HDAC2 siRNA转染对卵巢癌ovcar3细胞中p53和乙酰化p53k320表达的影响

目的:探讨靶向沉默组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)对人卵巢癌ovcar3细胞中p53乙酰化位点k320表达的影响。方法:将ovcar3细胞随机分为空白组、对照组和实验组3组,实验组以HDAC2 siRNA转染细胞,对照组转染对照siRNA,空白组不处理,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测3组细胞中HDAC2 mRNA和蛋白的表达,Western blot检测3组细胞中p53、乙酰化p53k320蛋白的表达。结果:与空白组及对照组相比,实验组HDAC2 mRNA和蛋白的表达降低(P<0.05),p53蛋白和乙酰化p53k320蛋白表达均升高(P<0.05)。结论:下调HDAC2的表达可使p53和乙酰化p53k320表达增加。

HDAC2与乙酰化P53k320在胃癌细胞中的表达及对其疗效的评价

目的 探讨胃癌的早期诊断及疗效评价指标。方法 选取胃癌患者130例,取其癌组织和癌旁组织,检测其HDAC2及乙酰化P53^k320阳性表达情况,HDAC2mRNA、HDAC2蛋白、乙酰化P53^k320蛋白表达量。结果 胃癌组织HDAC2阳性表达率高于癌旁组织,乙酰化P53^k320阳性率低于癌旁组织(P <0.01)。胃癌细胞中HDAC2mRNA、HDAC2蛋白表达量均高于癌旁细胞,乙酰化P53k320蛋白表达量低于癌旁细胞(P <0.01)。CR、PR、SD、PD组患者癌组织中HDAC2蛋白表达量呈增高趋势,乙酰化P53k320蛋白表达量呈降低趋势(P <0.01)。结论胃癌细胞中HDAC2、乙酰化P53^k320蛋白表达情况与治疗效果密切相关。

新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂DWP0016诱导神经胶质瘤细胞U251周期阻滞及凋亡作用研究

目的:观察新型组蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylases,HDACs)抑制剂DWP0016对神经胶质瘤U251细胞株的作用,探讨诱导U251细胞周期阻滞及凋亡作用的机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测DWP0016对U251细胞株的增殖抑制作用;采用流式细胞术观察DWP0016对U251细胞周期的影响及凋亡诱导作用;采用实时定量PCR(real-time PCR)检测抑癌因子P21,P53的mRNA水平变化;蛋白免疫印迹法(Western blotting)测定Ac-H3,P21,P53,Pi3K,p-Pi3K,Akt,p-Akt的蛋白表达并进行光密度定量。结果:DWP0016抑制U251细胞增殖的半数抑制浓度(IC50=0.531μmol.L-1)明显低于阳性对照奥沙利铂(IC50=4.792μmol.L-1),组蛋白H3乙酰化水平显著上升;DWP0016作用后,U251细胞中细胞周期阻滞于G1期并产生凋亡,P21,P53的mRNA水平和蛋白水平明显上升,Pi3K/Akt通路中的Pi3K,Akt的磷酸化水平下降。结论:DWP0016能明显抑制U251细胞增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡产生,其机制与促进抑癌因子P21,P53的转录及蛋白表达,抑制细胞中Pi3K/Akt生长信号通路有关,具有良好的抗神经胶质瘤潜力和开发应用前景。

HDAC2与乙酰化p53k320相互作用对胃癌细胞生物学功能的影响

目的:探究HDAC2与乙酰化p53^k320相互作用对胃癌细胞生物学功能的影响,为生物靶向治疗胃癌提供新的靶点和思路。方法:研究开展时间2018年1月-2019年9月。将人胃癌细胞株(SGC7901,BGC823,MKN45)和正常胃黏膜细胞株(GES1)分别置于RPMI-1640培养基(10%小牛血清及青霉素、链霉素双抗)以及37℃、5%CO2饱和湿度培养箱环境中培养,在显微镜下观察细胞生长融合度达到80%时进行细胞传代;采用RT-qPCR法检测肿瘤细胞和正常细胞HDAC2蛋白表达情况,采用Western blot法检测p53、p53^k320蛋白表达情况,比较HDAC2与乙酰化p53^k320表达水平;构建HDAC2表达下调/上调细胞系,进行细胞植瘤试验,比较分析各组胃癌细胞活性。结果:①与正常胃黏膜细胞比较,胃癌细胞内HDAC2、p53、p53^k320蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);②HDAC2表达下调细胞系检测乙酰化p53^k320蛋白表达升高,胃癌细胞活力下降,差异较为显著(P<0.05)。结论:抑癌基因p53在胃癌病变中发生突变情况较少,提示存在其他细胞存活机制;HDAC2蛋白表达对p53^(k320)的去乙酰化在肿瘤细胞存活发展中有重要意义,下调HDAC2表达可能通过上调乙酰化p53^(k320)对胃癌细胞生物学功能产生抑制作用。