lncRNA在乙脑病毒感染PK15细胞过程中的作用研究

本研究旨在初步探索乙脑病毒(JEV)感染PK15细胞后的增殖情况,筛选与病毒感染相关的lncRNA,并对其进行亚细胞定位及靶基因预测。通过免疫荧光试验来检测病毒结构蛋白E的表达情况,采用TCID50法检测PK15细胞中病毒的增殖情况,利用实时荧光定量PCR检测病毒感染后lncRNA的表达水平,在NONCODE数据库对lncRNA进行亚细胞定位,通过starBase、NONCODE、KEGG等数据库对其进行靶基因预测和信号通路分析。结果显示,JEV感染PK15细胞后,24~36 h为病毒滴度指数增长期,感染后36 h病毒滴度已达10-5.75 TCID50/mL。PK15细胞在感染JEV 12 h后,lncRNA A、B、C表达水平均无显著变化(P>0.05),lncRNA D表达水平极显著下降(P<0.01);感染JEV 24、36和48 h后lncRNA A、B、C表达水平极显著上升(P<0.01),lncRNA D表达水平极显著下降(P<0.01)。lncRNA A主要定位在胞质溶胶,lncRNA B在细胞核和细胞质中均有分布,lncRNA C主要定位在细胞质中,在细胞核中也有可能分布,lncRNA D可能在细胞内呈现广泛性分布。通过靶基因预测和信号通路分析,lncRNA A、B、C的靶基因主要为OAS1、OAS2、OASL、COX1等,lncRNA D的靶基因主要为DST、ND1、ND2、ND4等。信号通路分析发现lncRNA可能通过肿瘤坏死因子(TNF)、NF-κB和Toll样受体(TLR)等信号通路参与病毒感染后的增殖过程。本研究为进一步探索宿主细胞lncRNA对病毒增殖的影响奠定一定的基础。

我国分离的西尼罗病毒与乙脑病毒生物学表型的比较研究

我国于2011年在新疆维吾尔自治区自然界采集的蚊虫标本分离到西尼罗病毒(West Nile virus,WNV),这是我国首次在自然界蚊虫标本分离到该病毒,但是一直缺少对该病毒生物学特性研究的报道。本研究利用细胞培养和动物实验的方法研究了我国首次在蚊虫分离的WNV(XJ11129株)对不同细胞系和动物的致病性,以及通过中和试验测定了病毒滴度及其与乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)P3株之间的交叉抗原特性。通过病毒感染细胞的超薄切片观察到XJ11129株WNV呈有包膜的球形颗粒,直径约为40～60nm;XJ11129株WNV对哺乳动物细胞(BHK-21和Vero)和蚊虫细胞(C6/36)细胞均可以引起细胞病变;接种BHK-21细胞显示WNV感染产生的蚀斑直径较JEV大;XJ11129株病毒接种C6/36细胞滴度可达108PFU/100μL;颅内接种2日龄乳鼠第2～3d即开始出现明显发病特征,第4d出现动物的肢体瘫痪并开始死亡,至第5d全部死亡。WNV和JEV的交叉中和试验结果显示,XJ11129株病毒对自身病毒株的中和抗体滴度可达1∶1 280,但对JEV的交叉中和抗体滴度仅有1∶10。综合以上结果提示,从我国新疆维吾尔自治区蚊虫分离的WNV XJ11129株对哺乳动物具有较强致病性,而目前尚无针对WNV感染有效的治疗方法和疫苗,因此,加强我国新疆维吾尔自治区WNV在人间传播的检测和监测具有重要意义。