用Far-Western印迹技术筛选人肝组织中与乙肝病毒表面抗原PreS1相互作用的蛋白

目的:利用Far-Western印迹技术从正常人肝组织中筛选乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原PreS1结合蛋白,为阐明HBV的感染致病机理提供依据。方法:提取正常人肝组织细胞膜蛋白,双向电泳展示后转膜,对表达纯化获得的PreS1的重要片段与GST的融合蛋白PreS/1-48myr-GST进行Far-Western印迹实验,对筛选获得的蛋白点切胶,质谱鉴定。结果:对PreS/1-48myr-GST融合蛋白进行Far-Western-2D筛选,共获得22个蛋白点,经质谱鉴定获得15个候选相互作用蛋白,其中膜蛋白Ezrin可能在HBV感染致病过程中具有重要作用。结论:Ezrin蛋白能够与乙肝病毒表面抗原PreS1结合,其在HBV感染致病过程中的重要作用值得探索。

乙肝病毒PreS1抗原的临床应用

目的:评价检测乙肝病毒PreS1抗原的临床应用价值.方法:将临床送检的1000份乙肝病毒表面抗原(HBsAg阳性的血清标本进行PreS1抗原检测,同时用FQ-PCR进行HBV-DNA测定.结果:PreS1总阳性率为52.0%,HBV-DNA阳性率为50.8%,HBeAg阳性率为21.0%.PreS1总阳性率明显高于HBeAg阳性率.PreS1与HBV-DNA的总符合率为94.4%.结论:PreS1抗原作为乙肝感染和复制的血清学指标敏感性高于HBeAg,对提示乙肝患者的病情发展和转归有重要临床意义.PreS1可以作为一项新的乙肝病毒复制的传染性指标.

HBV Pre-S1蛋白及HBV-DNA含量检测在诊断乙肝病毒复制中的临床意义

目的:探讨乙肝患者不同血清学标志物模式(HBV-M)与乙肝病毒DNA含量及乙肝病毒前S1蛋白的关系,为预测乙型肝炎病毒的传染程度、预防、诊断及治疗提供实验室依据。方法:采用ELISA法对1385例携带不同血清学标志物的乙肝患者进行HBVPre-S1和乙肝5项指标检测,并用聚合酶链反应定量检测血清HBV-DNA含量。结果:不同HBV免疫模式中HBsAg、HBeAg和HBcAb同时阳性,其HBV-DNA和HBVPre-S1的检出率分别为90.7%和71.1%;HBsAg、HBeAb和HBcAb阳性组的检出率分别为35.8%和27.3%;其他不同血清学模式组也有不同的阳性率。结论:HBV-DNA、乙肝病毒5项标志和HBVPre-S1联合检测,对HBV感染早期诊断,了解病毒的复制情况,疗效观察和预后判断均具有重要意义。

前S_1蛋白抗原(Pre S_1)阳性与乙肝病毒(HBV)血清标志物关联性的分析

为了解天津海港口岸地区前S_1蛋白抗原(Pre S_2)与乙肝病毒血清标志物的相互关系,特对塘沽医院门诊及住院患者7186例血清Pre S_1及HBV血清五项标志物用EIA法及ELISA法进行分析。检测结果发现7186例血清标本中有926例Pre S_1呈现阳性,占总检人数的12.89％(926/7186)。Pre S_1与HBsAg同时存在阳性者922例占Pre S_1阳性的99.57％(922/926)。Pre S_1与HBe系统时存在阳性者851例占Pre S_1阳性的91.9%(851/926)。经分析PreS_1区段的21-47肽段是HBV与肝细胞结合的位点,可参与HBV附着并侵入肝细胞的过程,它可以反映HBV在体内复制和感染的状况,也可作为新的血清学指标替代或补充HBe系统及HBV-DNA,对HBV的监测起着重要的作用,有较高的临床诊断价值。

血清乙肝病毒、PreS1、PreS2抗原检测在乙肝诊断中的应用价值

目的探讨血清乙肝病毒(HBV)、PreS1、PreS2抗原检测在乙肝诊断中的应用价值。方法选取2018年1月至2019年12月在本院进行治疗的414例乙肝患者作为观察组,再选取同期的414例健康体检者作为对照组。所有受检者均进行血清HBV五项定量检测、PreS1、PreS2抗原检测,分析检测结果。结果414例乙肝患者中,血清PreS1阳性、PreS2阳性、PreS1、PreS2均阳性在HBsAg、HBcAb(+)中的检出率均低于HBsAg、HBeAg、HBcAb(+),差异具有统计学意义(P<0.05);血清PreS1阳性、PreS2阳性、PreS1、PreS2均阳性在HBsAg、HBeAb、HBcAb(+)中的检出率均低于HBsAg、HBeAg、HBcAb(+),差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组HBV、PreS1、PreS2阳性率均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论血清HBV、PreS1、PreS2抗原检测在乙肝诊断中具有较高应用价值,能够为患者后期治疗提供有利依据,改善患者病情预后,值得进一步推广与应用。

抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)的单链抗体在转基因烟草根分泌物中的初步表达

为探索利用植物根分泌表达重组蛋白的可行性,构建了含有抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20—47)单链抗体(ScFv)基因的表达载体。该ScFv基因转化烟草后在烟草根部细胞的细胞质和内质网中获得表达。实验结果表明,5’端融合ER导向信号肽的重组ScFv可通过根分泌表达。

人乙肝病毒前表面抗原PreS1在家蚕培养细胞中的表达

人乙肝病毒前表面抗原PreS1诱导的免疫反应可以克服机体对乙肝病毒S蛋白的无反应状态。将人乙肝病毒adr前表面抗原preS1基因克隆到杆状病毒转移载体pBacPAK8中,获得重组转移载体pBacPAKpreS1。用此转移载体与线性化病毒BmBacPAK6线性化基因组DNA共转染单层家蚕细胞(BmN),经细胞内同源重组和空白筛选,获得重组病毒。ELISA结果表明重组蛋白PreS1在家蚕培养细胞中的表达水平为02pg/个细胞,Western印迹证实此蛋白大小约为14kD。

乙肝病毒Pre S1与HBV M和HBV DNA检测的相关性分析

目的 了解PreS1与HBVM和HBVDNA检测的关系及其临床应用价值。方法 PreS1检测采用ELISA方法 ,HBVM检测采用电化学免疫发光法 ,HBVDNA检测采用荧光定量PCR法。结果 PreS1在HBeAg(+)组的检出率86 9% ,明显高于其他HBVM模式组 (P <0 0 1) ;PreS1检出乙肝病毒的灵敏性高于HBeAg检测 ,检测灵敏度为 80 9%(HBeAg为 6 1 8% ) ,检测有效率为 86 1% (HBeAg为 75 7% )。结论 PreS1与HBeAg具有较好的相关性 ,其检测灵敏性 (与HBVDNA的相关性 )和检测有效率都优于HBeAg检测 ,具有较好的临床应用价值。

PreS1Ag与乙肝病毒“两对半”同步检测结果的比较分析

目的:对PreS1Ag与乙肝"两对半"检测结果模式进行比较分析,探讨PreS1Ag检测的临床意义及与乙肝"两对半"同步检测的必要性。方法:对每次"两对半"检测中HBsAg阳性的受检者标本进行PreS1Ag检测,检验结果根据乙肝"两对半"结果模式进行统计。结果:212例HBsAg阳性血清标本共检出PreS1Ag阳性标本160例,阳性率为75.5%;"两对半"项目顺序为:HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc。"两对半"模式为"+-+-+"者71例,其中PreS1Ag阳性65例,阳性率为91.5%;"两对半"模式为"+--++"者83例,检出PreS1Ag阳性62例,阳性率为74.7%;"两对半"模式为"+---+"者48例,检出PreS1Ag阳性30例,阳性率为62.5%。结论:乙肝"+-+-+"(大三阳)、"+--++"(小三阳)及"+---+"模式PreS1抗原阳性率都比较高。因此在临床中,大家在重视乙肝"大三阳"的同时,不能忽视"小三阳"、"+---+"等其他模式的乙肝患者。PreS1Ag作为判断乙肝病毒感染、复制及传染性强弱的新指标是对乙肝"两对半"的很好补充,与"两对半"同步检测会使检查结果更加准确科学。PreS1Ag检测容易,尤其适合无条件开展HBVDNA检测的基层医院。

PreS1Ag与HBV-DNA、乙肝病毒“两对半”的相关性分析

目的:探讨PreS1Ag与HBV-DNA、乙肝病毒"两对半"的相关性及PreS1Ag检测的价值。方法:分别对400例HBsAg阳性患者的血清标本进行PreS1Ag、HBV-DNA与乙肝病毒"两对半"的检测;HBV-DNA采用实时荧光定量PCR法,PreS1Ag与乙肝病毒"两对半"的检测采用ELISA方法。结果:在400例HBsAg阳性患者的检测中,PreS1Ag阳性为283例,阳性率为70.75%;在HBeAg阳性模式的患者中,PreS1Ag阳性率接近或达到90%以上;PreS1Ag的阳性率与HBV-DNA极为一致,两者符合率为88.70%。结论:PreS1Ag是对HbeAg测定的重要补充和加强,是HBV存在和复制较为直接的标志,对临床上判断HBV复制和疾病预后有重要的参考价值。

乙肝病毒X蛋白上调肝癌细胞缺氧诱导因子-1α的作用和机制研究

背景与目的:乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在肝癌发生、发展过程中起重要作用。有研究显示,两者在肝癌组织中的表达呈正相关,但相关机制尚不明确。本研究拟进一步在细胞水平上探讨HBx对HIF-1α的调控作用及机制。方法:用LipofectemineTM 2000包裹HBx表达质粒转染到肝癌Huh7细胞。蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Huh7细胞中HIF-1α和HIF-1β蛋白的表达;特异性试剂盒检测HIF-1α转录活性;实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测HIF-1α及其靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和多药耐药基因1(multi-drug resistance gene 1,MDR1)m RNA表达变化;免疫共沉淀法检测HIF-1α、HBx和希佩尔林道病肿瘤抑制蛋白(protein von Hippel-Lindau,p VHL)间的相互作用。结果:转染HBx质粒后,Huh7细胞中HIF-1α蛋白表达、转录活性及其靶基因VEGF和MDR1的m RNA表达水平明显上调(P<0.05),然而HBx对HIF-1αm RNA表达水平没有明显影响(P>0.05)。同时,HBx显著削弱p VHL介导的泛素化水解蛋白酶降解HIF-1α的活性。免疫共沉淀法检测进一步提示,HBx可直接结合p VHL,而对HIF-1α没有结合作用。结论:HBx可能通过直接结合p VHL,抑制其与HIF-1α的相互作用,从而增强HIF-1α蛋白的稳定性及转录活性。

不同血清学标志物与HBV-DNA含量及Pre-S1在诊断乙肝病毒复制中的价值

目的了解乙型肝炎血清学不同标志物模式(HBV-M)与乙肝病毒DNA含量及乙肝病毒前S1蛋白的关系,为预测乙型肝炎病毒的传染程度与乙肝的预防、诊断及治疗提供实验室依据。方法采用美国ABBOTT公司生产的AXSYM全自动免疫分析仪和微粒子酶免检测试剂盒对530例携带不同血清学标志物的乙肝患者进行乙肝五项指标检测,并用聚合酶链反应定量检测血清HBV-DNA含量,同时,用ELS IA法检测乙肝病毒前S1抗原。结果五种HBV免疫模式中HB sA g,HB eA g和HB cA b同时阳性,其HBV-DNA定量阳性和HBV-P reS1的检出率分别为94.1%和92.8%;HB sA g,HB eA b和HB cA b阳性组的检出率分别为53.5%和40.1%;其它不同血清学模式组也有不同的阳性率。结论P re-S1可敏感反映乙型肝炎病毒的复制情况,尤其可反映HB eA g阴性的乙肝患者仍存在病毒复制。HBV-DNA含量与P re-S1呈正相关,HBV-DNA、乙肝病毒五项标志和前S1蛋白联合检测,对更好地早期诊断HBV感染,了解病毒的复制情况,疗效观察和预后判断均具有重要意义。

HBV-DNA含量及Pre-S1检测在诊断乙肝病毒复制中的临床意义

目的了解乙肝患者不同血清学标志物模式(HBV-M)与乙肝病毒DNA含量及乙肝病毒前S1蛋白的关系,为预测乙型肝炎病毒的传染程度、乙肝的预防、诊断及治疗提供实验室依据。方法采用美国ABBOTT公司生产的AXSYM全自动免疫分析仪和微粒子酶免检测试剂盒对456例携带不同血清学标志物的乙肝患者进行乙肝五项指标检测,并用聚合酶链反应定量检测血清HBV-DNA含量,同时,用ELISA法检测乙肝病毒前S1抗原。结果五种HBV免疫模式中HBsAg、HBeAg和HBcAb同时阳性,其HBV-DNA定量阳性和HBV-PreS1的检出率分别为94.1%和81.2%;HBsAg、HBeAb和HBcAb阳性组的检出率分别为53.4%和43.7%;其他不同血清学模式组也有不同的阳性率。结论Pre-S1可敏感反映乙型肝炎病毒的复制情况,尤其可反映HBeAg阴性的乙肝患者仍存在病毒复制。HBV-DNA、乙肝病毒五项标志和前S1蛋白联合检测,对更好地早期诊断HBV感染,了解病毒的复制情况,疗效观察和预后判断均具有重要意义。

乙肝病毒外膜大蛋白、前S1抗原、HBV-DNA与血清标志物之间相关性分析

目的通过对乙型肝炎患者HBV-LP、Pre-S1抗原、HBV-DNA载量和乙型肝炎血清标志物的检测,探讨反映不同血清学类型患者体内病毒复制及抗病毒疗效监测的最佳指标以及分析各指标之间的关系。方法对864例HBV感染者及100例健康体检者血清采用ELISA法定性检测HBV-M;ELISA双抗体夹心法检测HBV-LP、Pre-S1;荧光定量PCR法检测HBV-DNA。结果 HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性模式组(大三阳)HBV-LP、Pre-S1及HBVDNA阳性率显著高于其它HBV-M模式组(P<0.05);HBV-LP与HBV-DNA的阳性率无显著差异(P>0.05),PreS1的阳性率明显低于HBV-LP与HBV-DNA的阳性率(P<0.05);HBV-DNA拷贝数与HBV-LP、Pre-S1平均A值具有明显的相关性(相关系数r=0.926),而与HBsAg定量值无明显相关性。结论 HBV-LP比Pre-S1试剂效果大大提高,且大蛋白的检出率与血液中病毒DNA的检出高度符合,对于判断病毒复制具有重要意义,可作为HBeAg及HBV-DNA的补充检测指标。

乙肝病毒/黄曲霉毒素B_1双暴露相关性肝细胞癌的p53基因249位点突变与p53蛋白表达的关系

目的研究乙肝病毒/黄曲霉毒素B1双暴露相关性肝细胞癌的p53基因249位点突变与p53蛋白表达关系。方法通过IHG特殊免疫组织化学法检测55例手术切除经病理证实为原发性肝癌的HCC组织及10例正常肝组织中AFB1-DNA加合物的暴露情况,并根据是否同时存在HBV暴露加以分组,通过免疫组化S-P法检测并比较各组间p53蛋白的表达情况。同时,通过PCR结合直接测序的方法检测其p53基因第7外显子249密码子的突变情况。结果 p53基因第7外显子249位点的突变在实验组A与对照组C中均具有较高阳性突变率,其突变率分别为68.75%(22/32)、63.64%(7/11),在对照组B中的突变率较低,为16.67%(2/12),在正常对照组中无1例出现有突变。其中实验组A与对照组B及正常对照组D的比较差异具有统计学意义(P<0.05),而与对照组C比较差异无统计学意义(P>0.05);p53蛋白在其基因249位点突变阳性组与阴性组中的表达阳性率分别为92.86%(26/28)、60.87%(16/27),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 HCC的发生过程中,AFB1暴露与p53第7外显子249位点的突变密切关系相关,当同时存在乙肝病毒暴露的协同作用的情况下突变率更高;p53基因的突变可能是造成HCC中p53蛋白高表达的重要因素之一。

乙肝病毒pre-S1基因的研究现状

乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒（Hepatitis B Virus,HBV）引起的以肝脏炎症和坏死病变为主的传染病,它是嗜肝脱氧核糖核酸病毒（Hepadnavirus）科中哺乳动物病毒属的一员，其外膜蛋白基因包括s蛋白、前S1蛋白（pre—S1）和前s2蛋白（pre—S2）3种成分。

乙肝病毒大蛋白与前S1抗原在乙肝诊断中的相关性及临床意义

乙肝病毒大蛋白（HBV-LP）存在于感染性Dane颗粒和亚病毒颗粒上,具有双重跨乙膜拓扑结构,并可反式激活细胞内HBV的复制,与HBV的感染、复制及其预后密切相关[1]。大蛋白上横跨部分前S1和前S2区的AA99-169形成环状Loop区,具有众多的免疫表位,对病毒粒子的形成具有重要的功能．