>0.05)。结论 HBsAg阳性者同HBsAg阴性者在年龄、性别等方面无明显差异,HBsAg阳性者以单一HBsAg(+)为主,采取综合防治手段,可以有效提高阳性者HBV—DNA转阴率,预防阴性者出现乙肝病毒感染,可推广。

重组乙肝病毒核心基因DNA与表面抗原-抗体共免疫应答研究

目的:了解小鼠对乙肝病毒核心抗原(HBcAg)基因免疫及与乙肝表面抗原-抗体复合物(HBsAg-抗HBs)联合免疫的应答。方法:用表达乙肝病毒核心抗原N端144个氨基酸的重组质粒DNA(简称pHBc144)100μg及含1μgHBsAg的重组乙肝表面抗原-鼠抗体组建的复合物(简称sIC)免疫Balb/c小鼠。用ELISA法检测血清抗体IgG和IgG1、IgG2a亚类的效价。用半定量PCR法分别检测鼠脾细胞IFN-γ及IL-4的mRNA。结果:pHBc144及sIC联合免疫鼠的抗HBs IgG、IgG1、IgG2a效价均显著高于sIC组(P＜0．05)。同时小鼠还可产生抗HBc及由HBsAg、HBcAg特异诱生的IFN-γ及IL-4。但与sIC共免疫,小鼠对HBcAg诱生的IFN-γ mRNA有所降低。结论:可用HBcAg基因与sIC共免疫,以获得针对乙肝病毒2种结构蛋白的免疫应答。