乙酰氨基阿维菌素浇泼剂对奶牛线虫病的疗效试验

为探索治疗奶牛线虫病疗效好、方便、对奶牛应激反应小的药物和剂型,将乙酰氨基阿维菌素研制成2种配方的浇泼剂,即配方Ⅰ和配方Ⅱ。在同一个奶牛小区将37头自然感染线虫病的奶牛分为8个组:配方Ⅰ低剂量组(0.05 mL/kg)、配方Ⅰ中剂量组(0.10 mL/kg)、配方Ⅰ高剂量组(0.20 mL/kg);配方Ⅱ低剂量组(0.05 mL/kg)、配方Ⅱ中剂量组(0.10 mL/kg)、配方Ⅱ高剂量组(0.20 mL/kg);进口伊维菌素浇泼剂对照组;空白对照组。除药物对照组2头奶牛外,其余每组5头奶牛。在投药前和投药后d7、d14、d21、d28、d35、d42、d49、d56、d63采集试验奶牛粪便检测线虫和前后盘吸虫虫卵数量。结果显示,投药后d7,6个试验组和1个药物对照组的奶牛粪便中线虫虫卵全部转阴,这表明研制的乙酰氨基阿维菌素配方Ⅰ和配方Ⅱ的低剂量组、中剂量组、高剂量组对奶牛的线虫病治疗具有很好效果。

乙酰氨基阿维菌素浇泼剂对奶牛螨虫病的疗效试验

为探索治疗奶牛螨虫病疗效好、使用方便、对奶牛应激反应小的药物和剂型,将乙酰氨基阿维菌素制成2种浇泼剂剂型,即配方Ⅰ和配方Ⅱ。在同一个奶牛场将35头自然感染螨虫病的奶牛分为7组,包括配方Ⅰ低剂量组、配方Ⅰ中剂量组、配方Ⅰ高剂量组、配方Ⅱ中剂量组、配方Ⅱ高剂量组、伊维菌素浇泼剂对照组、空白对照组,每组5头奶牛,分别进行用药。在投药前、投药后每隔7 d检查1次,至用药后第9周为止。结果表明,两种配方制成的乙酰氨基阿维菌素浇泼剂对奶牛螨虫病均具有疗效,其疗效依次为配方Ⅰ高剂量组>配方Ⅰ中剂量组>配方Ⅱ中剂量组>配方Ⅱ高剂量组>配方Ⅰ低剂量组,配方Ⅰ高剂量组的疗效与药物对照组的疗效相同。

乙酰氨基阿维菌素在动物医学中的研究进展

乙酰氨基阿维菌素是第1个可以应用于奶牛和肉牛,而不需要休药期的广谱抗寄生虫药,就乙酰氨基阿维菌素在动物医学中的研究进展进行了综述。

乙酰氨基阿维菌素对奶牛的驱虫效果及生产性能的影响

本文对乙酰氨基阿维菌素的驱虫效果及对泌乳奶牛生产性能的影响进行试验,结果表明,所有不同组试验牛平均泌乳量在给药后均有变化,其中在给药前30d,给药组平均泌乳量为26.01±5.03kg/d.头,对照组为25.32±4.28kg/d.头;给药60d后,试验组奶牛的产奶量24.72kg/d.头;对照组奶牛的产奶量22.14kg/d.头。给药前30d,给药组平均泌乳量比对照组多0.69kg/d.头,给药60d后试验组比对照组多1.89kg/d.头。

乙酰氨基阿维菌素口服液的制备工艺及稳定性研究

为了充分发掘乙酰氨基阿维菌素的应用潜力,对乙酰氨基阿维菌素口服液的制备工艺进行了研究。结果表明:以乙醇为主的混合溶剂作为溶媒介质,以聚山梨酯80作为稳定剂制备的乙酰氨基阿维菌素口服液,其有效成分含量达98.7%左右;在光照强度为(4 500±500)Lx,温度为40℃条件下,保存1个月后,口服液的外观色泽无明显变化,且有效成分含量基本保持不变。研究结果说明该制备工艺操作简单,适用于产业化生产,具有较大的开发应用前景。

乙酰氨基阿维菌素乳剂HPLC含量检测方法的建立

[目的]建立高效液相色谱法测定乙酰氨基阿维菌素乳剂含量的方法。[方法]采用C18(150×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈—水(70∶30)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为245 nm,进样量为20μL,柱温为25℃。[结果]乙酰氨基阿维菌素在0.1~20μg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系,标准曲线方程为C=1.6015A-0.00206,r=1.000 (n=5),该方法的RSD在0.72%~1.40%,平均回收率在96.5%~100.5%。[结论]该方法灵敏度高、准确度高、重现性好、简便快速,可用于乙酰氨基阿维菌素乳剂和其他剂型的质量控制。

乙酰氨基阿维菌素国家对照品的研制

以乙酰氨基阿维菌素为原料研制首批乙酰氨基阿维菌素国家对照品,并进行质量评价。采用高效液相色谱法和质谱法对原料进行结构确证,分装后的乙酰氨基阿维菌素对照品采用质量平衡法定值,同时采用高效液相色谱外标法加以佐证。结果显示,以质量平衡法计算乙酰氨基阿维菌素(B_(1a)+B_(1 b))含量为97.79%,液相色谱外标法测定含量为98.18%,两种方法测定结果基本一致。本次研制的乙酰氨基阿维菌素对照品可用于乙酰氨基阿维菌素及其制剂的鉴别与含量测定。

乙酰氨基阿维菌素对奶牛寄生虫治疗效果评价实验

为评价乙酰氨基阿维菌素在治疗奶牛寄生虫的治疗效果,进行了本评价试验。实验用10头经粪便检查为阳性的奶牛,在用药前后进行粪便中寄生虫虫卵计数,分析乙酰氨基阿维菌素的治疗效果。结果:第8d,10头奶牛寄生虫虫卵的下降率平均值为34%,第15d,10头奶牛的寄生虫虫卵的下降率平均值为45%。奶牛产奶量无显著变化。结论:乙酰氨基阿维菌素对奶牛的体内线虫有较好的杀灭作用。乙酰氨基阿维菌素对奶牛的食欲、健康、产奶性能无显著影响。

乙酰氨基阿维菌素缓释注射剂中乙酰氨基阿维菌素含量与有关物质HPLC检测方法的建立

试验旨在建立一种高效液相色谱检测方法,同时测定乙酰氨基阿维菌素(EPR)缓释注射剂的主成分与有关物质,采用外标法计算主成分的含量,采用自身对照法计算有关物质的含量。色谱柱为Phenomenex Luna 5μ-C8-100A 250 mm×4.60 mm,5μm;色谱条件为:流动相为乙腈-0.1%高氯酸水溶液,梯度洗脱,流速为1.5 mL/min,检测波长为245 nm,柱温为35℃,进样量为20μL。结果表明,EPR缓释注射剂主成分与杂质分离度良好,B1a与B1b之间分离度>3;在EPR浓度为1.5625~1000μg/mL的范围内线性关系良好;EPR的检测限与定量限分别为0.01和0.34μg/mL,3种精密度的相对标准偏差(RSD)均<2%,稳定性的RSD为0.28%,加样回收率为102.54%,且RSD为3.14%(n=9)。耐用性试验表明,EPR缓释注射剂主成分的分离度均>1.5,理论塔板数>4500,表明该检测条件的耐用性良好。3批样品中,EPR缓释注射剂含量的平均值为102.60%,B1b占B1a与B1b之和的1.68%,总杂质的平均含量为2.57%。建立的EPR缓释注射剂中主成分含量与有关物质的测定方法具有简便、专属性强、灵敏度高、结果准确等特点,可用于EPR缓释注射剂的质量控制。

乙酰氨基阿维菌素注射用缓释剂质量标准与药学等效研究

依据《中华人民共和国兽药典》与《兽药研究技术指导原则汇编》等相关指导要求,对乙酰氨基阿维菌素(EPR)注射用缓释剂进行外观、黏度、pH、水分、密度、内毒素、含量及有关物质检测,建立EPR注射用缓释剂的质量标准并比较与参比制剂的药学等效性。含量与有关物质检测方法为使用ZORBAX Eclipse Plus C18柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm);流动相:甲酸∶水∶乙腈(0.04 mL∶40 mL∶60 mL);流速:0.4 mL/min;检测波长:245 nm;柱温:35℃;进样量:2μL。在37℃,转速为50 r/min,0.5%SDS的PBS缓冲液条件下,比较自研与原研EPR注射用缓释剂的药学等效性。EPR注射用缓释剂外观澄清透明,平均相对黏度为46.45 mPa·s,平均pH为6.88,制剂中不含水分,密度为1.13 g/cm^(3),内毒素满足<0.1 EU/mL限度,含量>5%的标示值,有关物质的量<5%,检测结果均符合注射剂制剂要求;在同一条件下释放31 d后,自研与原研EPR注射用缓释剂累积释放量均超过80%,且自研与原研的相似因子(f2)值>50。自研EPR注射用缓释剂的检测结果均符合注射剂标准,自研与原研EPR注射用缓释剂具有药学等效。

顶空气相色谱法测定乙酰氨基阿维菌素对照品中的残留溶剂

建立了乙酰氨基阿维菌素对照品中的残留溶剂乙醇、甲醇和丙酮的顶空气相色谱测定法。采用Agilent-HP-5毛细管色谱柱,以氮气为载气,氢火焰离子化检测器为检测器,进样口温度200℃,检测器温度为250℃,以起始温度50℃,保持10 min,再以每分钟10℃的速率升温至180℃,顶空瓶平衡温度为80℃,平衡时间为30 min。结果表明,在该色谱条件下乙醇、甲醇和丙酮与空白溶剂N,N-二甲基甲酰胺分离良好。乙醇在11~974μg/mL的范围内线性关系良好,检测限为5μg/mL,定量限为11μg/mL,回收率为92.1%~109.9%;甲醇在8~606μg/mL的范围内线性关系良好,检测限为4μg/mL,定量限为15μg/mL,回收率为94.4%~109.5%;丙酮在12~972μg/mL的范围内线性关系良好,检测限为2μg/mL,定量限为6μg/mL,回收率为92.5%~102.4%。该方法分离度好,回收率高,适用于乙酰氨基阿维菌素对照品中残留溶剂的检测。

乙酰氨基阿维菌素原位凝胶注射剂中乙酰氨基阿维菌素含量的HPLC测定

建立了乙酰氨基阿维菌素(eprinomectin,EPR)原位凝胶注射剂中乙酰氨基阿维菌素含量测定的高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)。样品经色谱甲醇溶解后,利用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱分离,流动相为乙腈∶水∶甲酸(60mL∶40mL∶0.04mL),流速为0.4mL/min,紫外检测波长为245nm,柱温为35℃。EPR在1.562 5μg～200μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8),平均回收率为99.61%,RSD为0.47%(n=6)。试验结果表明,所建立的HPLC法快速简便、准确可靠,可用于EPR原位凝胶注射剂中EPR含量的测定。

乙酰氨基阿维菌素的合成工艺

乙酰氨基阿维菌素是一种高效广谱驱虫兽药。本研究以阿维菌素经AVMB1C5—OH保护反应、C4″—OH氧化反应的产物（4″-氧-5-O-烯丙氧甲酰基阿维菌素B1）作为起始原料,在反应器中连续进行氨化反应、还原反应、解C5的保护基反应,将所得反应液进行过滤、萃取,得到的有机液相直接进行乙酰化反应,再通过结晶、干燥后得到乙酰氨基阿维菌素成品。该路线与现有工艺比较,减少了工艺步骤,更换了氨化反应催化剂,优化了合成条件,使总收率提高4.6-6.8百分点,形成了一条适宜工业化生产的合成工艺路线。

两种固相萃取柱在乙酰氨基阿维菌素药动学前处理中的比较

为评价乙酰氨基阿维菌素(EPR)药动学前处理中两种固相萃取(SPE)柱的净化、萃取效果,首先在空白胎牛血清中加入一定量的EPR标准溶液,经色谱甲醇提取后,分别经Agilent和Waters公司的C_(18) SPE柱对其进行萃取,再经N-甲基咪唑和三氟乙酸酐衍生化,最后用超高效液相色谱-荧光检测器进行测定;同时,将等量的EPR标准溶液进行衍生化,用超高效液相色谱-荧光检测器进行测定,将其结果作为对照;以绝对回收率作为评价两种SPE柱净化、萃取EPR效果的标准。结果显示,含有EPR的胎牛血清分别经Agilent和Waters公司的C_(18) SPE柱萃取后,两者的EPR峰形均尖锐对称且无明显杂质峰,但绝对回收率有差异,分别为94.50%和85.79%。结果表明,Agilent公司的C_(18) SPE柱对EPR的萃取效果更理想。

3种固相萃取柱在测定牛血清样品中乙酰氨基阿维菌素前处理中的比较研究

初步评价在乙酰氨基阿维菌素药动学前处理中3种固相萃取柱对乙酰氨基阿维菌素的净化、萃取效果。首先在空白胎牛血清中加入一定量的乙酰氨基阿维菌素标准溶液,经色谱甲醇提取后,分别经Agilent公司、Waters公司和Agela Technologies公司的C_(18)SPE柱进行萃取(分别简称A固相萃取柱、W固相萃取柱、AT固相萃取柱),再经N-甲基咪唑和三氟乙酸酐衍生化,最后用超高效液相色谱-荧光检测器进行测定。与此同时,将等量的乙酰氨基阿维菌素标准溶液进行衍生化,用超高效液相色谱-荧光检测器进行测定,其结果作为对照。以绝对回收率作为评价3种SPE柱净化、萃取EPR效果的标准。结果显示,含有EPR的胎牛血清经A固相萃取柱萃取后,EPR峰形尖锐对称且无明显杂质峰,其绝对回收率为80.79%;经W固相萃取柱萃取后,乙酰氨基阿维菌素峰形尖锐对称且无明显杂质峰,其绝对回收率为83.61%;经AT固相萃取柱萃取后,乙酰氨基阿维菌素峰形尖锐对称且无明显杂质峰,其绝对回收率仅为64.20%。相对于A与AT固相萃取柱,Waters公司的C_(18)SPE柱萃取EPR的效果更好。研究结果为后期乙酰氨基阿维菌素的药物代谢动力学试验奠定了基础。

在线柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定牛奶中乙酰氨基阿维菌素残留量

目的建立一种在线柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定牛奶中乙酰氨基阿维菌素残留量。方法试样经饱和氯化钠水溶液盐析后,利用乙腈-二氯甲烷溶液提取,氮气吹干、10%(体积分数)N-甲基咪唑-乙腈溶液复溶、乙腈饱和正己烷多次净化。利用进样程序对净化后的溶液进行在线柱前衍生,高效液相色谱仪分离,荧光检测器检测,以保留时间定性,峰面积定量。结果结果表明,在25~400 ng/mL浓度范围内,标准曲线线性关系良好,相关系数r2大于0.999;该方法的回收率在94.8%~103.8%之间,相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)均小于1.5。结论该方法非常简便,且具有较高的准确度、灵敏度和稳定性,适用于牛奶中乙酰氨基阿维菌素残留的检测。

鸡血浆中乙酰氨基阿维菌素HPLC检测法的建立及口服给药后的药代动力学研究

旨在建立鸡血浆中乙酰氨基阿维菌素(EPR)浓度的高效液相色谱(HPLC)检测方法,并进行EPR在鸡体内的药代动力学研究。用甲醇提取血浆中的EPR,并用Sep-Pak C18固相萃取法进行纯化,纯化后的EPR经干燥处理,用三氟乙酸酐和N-甲基咪唑对其进行衍生化,使用荧光HPLC检测。结果表明,在血浆EPR含量为0.1~100 ng/mL范围内,标准曲线线性关系良好,相关系数r=0.9999。检测限(LOD)为0.1 ng/mL,定量限(LOQ)为0.3 ng/mL。批内批间的平均回收率均大于90%,批内变异系数2.81%~8.02%,批间变异系数4.32%~5.83%。给蛋鸡口服5.0 mg/kg的EPR,EPR在鸡体内的药代动力学参数显示:给药后1.58 h可达最大血药浓度(Cmax) 354.27 ng/mL;消除半衰期(T1/2el)为5.52 h;平均滞留时间(MRT)为6.40 h。结果说明建立的检测方法灵敏度高、准确度高,干扰少,适用于鸡血浆中EPR含量的检测。药代参数提示EPR在鸡体内的吸收代谢迅速,可较快消除。

高效液相色谱法测定牛奶中乙酰氨基阿维菌素的残留量

旨在建立一种测定牛奶中乙酰氨基阿维菌素残留量的高效液相色谱方法。试样经乙腈涡漩提取,利用C-18固相萃取小柱净化,浓缩、衍生化、定容后,应用高效液相色谱仪分离,荧光检测器检测,以保留时间定性,以峰面积定量。结果表明,在0.5~100 ng/m L浓度范围内,标准曲线线性关系良好,相关系数r大于0.999;在1~40 ng/g添加范围内,方法回收率在65.2%~96.2%,批内变异系数小于15%,批间变异系数小于10%。试验结果说明建立的方法简便、灵敏度高、稳定性好,适用于牛奶中乙酰氨基阿维菌素残留量的检测。

乙酰氨基阿维菌素原位凝胶注射剂体外释放度测定方法研究

研究乙酰氨基阿维菌素(Eprinomectin,EPR)原位凝胶注射剂体外释放度的测定方法,采用高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)测定EPR原位凝胶注射剂的体外释放度。结果表明,采用HPLC测定EPR原位凝胶注射剂体外释放度方法是可行的,体外释放曲线表明EPR原位凝胶注射剂有缓释的特点。以pH 7.4的PBS缓冲溶液作为释放介质的HPLC适用于EPR原位凝胶注射剂体外释放度的测定。

乙酰氨基阿维菌素原位凝胶注射剂对小鼠的急性毒性研究

为了对乙酰氨基阿维菌素原位凝胶注射剂的安全性进行评价,采用简化寇氏法进行了小鼠的急性毒性研究。首先通过预试验的最小致死剂量(LD_(100))和最大耐受剂量(LD_0)确定给药剂量及试验分组。皮下注射给药,观察7 d,记录死亡数,计算LD_(50)及95%的置信区间。结果表明,乙酰氨基阿维菌素原位凝胶注射剂对小鼠的急性毒性LD_(50)为5.903 g/kg,95%置信区间为5.105 3~6.415 0 g/kg。按照化学药物剂量分级,乙酰氨基阿维菌素原位凝胶注射剂可认定为实际无毒物质,说明该药临床皮下注射使用安全。