灯盏乙素对痴呆大鼠脑组织乙酰胆碱尼古丁受体蛋白及mRNA表达的作用

目的观察灯盏乙素对痴呆模型大鼠乙酰胆碱尼古丁受体(nAChR)亚单位蛋白质和mRNA水平表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法 Wistar大鼠42只,随机分为5组,正常对照组(6只)、假手术组(6只)、学习记忆损伤模型组(6只)、灯盏乙素处理组(10只)和脑复康处理组(10只)。用双侧脑室注射β淀粉样蛋白(Aβ25-35)联合腹腔注射D-半乳糖方法建立痴呆大鼠模型;用灌胃方法分别进行灯盏乙素和脑复康给药处理;用Morris水迷宫方法检测大鼠学习记忆能力;用蛋白质印迹法和实时定量聚合酶链法分别从蛋白质水平和mRNA水平测定大鼠海马组织nAChR亚单位α4、α7及β2表达的变化。结果与正常对照组和假手术组比较,模型组大鼠学习记忆能力下降(P<0.05),α4及α7 nAChR蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而β2亚单位改变不明显,3种亚单位nAChR的mRNA表达水平未见改变(P>0.05);用灯盏乙素处理后痴呆大鼠学习记忆能力有较大改善(P<0.05),α4、α7 nAChR蛋白表达水平有所回升(P<0.05);各组大鼠3种亚型nAChR的mRNA表达水平未见改变(P>0.05),灯盏乙素处理组与脑复康处理组比较各检测指标未见明显差异(P>0.05)。结论灯盏乙素可改善痴呆大鼠学习记忆能力,其机制可能与其上调nAChR表达有关。

尼古丁乙酰胆碱受体在烟草相关癌症中的研究进展

目前,每年吸烟可引起大约5～6百万人死亡,其中吸烟引起的癌症死亡占所有癌症死亡总数的30%以上。烟草中的成瘾成分尼古丁和其衍生的致癌物质亚硝胺可以通过激活尼古丁乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChRs)而导致癌症的发生。尼古丁在支气管上皮细胞可通过氧化应激反应而引起DNA损伤,此外,尼古丁可诱发肿瘤的发生,但其在致癌方面的作用尚不明确。本文就近几年nAChRs与烟草相关癌症发生、发展的研究进展进行综述。

尼古丁及尼古丁乙酰胆碱受体在肺癌发生发展过程中的作用

肺癌是目前世界上最常见的癌症之一,约占所有癌症病例的15%,而吸烟是目前公认的引起肺癌的主要危险因素之一,在发展中国家,约80%的肺癌病例与吸烟有关[1]。肺癌的预后总体上仍然不是很乐观,男性的5年生存率为6%-14%,女性为7%-18%[2]。在香烟烟雾约4,000多种化学物质中,已有60多种被确定为致癌物,它们大多通过与DNA相互作用,导致DNA加合物的形成,从而引起细胞中遗传物质或基因的改变。尼古丁是烟草的主要成分之一,其作用主要是导致吸烟者的成瘾性。

神经型尼古丁乙酰胆碱受体在阿尔茨海默病中的神经保护作用

老年性痴呆主要分为三种：一种叫阿尔茨海默病（AD）,其最为常见,大约占68%;第二种叫血管性痴呆（VD）,是一种由于血供不足引起的不同大脑区域损伤所致的渐进性认知障碍;第三种是以上两种病症并存,叫混合性痴呆。

不同形式Aβ对老年痴呆细胞模型中炎性因子和神经型尼古丁乙酰胆碱受体表达的影响

目的研究Aβ寡聚体(Amyloid-beta oligomers,Aβoligomers,AβOs)在阿尔茨海默氏病(Alzheimer Disease,AD)患者中的表达情况,用不同聚集形式的Aβ处理拟老年痴呆细胞模型中肿瘤坏死因子-α(Tumor necro-sis factor-α,TNF-α)、炎性趋化因子单核细胞趋化蛋白1(Monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1/CCL-2),巨噬细胞炎性蛋白-1α(Macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α/CCL-3)及神经型尼古丁乙酰胆碱受体(Neuronal nico-tinic acetylcholine receptors,nAChRs)的表达。探讨炎性因子及nAChRs与Aβ寡聚体在阿尔茨海默氏病发病机制中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测AD患者(海马结构、颞叶及额叶皮质)Aβ寡聚体的表达。Elisa检测拟老年痴呆细胞模型中各组细胞TNF-α、MCP-1、MIP-1α的表达。Western blotting检测拟老年痴呆细胞模型中各组细胞α3、α7nAChRs的表达。结果 AβOs主要在神经细胞内表达,齿状回颗粒细胞、海马CA1-CA4锥体细胞及内嗅区皮质各层神经元胞体及突起内均见棕黄色粒状阳性表达,此外,小血管壁也见AβOs阳性表达。与老龄对照者相比,AD患者海马各区锥体细胞及内嗅区皮质各层神经元AβOs表达明显增强,半定量分析显示平均灰度值显著降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。采用1mol/L浓度的Aβ1-42单体、纤丝体及寡聚体处理SH-SY5Y细胞48h后与对照组相比,Aβ寡聚体处理组α3、α7nAChRs蛋白表达水平明显降低,炎性因子明显升高(P<0.05)。结论 Aβ寡聚体能升高TNF-α、MCP-1、MIP-1α,加速Aβ沉积,形成恶性循环的慢性炎症过程,降低神经型尼古丁乙酰胆碱受体α3、α7nAChRs的表达,说明AD发病机制中可溶性、呈寡聚状态的AβOs可能是引起AD神经元功能失调的主要神经毒性形式。

Eph/Ephrin-B1通过Src酪氨酸激酶/丝裂原活化蛋白激酶信号抑制睫状神经节神经元的尼古丁乙酰胆碱受体电流

本研究旨在探讨Eph/Ephrin-B1信号对急性分离的鸡胚睫状神经节(ciliary ganglion,CG)神经元上α3-尼古丁乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,α3-nAChRs)和α7-尼古丁乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,α7-nAChRs)电流的影响及可能机制。用膜片钳技术在急性分离的CG神经元上分别记录α3-nAChRs和α7-nAChRs全细胞电流。为检测Ephrin-B1对细胞nAChRs电流的影响,细胞被随机分为:对照组、Ephrin-B1Fc处理组(用Ephrin-B1与IgG重组后形成的Ephrin-B1Fc刺激细胞)、IgG处理组(用与Ephrin-B1Fc处理组重组所需的相同浓度的IgG刺激细胞)和Ephrin-B1处理组(用与Ephrin-B1Fc处理组重组所需的相同浓度的Ephrin-B1刺激细胞)。为探讨Ephrin-B1调节细胞nAChRs电流的机制,分别用Src信号抑制剂PP2和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号抑制剂PD98095预处理细胞后,再用Ephrin-B1Fc处理细胞,观察α3-nAChRs和α7-nAChRs电流的变化,细胞被随机分为:对照组、Ephrin-B1Fc处理组、PP2或PD98095(PP2/PD)处理组、Ephrin-B1Fc+PP2或PD98095处理组。结果显示:对照组、IgG处理组和Ephrin-B1处理组之间α3-nAChRs和α7-nAChRs电流无显著差异,而Ephrin-B1Fc处理组可显著抑制α3-nAChRs和α7-nAChRs电流,与对照组比较有显著差异(P=0.002、P=0.003);此外,PP2可部分恢复被Ephrin-B1Fc所抑制的α7-nAChRs电流,PD98095则可部分恢复被Ephrin-B1Fc所抑制的α3-nAChRs电流。以上结果提示,Eph/Ephrin-B1信号可能分别通过MAPK和Src信号途径抑制急性分离的CG神经元上α3-nAChRs和α7-nAChRs的电流,表明Eph/Ephrin-B1可能参与交感神经系统功能的调控。

基于中药数据库的α7型尼古丁乙酰胆碱受体抑制剂的虚拟筛选

研究了DMXB-A与α7型尼古丁乙酰胆碱受体(α7 nAchR,这里指α7二聚体)的结合模型,并以DMXBA为模板化合物,采用相似性搜索从中药数据库中筛选出19个中药分子,运用分子对接技术,研究了19个中药分子与α7型尼古丁乙酰胆碱受体的结合模式,最终筛选出一个最佳的分子Mol7235,并进一步研究了该分子与α7二聚体的活性口袋的非键作用和分子表面匹配情况.

神经型尼古丁乙酰胆碱受体α7亚单位基因多态性与散发性Alzheimer病的关联分析

目的探讨散发性Alzheimer病(SAD)与神经型尼古丁乙酰胆碱受体α7亚单位(CHRNA7)基因多态性的关系。方法用聚合酶链式反应温度梯度凝胶电(PCRTGGE)和DNA测序技术分析16例SAD患者及16名正常人CHRNA7基因全部10个外显子及其两侧的部分内含子序列和内含子4的部分基因序列。结果在CHRNA7基因上发现2个新的多态性位点;内含子3区的133418G/C突变,两组相比差异无显著性(χ2=4.571,P>0.05);内含子7上的117643+GTG三碱基插入突变,两组相比差异无显著性(χ2=1.032,P>0.05)。结论在CHRNA7基因上发现的2个新的多态性位点与SAD的发病无显著相关性。

EphB/Ephrin-B1信号对睫状神经节α7-尼古丁乙酰胆碱受体电流的影响

目的探讨EphB/Ephrin-B1信号对鸡胚睫状神经节(CG)神经元上α7-尼古丁乙酰胆碱受体(α7-nAChRs)电流的影响。方法用膜片钳技术分别在培养的和急性分离的CG神经元上记录α7-nAChRs电流。细胞被随机分为:对照组、Ephrin-B1Fc处理组、IgG处理组和Ephrin-B1处理组,观察电流的变化。结果对照组、IgG组和Ephrin-B1处理组之间α7-nAChRs电流无显著差异(P>0.05),而这3组与Ephrin-B1Fc处理组之间有显著差异(P<0.05)。Ephrin-B1Fc可浓度依赖性抑制α7-nAChRs电流,该过程可在数分钟内发生,并呈现可逆性。培养的和急性分离的CG神经元Ipeak/Cm的IC50分别为0.032mg/L和1.4mg/L。结论Eph/Ephrin-B1信号可影响CG神经元α7-nAChRs的电流,提示Eph/Ephrin-B1可能参与交感神经系统功能的调控。

α3神经型尼古丁乙酰胆碱能受体在阿尔茨海默病中的抗炎作用

目的探讨α3nAChRs在阿尔茨海默病(AD)中的抗炎作用。方法应用Western印迹,ELISA及实时定量PCR检测各组细胞核因子(NF-κBp65)和炎性趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1),巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白及mRNA表达情况。结果与对照组比较,淀粉样蛋白(Aβ)处理α3nAChR siRNA SH-SY5Y细胞NF-κBp65、TNF-α蛋白及mRNA表达增加(P<0.05);MCP-1、MIP-1α表达变化不明显。结论 Aβ引起SH-SY5Yα3nAChR siRNA细胞NF-κBp65、TNF-α蛋白及mRNA表达升高,α3nAChR可能具有一定抗炎作用。

尼古丁对PDLFs细胞乙酰胆碱受体(nAChR)表达的影响

目的探讨尼古丁诱导的牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)凋亡的信号转导机制。方法本研究用1μg/ml,10μg/ml和100μg/ml不同浓度的尼古丁干预PDLFs细胞24h后,采用RT-PCR方法检测尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)的表达变化。结果不同浓度的尼古丁试验组(1μg/ml、10μg/ml和100μg/ml)作用于PDLFs细胞24h后,nAChR的mRNA表达水平显著增加,与正常对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05),且随着尼古丁剂量的增加,nAChR的基因表达水平随之增高(r=0.948,F=254.231,P=0.000)。结论尼古丁致PDLFs细胞凋亡可能是通过nAChR起作用的。

肿瘤中尼古丁乙酰胆碱受体对细胞增殖和细胞凋亡的作用

吸烟是肿瘤和心血管疾病的关键因素之一,尼古丁是烟草的主要有效成分,已发现尼古丁在非神经细胞上通过nAchRs促进肿瘤生长和生存。nAchRs的促存活和有丝分裂作用为这些现象提供了可能的分子机制。nAchR类似物的发展将有助于nAchR信号通路的研究,有利于与烟草相关肿瘤的抗癌药物的设计。

血管性痴呆患者血中胆碱酯酶活性及神经型尼古丁受体mRNA表达水平变化

目的探讨血管性痴呆(vascular dementia,VD)患者血中胆碱酯酶活性及神经型尼古丁乙酰胆碱能受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAchR)mRNA表达的变化。方法分组比较测定59例血管性痴呆、33例正常老年人空腹血浆胆碱酯酶浓度及血液白细胞nAchRα4、β2亚单位mRNA表达水平。结果血管性痴呆组与对照组乙酰胆碱酯酶活性分别为(1.70±1.17nmol/min/ml,2.18±0.87nmol/min/ml),VD组与对照组相比差异有显著性(P<0.05);VD组与对照组丁酰胆碱酯酶活性分别为(61.08±38.23nmol/min/ml,70.41±28.82nmol/min/ml),相比差异无显著性(P<0.05)。乙酰胆碱酯酶及丁酰胆碱酯酶均无性别的差异;VD患者血液白细胞nAchRα4亚单位mRNA表达水平(0.926±0.411)较正常对照组(1.41±0.22)降低(P<0.05);VD患者nAchR β2亚单位mR-NA表达水平(2.14±0.18)与正常对照组(2.19±0.16)差异无显著性(P<0.05)。结论血管性痴呆患者血浆乙酰胆碱酯酶活性和血液白细胞中nAchR α4亚单位mRNA表达水平较正常对照老年人降低,但丁酰胆碱酯酶和nAch β2 mRNA无改变,这些变化可能对血管性痴呆的诊断有一定临床意义。

中枢尼古丁乙酰胆碱受体与中枢神经系统病变相关性

尼古丁乙酰胆碱受体（n ARhR）在中枢神经系统广泛表达,内源性乙酰胆碱和外源性尼古丁可作用于该受体,从而调节脑活性和生理功能。中枢的尼古丁受体激活后诱导神经营养因子的表达增加,激活细胞内信号传导途径,抑制炎症反应,从而保护神经元免于损伤,在抵抗帕金森病（PD）、改善认知功能等中起重要作用。本文对中枢型尼古丁受体的结构、分布及其与中枢神经系统疾病的相关性进行综述。

α7尼古丁受体基因抑制对SH-SY5Y细胞胆碱酯酶及胆碱乙酰化酶水平的影响

目的采用RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7神经型尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达,了解对细胞胆碱酯酶(AChE)及胆碱乙酰化酶(ChAT)水平的影响。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7 nAChR的小干扰RNA(siRNA),用real-time PCR法和Western blotting法分别测定细胞中α7nAChR、AChE及ChAT在mRNA和蛋白表达水平的变化。结果转染α7 nAChR siRNA后,与对照组相比,α7nAChR mRNA及蛋白表达水平明显降低;α7 nAChR基因表达抑制能明显升高AChE及ChAT mRNA和蛋白表达水平,尤其是AChE的表达水平。结论α7 nAChR基因表达抑制可能通过增加细胞AChE水平而增加神经递质乙酰胆碱的分解,而ChAT的表达升高可能为一种代偿机制,这可能与阿尔茨海默氏病(AD)的发病有一定的关系。

SH-SY5Y细胞α7尼古丁受体基因抑制对APP代谢的影响

目的采用RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7神经型尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达,了解对β淀粉样前体蛋白(APP)代谢中的γ-分泌酶两个重要组分早老蛋白(PS)及单过性跨膜蛋白(NCT)水平的影响。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7nAChR的小干扰RNA(siRNA),用实时PCR法和Western印迹法分别测定细胞中α7 nAChR、PS及NCT在mRNA和蛋白表达水平的变化。结果转染α7 nAChR siRNA后,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平明显降低;PS蛋白mRNA及蛋白水平均升高,而NCT水平无明显变化。结论α7 nAChR基因表达抑制后γ-分泌酶组分之一PS的水平明显升高,这种改变可能与α7 nAChR基因表达抑制后β-淀粉样蛋白(Aβ)的产生增多有关,可能与阿尔茨海默氏病(AD)的发病有一定的关系。

阿尔茨海默病患者血液白细胞尼古丁受体α4和β2 mRNA表达水平变化

目的研究阿尔茨海默病(AD)患者血液白细胞神经型尼古丁受体(Nicotinicacetylcholinereceptors,nAChR)α4和β2亚单位mRNA相对表达水平是否存在改变。方法采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测比较29例AD患者和33例健康对照老年人血液白细胞中nAChR亚单位α4和β2mRNA的相对表达水平。结果AD组nAChR亚单位α4和β2mRNA相对表达水平(与Cyclophilin的百分比分别为1.04±0.16、1.03±0.15)均较正常组(与Cyclophilin的百分比分别为1.41±0.21、2.19±0.16)显著降低(P<0.05);而在年龄和性别的组内比较,均无显著差异(P>0.05)。结论nAChR亚单位α4和β2mRNA在AD患者血液中的相对表达水平较正常对照明显降低。血液白细胞nAChR亚单位的变化也可以考虑作为AD的生物学标志之一。

α7尼古丁受体mRNA表达抑制对SH-SY5Y细胞氧化应激水平的影响

目的探讨通过RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达后细胞氧化应激水平的变化,以了解该受体的神经保护作用。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7 nAChR的小分子干扰RNA,Real-time PCR法检测转染细胞中α7 nAChR mRNA水平蛋白质印迹方法检测蛋白表达水平;并用Aβ1～42处理培养细胞,比色法测定细胞脂质过氧化产物水平、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果转染siRNA后,α7 nAChR mRNA水平和蛋白表达水平分别降低了81.7%和76.9%;细胞脂质过氧化水平升高38.4%;SOD和GSH-PX活性分别降低30.3%和21.1%。用Aβ1～42处理细胞后氧化应激水平升高,且转染siRNA后能增强Aβ的神经毒性作用。结论α7 nAChR基因表达抑制后能增强细胞氧化应激水平,同时增强Aβ的神经毒性作用。

α7尼古丁受体基因抑制对SH-SY5Y细胞α-分泌酶水平的影响

目的采用RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7神经型尼古丁乙酰胆碱受体(Neuronal nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)基因表达,了解对APP代谢中的关键酶α-分泌酶水平的影响。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7 nAChR的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),用Real-time PCR法和Western blotting法分别测定细胞中α7 nAChR、α-分泌酶(ADAM10)在mRNA和蛋白表达水平的变化。结果转染α7 nAChR siRNA后,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平明显降低;ADAM10mRNA及蛋白表达水平分别减少了73%和66%。结论α7 nAChR基因表达抑制后α-分泌酶水平明显降低,这种改变可能与α7 nAChR基因表达抑制后β-淀粉样蛋白(Aβ)的产生增多有关,可能与阿尔茨海默病(AD)的发病有一定的关系。