乙肝病毒表面抗原大蛋白的检测与分析

[目的]检测乙肝病人血液中乙肝病毒表面抗原大蛋白(LHBs),与HBV DNA结果比较,探讨LHBs方法的可靠性和实用性。[方法]用荧光定量PCR法检测慢性HBV病人血中HBV DNA,ELISA法检测LHBs,时间分辨荧光免疫法测定HBV标志物模式。[结果]96份HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性标本,其HBV DNA与LHBs阳性率分别为97.9%和93.8%;28份HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性标本,HBV DNA与LHBs检出率分别为57.1%和64.3%,两法的一致度达96.4%(P>0.05)。[结论]LHBs和HBV DNA的检测率有很好的相关性,其评估HBV的复制与HBVDNA检测具有同等意义。LHBs检测仪器设备要求低、操作简单,多数医疗机构都能开展,对不能开展HBV DNA检测的基层医院临床意义更大。

乙肝病毒表面抗原大蛋白与HBV复制状况的相关分析

目的:通过检测慢性乙肝(chronic hepatitis B,CHB)患者血清中乙肝病毒表面抗原大蛋白(large surface protein,LHBs)、HBV DNA以及乙肝病毒标志物(HBsAg/HBsAb、HBeAg/HBeAb、HBcAb,简称HBV-M)模式测定,探讨LHBs与HBV DNA及HBV-M模式间的关系,研究LHBs反应HBV复制情况的可靠性,揭示HBeAg阴性乙肝患者检测LHBs的临床意义。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对LHBs和乙型肝炎抗原抗体五项进行检测;采用荧光定量PCR方法对HBV DNA进行检测。结果:534份乙肝患者HBV DNA、LHBs、乙型肝炎抗原抗体五项的检测结果显示:LHBs阳性与HBeAg阴性间测定结果差异有统计学意义(P=0.001,χ2=10.847),不同HBV-M模式的HBV DNA与LHBs检出结果差异有统计学意义(P<0.001,χ2=37.8761)。结论:LHBs是从蛋白水平反应HBV感染者体内病毒复制程度的可靠指标,血清中的LHBs与HBVDNA具有较好的相关性,尤其是HBeAg阴性患者LHBs检测可作为体内病毒复制及预后判断的良好血清学指标。

乙肝病毒表面抗原大蛋白检测的临床意义

目的:探讨乙肝病毒表面抗原大蛋白(HBV-LP)检测的临床意义;方法:对2009年4月至2010年4月我院门诊和住院的HBV携带者和乙型肝炎患者256例的血清标本进行分析;结果:HBV DNA与HBV-LP的阳性检出率相比差异无显著性(P>0.05),在小三阳乙肝患者HBV DNA与HBV-LP的检出率相比差异无显著性(P>0.05),HBV-LP吸光度(A值)与HBV DNA相比差异有统计学意义;结论:血清HBV-LP对于反映病毒持续复制、预后等方面的研究有着积极作用。

血清低水平乙肝病毒表面抗原的临床意义分析

目的:探讨血清中低水平乙肝病毒表面抗原(HBsAg)与乙肝病毒(HBV)DNA载量及肝功能指标的关系。方法:选取2020年6月—2021年12月在宁波市镇海区人民医院就诊的低水平HBsAg患者408例,检测所有纳入患者的乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(抗-HBe)及乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)、HBV DNA载量检测及相关肝功能指标。结果:408例低水平HBsAg患者中,抗-HBe和抗-HBc均为阳性,且抗-HBs和HBeAg均为阴性的患者占比最高,共360例(88.24%);HBV DNA阳性共82例(20.10%),不同浓度HBsAg患者HBV DNA阳性率差异有统计学意义(P=0.041),HBsAg浓度在31~40 COI时,HBV DNA的阳性率最高(30.00%);不同浓度HBsAg时HBV DNA载量差异无统计学意义(P>0.05);不同浓度HBsAg及HBV DNA对应的肝功能检测结果差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:低水平HBsAg患者中,抗-HBe和抗-HBc均为阳性,且抗-HBs和HBeAg均为阴性的患者占比最高;HBsAg浓度不同时,HBV DNA阳性率也不同,但并不影响HBV DNA载量;HBsAg浓度及HBV DNA载量不同并不影响患者的肝功能。

监测乙肝病毒表面抗原大蛋白水平评价乙肝诊疗状态

目的:检测乙肝病毒表面抗原大蛋白水平的变化,探讨其对乙肝病人诊疗状态的评价价值。方法:1042例乙肝病人以ELISA法进行BHM分组,分别对"大三阳"组、"小三阳"组、HBeAg阴性组、HBV DNA检测阴性组和HBV基因变异组进行HBV-LP测定(ELISA法)及HBV DNA检测(FQ-PCR法)。结果:1042例乙肝病人检测结果显示:L、S、EN及DN组HBV-LP与HBV DNA阳性率分别为73.13%、67.96%,72.73%、42.32%和60.40%、39.88%,除L组(P>0.05)外,其余各组相比差异显著有统计学意义(P<0.01,P<0.05);两种检测方法之间有很好的正相关性(r=0.8420);对HBV DNA检测阴性的196例标本HBV-LP检测的阳性率为68.88%。结论:HBV-LP检测可作为从蛋白水平反映HBV病人体内病毒复制程度的血清学指标,对于HBeAg阴性的乙肝病人HBV-LP检测反映病毒复制优于HBV DNA检测,并与之具有很好互补作用。

牛α-S1-酪蛋白-乙肝病毒表面抗原融合基因在转基因羊中的表达

利用ＤＮＡ重组技术，将牛αＳ１酪蛋白调控区基因（１６ｋｂ的片段）与乙肝表面抗原基因拼接，构建了融合基因表达构件：λ１０６。构件经转基因技术转入山羊受精卵。待受精卵发育至成熟个体并分娩、泌乳，ＥＬＩＳＡ检测其乳汁中的ＨＢｓＡｇ，证明所构建的牛αＳ１酪蛋白基因表达构件是可以在羊乳腺中表达乙肝表面抗原基因。

乙肝病毒表面抗原大蛋白检测结果分析

乙型肝炎病毒（HBV）在我国感染率高，易慢性化，引起肝硬化和原发性肝癌。如何简单快捷地评估HBV在体内是否复制已成为基层医院诊治的首要问题。近年来逐渐认识到乙型肝炎表面抗原大蛋白（LHBs）在HBV感染中具有越来越重要的临床意义，为此我们研究分析了乙肝病毒表面抗原大蛋白检测结果，旨在探讨LHBs反映乙肝患者HBV复制程度的可靠性。

乙肝病毒截短型表面抗原中蛋白与X蛋白对肾小管上皮细胞核转录因子的影响

目的:目的研究167例乙肝病毒截短型表面抗原中蛋白(C-terminally truncated middle size surface proteins,MHBst167)和X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肾小管上皮细胞核转录因子κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)活化的影响及其相关机制探讨。方法:肾小管上皮细胞系(HK-2)转染mhbst167或(和)hbx后,蛋白印迹法检测NF-κB核易位及其抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor-kappa B,IκBα)磷酸化水平的变化,凝胶电泳迁移率和双萤光素酶报告基因分析进一步检测NF-κB活性;通过对蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活性和细胞外调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)磷酸化水平检测探讨NF-κB活化的机制。结果:HK-2细胞转染mhbst167或(和)hbx基因后,NF-κB核易位、磷酸化IκBα、κB结合活性及κB基因转录均增加(P<0.05);且PKC激酶活性和磷酸化ERK水平也增加(P<0.05),而Raf蛋白均无表达。结论:在肾小管上皮细胞中,MHBst167/HBx可能通过PKC/ERK通路(非Raf依赖性)活化NF-κB。

乙肝病毒表面抗原阳性者的体征及预防治疗方法研究

本文分析乙型病毒肝炎表面抗原(HBsAg)阳性者体征特点,并分析防治乙肝手段。方法 研究对象,82例,我院就诊,HBsAg检测者,时间选取2019.12.10/2022.11.30(开始/结束),研究对象夫妻其中一方为HBsAg阳性者,对其开展防治干预,干预时间6个月,观察HBsAg阳性者体征、治疗效果及HBsAg阴性者乙肝感染率。结果 (1)HBsAg阳性者体征:HBsAg阳性者/HBsAg阴性者,年龄、性别占比情况对比,差异不显(P>0.05)。HBsAg阳性者单项HBsAg占比高(39.02%),其次合并抗—HBc占比较高(21.95%)。(2)治疗效果:经过综合治疗后,HBsAg阳性者乙肝病毒的脱氧核糖核酸(乙肝病毒基因,HBV—DNA)转阴率较之治疗前更高(值=64.174),差异显著(P<0.05)。(3)HBsAg阴性者乙肝感染率:经过综合干预后,HBsAg阴性者乙肝感染率较之干预前无差异(值=1.012,P>0.05)。结论 HBsAg阳性者同HBsAg阴性者在年龄、性别等方面无明显差异,HBsAg阳性者以单一HBsAg(+)为主,采取综合防治手段,可以有效提高阳性者HBV—DNA转阴率,预防阴性者出现乙肝病毒感染,可推广。

用Far-Western印迹技术筛选人肝组织中与乙肝病毒表面抗原PreS1相互作用的蛋白

目的:利用Far-Western印迹技术从正常人肝组织中筛选乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原PreS1结合蛋白,为阐明HBV的感染致病机理提供依据。方法:提取正常人肝组织细胞膜蛋白,双向电泳展示后转膜,对表达纯化获得的PreS1的重要片段与GST的融合蛋白PreS/1-48myr-GST进行Far-Western印迹实验,对筛选获得的蛋白点切胶,质谱鉴定。结果:对PreS/1-48myr-GST融合蛋白进行Far-Western-2D筛选,共获得22个蛋白点,经质谱鉴定获得15个候选相互作用蛋白,其中膜蛋白Ezrin可能在HBV感染致病过程中具有重要作用。结论:Ezrin蛋白能够与乙肝病毒表面抗原PreS1结合,其在HBV感染致病过程中的重要作用值得探索。

中药联合干扰素对慢性乙肝患者血清乙肝表面抗原及乙肝病毒e抗原影响的系统评价

目的系统评价中药联合干扰素对慢性乙型肝炎(乙肝)患者血清乙肝表面抗原(HBsAg)及乙肝病毒e抗原(HBeAg)的影响。方法根据系统评价的原则制定检索策略,收集符合纳入标准的文献,提取数据并应用RevMan 4.2软件进行分析。结果最终筛选出9篇文献,质量均不高。Meta分析结果显示:中药联合干扰素组的血清HBsAg阴转指标的相对危险度(RR)值为1.63[95%CI(1.04,2.55)],血清HBeAg阴转指标的RR值为1.37[95%CI(1.14,1.64)],与干扰素组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论就阴转血清HBsAg和HBeAg这两个指标来看,中药联合干扰素治疗的效果优于单用干扰素。

乙肝病毒融合表面抗原SA-28基因在酵母中的表达

利用基因工程技术，先将乙肝病毒表面抗原S－preSI融合基因SA－28置于酵母杂合启动子ADH2－SUC2的控制下，然后将SA－28基因的表达单元插入高稳定质粒PHCll的BamHI位点，构建成表达质粒YFD150和YFD150－o，并将其转化酿酒酵母Y19。对转化子表达SA－28基因的研究表明：表达受葡萄糖浓度调控；表达产物具有S和preS1双重抗原性，并形成密度为1．20—1．229／ml的颗粒。

中国肝癌死亡率和乙肝病毒表面抗原携带率的地理分布研究

目的描绘中国肝癌死亡水平地理分布图(未包括香港、澳门和台湾地区)和乙肝病毒表面抗原(HBsAg)携带水平地理分布图,描述中国肝癌死亡水平和HBsAg携带水平的地理分布特征。研究肝癌死亡水平和HBsAg携带水平之间的关系。方法使用全国疾病监测系统的死亡监测数据和全国肝炎血清学流调数据,分别绘出中国疾病监测点的肝癌死亡水平和各省HBsAg携带水平的地理图,比较两者的地理分布,并对各省肝癌死亡率和HBsAg携带率进行相关性检验。绘制监测点不同性别人群的肝癌死亡水平图,揭示不同性别人群的肝癌死亡率和HBsAg携带率的分布特点。结果中国肝癌死亡率和HBsAg携带率均表现为男性高于女性,肝癌死亡率分布特点为东高西低即东部沿海地带为高发区,西部(西北、西南)为低发区,HBsAg携带率的高发区为东南沿海一带以及内陆的西藏和宁夏。两者的地理分布特点有相似性,统计学结果显示肝癌死亡率和HBsAg携带率存在正相关关系。结论中国HBsAg携带率的高低和肝癌死亡率的水平存在相关关系。

MEIA法测定乙肝病毒表面抗原的评价及临床应用

目的 对微粒子酶免疫测定法(MEIA法)检测乙肝病毒表面抗原进行方法学评价并研究低含量乙肝表面抗原人群阳性检出率。方法 采用美国雅培公司的AXSYM型化学发光仪对乙肝病毒表面抗原卫生部质控物、高浓度乙肝病毒表面抗原标本进行稀释测定,同时与ELISA法检测乙肝表面抗原进行比较;对低浓度(HBsAg≤1μg/L)的标本进行中和确证试验与采用PCR-ELISA法定量测定HBV DNA。结果 微粒子化学发光法检测乙肝病毒表面抗原具有较高灵敏度,达0.1μg/L;有较好的重复性和特异性;低浓度(HBsAg≤1μg/L)在人群中分布率为0.53％。结论 微粒子酶免疫法对提高低含量乙肝表面抗原阳性检出率具有重要意义。

乙肝病毒表面抗原基因在人参细胞中的表达

为获得表达乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人参细胞系,构建携带HBsAg基因的植物细胞表达载体pBIBSa,采用以农杆菌LBA4404感染的方法,经G418筛选后得到13株具有抗性的人参细胞。提取基因组DNA进行PCR反应,其中8株得到约700bp的HBsAg基因片段;提取mRNA进行RT-PCR反应,其中6株得到约700bp的HBsAg基因片段;用ELISA方法检测HBsAg,6株均为阳性。每克人参细胞中最高含HBsAg184ng,占细胞可溶性蛋白的0.009%。免疫组化切片染色显示HBsAg主要分布在细胞膜上,少量位于细胞核中。这些结果表明人参细胞整合了HBsAg基因,并能稳定表达HBsAg。

PEG沉淀结合层析分离重组乙肝病毒表面抗原

应用聚乙二醇(PEG)沉淀结合层析技术纯化乙肝病毒表面抗原(HBsAg),对PEG浓度、pH值、离子强度等影响PEG沉淀的因素进行了正交实验研究.结果表明,浓度为0.12g/mL的PEG6000在4℃,pH9.0条件下沉淀HBsAg纯化效果比较理想,纯化倍数达3.7,回收率96.8%,有效地去除了生物大分子杂质和牛血清白蛋白(BSA),PEG在后续的凝胶过滤中可以除去,整个工艺的回收率可提高到41%.

慢性HBV患者血清乙肝病毒表面大蛋白检测与临床意义

目的探讨HBV感染者血清中乙肝表面抗原大蛋白(HBV-LP)水平对HBV复制状态的判定和对临床抗病毒治疗的指导意义。方法对90例接受抗病毒治疗的慢性HBV患者,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR法定期进行血清HBV-LP和HBV DNA定量检测,对检测数据进行相关性分析。结果抗病毒治疗前90例次感染血清中HBV-LP与HBV DNA检出阳性率差异无显著性(P>0.05)。检测210例次感染血清中,HBV-LP含量与HBV DNA具有良好的相关关系(r=0.857,P=0.000),HBV-LPOD值和HBV DNA拷贝数随抗病毒治疗时间的延长同步下降。结论血清中HBV-LP能反映体内HBV复制水平,抗病毒治疗过程中HBV-LP和HBV DNA同步下降,可用于判断HBV复制程度和用于指导抗病毒治疗。

乙肝病毒表面抗原基因在花生中的遗传转化及免疫原性检测

首次用花生半胚作为外植体,与农杆菌EHA105(含质粒p1301HBs)共培养5d,再生培养基中通过加入潮霉素进行抗性筛选,得到抗潮霉素的芽,经芽的伸长、诱导生根获得转化植株。经PCR、PCR-Southern杂交、Southern点杂交等分子检测,证实目的基因已整合到花生基因组中,ELISA检测证实了在花生中表达的HBsAg具有较好的活性。经初步定量,花生小芽的蛋白初提液中可溶性蛋白含量1.044g/L,HBsAg小蛋白的含量约占总可溶性蛋白的0.032%,每克转化植株小芽鲜重含HBsAg小蛋白约2.4×10-7g。转基因花生植株初提重组蛋白经HPLC纯化、浓缩后,注射初免一次的小鼠,有明显的特异性抗体产生。口服饲喂已免疫但抗体下降至0.025(HBsAbELISAD值)Balb/c小鼠,发现有较强的抗体回升,达3.54,表明转基因花生疫苗可以加强口服免疫。

乙肝病毒表面抗原preS1与人肿瘤坏死因子α融合基因的表达

用ＰＣＲ法获得了ＨＢｓＡｇｐｒｅＳ１（１－６５）肽段基因，将该基因融合在肿瘤坏死因子（ｈＴＮＦα）之后，插入表达载体ＰＳＢ－９２中，使融合基因的５′端直接置于大肠肝菌ＰＬ启动子下游，采用３０℃培养，４２℃诱导，获得了ＴＮＦ与ｐｒｅＳ１（１－６５）融合蛋白的表达产物。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示表达产物为２５ｋＤ，约占细菌总蛋白的３５％。表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ验证，能分别特异地与ｈＴＮＦα抗体与ｐｒｅＳ１抗体结合，稀释复性后，该融合蛋白还具有ＴＮＦ的生理功能（对Ｌ９２９细胞的细胞毒活性）。经ＤＮＡ序列测定，ｐｒｅＳ１（１－６５）肽基因正确地融合在ｈＴＮＦα基因之后。该结果提供了一种制备ｐｒｅＳ１的新方法，为进一步开展治疗肝癌和乙肝的导向药物打下基础。

表达乙肝病毒融合表面抗原基因SA-28的二倍体酵母工程菌的选育

将乙肝病毒融合表面抗原基因SA28的单倍体酵母工程菌Y19/YFD158和与其不同接合型的单倍体酵母菌Y95接合,筛选到二倍体酵母工程菌Y95xY19/YFD158。对两种工程菌的研究表明:二倍体工程菌发酵密度为单倍体工程菌的3倍;表达质粒在二倍体酵母中的稳定性明显高于单倍体工程菌;二倍体工程菌对融合抗原的表达量为单倍体的3倍以上;表达质粒在二倍体细胞中的平均拷贝数略低于单倍体工程菌。