黄芩苷对AcLDL+LPS诱导的与动脉粥样硬化相关巨噬细胞凋亡的影响

目的从c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路研究黄芩苷对乙酰化低密度脂蛋白(acetylate low-densitylipoprotein,AcLDL)联合脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)相关巨噬细胞凋亡的影响。方法收集小鼠腹腔巨噬细胞RAW 264.7进行体外培养,以100滋g·mL-1的AcLDL及1滋g·mL-1的LPS诱导巨噬细胞凋亡作为模型组,用黄芩苷低、中、高剂量组(120,240,480滋g·mL-1)进行干预,Annexin-V和PI双染后用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western-blot技术检测JNK蛋白表达及实时荧光定量PCR技术检测JNK mRNA表达。结果 AcLDL对照组、LPS对照组、AcLDL+LPS模型组与正常组比较,差异有统计学意义(P约0.01),Ac-LDL+LPS模型组细胞凋亡率明显高于正常组。黄芩苷中、高剂量组细胞凋亡率明显高于AcLDL+LPS模型组,差异有统计学意义(P约0.05,P约0.01)。AcLDL+LPS联合干预较AcLDL或LPS单独干预引起的磷酸化JNK高,随着黄芩苷干预剂量的增高,磷酸化JNK表达有升高的趋势。结论脂多糖和乙酰化低密度脂蛋白双重打击是诱导巨噬细胞凋亡的重要原因,JNK信号通路参与这一过程。黄芩苷可能通过增强磷酸化JNK表达来促进脂多糖和乙酰化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞早期凋亡,从而拮抗早期动脉粥样硬化的病理进程。

稳定高表达A型清道夫受体的人肾小球系膜细胞系的建立及其受体功能

目的探讨A型清道夫受体(SR-A)在人肾小球系膜细胞中的表达功能和受体特异性。方法采用脂质体转染法,将人SR-A cDNA转染入人肾小球系膜细胞,建立稳定高水平表达SR-A的人肾小球系膜细胞系(HMC-SCR)。RT-PCR法检测SR-A mRNA的表达,使用免疫荧光法、油红“O”细胞化学染色及激光共聚焦显微镜检测HMC-SCR对配体氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)和乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)的摄取及配体间的竞争作用。结果与未转染细胞相比,转染SR-A的HMCL对修饰低密度脂蛋白的摄取功能明显增强;40倍过量未标记的Ox-LDL、Ac-LDL竞争荧光D il标记的Ac-LDL的摄取,但未修饰的LDL对该受体无明显竞争抑制作用。结论Ox-LDL和Ac-LDL通过同一SR-A进入系膜细胞内,SR-A对修饰的低密度脂蛋白具有较高的亲和力和特异性。

亲脂素增加血管平滑肌细胞的脂质集聚

目的观察乙酰化的低密度脂蛋白（AcLDL）对血管平滑肌细胞亲脂素（adipophilin）表达的影响及亲脂素对血管平滑肌细胞的AcLDL摄取及脂质集聚的影响，从而探讨其在糖尿病大血管病变发生中的作用。方法以不同浓度AcLDL干预人血管平滑肌细胞（HVSMCs），应用Noahem印迹及Western印迹技术检测AcLDL对亲脂素表达的影响；以RNA干扰技术、流式细胞仪、酶法和油红O染色检测亲脂素对HVSMCs的脂质集聚及AcLDL摄取的影响。结果AcLDL呈剂量依赖性地增加HVSMCs的亲脂素的表达，沉默亲脂素基因使HVSMCs对AcLDL的摄取（降低38．7％，P〈0．05）和脂质集聚能力下降（甘油三酯、总胆固醇分别下降30．6％和29．8％，均P〈0．01）。结论亲脂素促进HVSMCs摄取AcLDL，增加HVSMCs脂质集聚，这可能是亲脂素促进动脉粥样硬化的机制之一。