干燥方式对绿碎茶多酚提取物体外抗氧化和抗糖尿病及乙酰胆碱酯酶抑制活性的影响

研究不同干燥方式处理的绿碎茶多酚提取物体外抗氧化和抗糖尿病活性及对乙酰胆碱酯酶抑制作用。以绿碎茶为试验材料,采用蒸干结合真空干燥与真空冷冻干燥2种干燥工艺对绿碎茶乙酸乙酯萃取相进行干燥处理,比较研究了2种提取物的色泽,DPPH自由基、ABTS阳离子自由基、羟自由基(·OH)清除能力和铁离子还原能力以及α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、乙酰胆碱酯酶的抑制能力和抗糖基化能力。结果表明,真空冷冻干燥绿碎茶多酚提取物(BGTE-FD)较蒸干结合真空干燥绿碎茶多酚提取物(BGTE-SVD)颜色相对偏黄,具有较强的DPPH自由基、ABTS阳离子自由基、·OH清除能力和铁离子还原能力,其IC_(50)值分别为2.64、5.17、247.01、27.73 mg/L。同时,BGTE-FD具有较高的α-淀粉酶、乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶抑制作用,IC_(50)值分别为85.84、416.45、4.38 mg/L,且其对α-葡萄糖苷酶的抑制能力显著强于阿卡波糖(IC_(50)值为929.59 mg/L)。此外,BGTE-FD和BGTE-SVD对晚期糖基化终产物抑制率分别高达65.28%和63.66%,略低于氨基胍(71.81%)。因此,真空冷冻干燥绿碎茶多酚提取物具有较强的体外抗氧化和抗糖尿病活性及一定的乙酰胆碱酯酶抑制能力,绿碎茶可作为降血糖和抗痴呆产品的潜在资源。

马醉木二萜成分及其乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

为研究马醉木叶中的二萜成分及其乙酰胆碱酯酶抑制活性,该研究根据薄层色谱显色特征,使用硅胶、MCI和半制备高效液相等色谱技术对其进行分离与纯化,并通过波谱数据(NMR和MS)分析且结合文献报道数据进行对比,鉴定了所得化合物的结构,同时采用Ellman法首次对其乙酰胆碱酯酶抑制活性进行评价。结果表明:从马醉木叶中分离并鉴定了8个二萜化合物,分别是pierisformoside F(1)、3-epi-grayanotoxinⅩⅧ(2)、3-epi-grayanotoxin B(3)、asebotoxin-X(4)、pierisformosin B(5)、asebotoxinⅢ(6)、rhodojaponinⅢ(7)和pierisformosin C(8)。其中,化合物1为首次从该植物中分离得到,化合物8表现出乙酰胆碱酯酶抑制活性。综上表明,马醉木中含有丰富的二萜成分和活性成分。该研究结果丰富了马醉木的化学成分多样性,为其后续综合开发和利用提供了一定的理论依据,也为寻求更多的活性成分提供了借鉴。

沙棘叶提取物的体外抗氧化及乙酰胆碱酯酶抑制能力

以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)清除能力、总还原力为指标,评估了沙棘叶提取物的体外抗氧化活性,考察其对乙酰胆碱酯酶的抑制能力。结果表明:5种不同乙醇体积分数的(40%、50%、60%、70%、80%)沙棘叶提取物均有较好的抗氧化活性及乙酰胆碱酯酶抑制能力。以体积分数为60%乙醇水溶液提取的沙棘叶提取物的DPPH·清除率、总还原力及乙酰胆碱酯酶抑制能力最强,分别为85.80%±1.39%,2.45±0.18,97.14%±0.81%,可作为抗氧化剂与乙酰胆碱酯酶抑制剂。该沙棘叶提取物对乙酰胆碱酯酶有较强的抑制能力,半数抑制浓度(IC50)为(1.086±0.144) g/L,对乙酰胆碱酯酶的抑制类型是竞争性大于非竞争性的混合可逆抑制。Auto Dock分子对接及剂效相关性分析表明,沙棘叶活性成分与乙酰胆碱酯酶具有一定的对接亲和力,沙棘叶提取物的抗氧化、酶抑制活性与功能成分之间均存在良好的正相关性(P<0.05),沙棘叶提取物中起主要抗氧化与酶抑制作用的成分为多酚类化合物。

望春花花蕾化学成分及其乙酰胆碱酯酶体外抑制活性研究

目的研究望春花MagnoliabiondiiPamp.花蕾化学成分及其乙酰胆碱酯酶体外抑制活性。方法望春花花蕾50%丙酮提取物采用DiaionHP-20、ToyopearlHW-40C、ODS、半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。按课题组前期方法测定化合物的乙酰胆碱酯酶体外抑制活性。结果从中分离得到17个化合物,分别鉴定为crassifolioside(1)、magnolosideB(2)、芦丁(3)、异槲皮苷(4)、槲皮素(5)、northalifoline(6)、cordysininB(7)、脱氧胸腺嘧啶核苷(8)、吲唑(9)、dihydrodehydrodiconiferylalcohol(10)、秦皮乙素(11)、C-藜芦酰乙二醇(12)、3,4-二羟基苯乙醇(13)、3-甲氧基-4-羟基苯乙醇(14)、原儿茶酸(15)、2,4,6-三甲氧基苯酚(16)、丁香酸(17)。结论化合物1~17均为首次从该植物中分离得到,在20μmol/L浓度下均未显示出乙酰胆碱酯酶抑制活性。

元宝草中一个新的间苯三酚及其乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

目的研究元宝草化学成分及其乙酰胆碱酯酶抑制活性。方法元宝草二氯甲烷部位采用硅胶柱色谱、Sephedex LH-20、MCI和半制备HPLC等进行化分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用Ellman法测定其乙酰胆碱酯酶抑制活性。结果从中分离得到8个化合物,分别鉴定为元宝草素A(1)、hyperbeanin A(2)、hyperpatulol I(3)、hyperhenone I(4)、hypercohone G(5)、hyperbeanol G(6)、hyperlagarin A(7)、hyperascyrone D(8)。化合物抑制乙酰胆碱酯酶IC 50值均在1.16~5.15μmol/L之间。结论化合物1为间苯三酚类新化合物。所有化合物均具有一定程度的乙酰胆碱酯酶抑制活性,是阿尔茨海默病治疗药物的潜在活性先导化合物。

美洲大蠊提取物PAS840的乙酰胆碱酯酶活性抑制作用及抗氧化能力观察

目的探讨美洲大蠊提取物PAS840的乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性和抗氧化活性。方法根据预实验确定最佳酶促反应条件得到的数据,AChE浓度为0.425U/mL、底物碘化硫代乙酰胆碱(ATCI)浓度为15mmol/L、反应时间为20min,采用改良的Ellman法进行酶促反应,检测不同浓度(7.8125、15.625、31.25、62.5、125、250μg/mL)PAS840对AChE催化ATCI分解的抑制率,计算其半数抑制浓度(IC_(50)),采用米氏方程相关的酶动力学实验测定PAS840对AChE的抑制类型。取不同浓度的PAS840溶液或维生素C(VC),采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法检测其对DPPH自由基的清除率,采用总还原能力测定法检测其对铁氰化钾的还原率,采用水杨酸法检测其对羟自由基的清除率,并计算相关的IC_(50)。结果PAS840对AChE催化反应进程具有抑制作用,且随着PAS840作用浓度增加和时间延长,其抑制作用更为明显;随着PAS840作用浓度增加,AChE抑制率先逐渐升高再趋于平缓。PAS840抑制AChE催化ATCI分解的IC_(50)为22.30μg/mL,其抑制类型是混合性抑制。随着浓度的增加,PAS840、Vc对DPPH自由基的清除率均呈先升高后平稳的趋势;500μg/mLPAS840对DPPH自由基的清除率为93.95%,同等浓度Vc的清除率为97.31%;PAS840清除DPPH自由基的IC_(50)为43.21μg/mL。随着浓度的增加,PAS840对铁氰化钾的还原率呈先升高后平稳的趋势,Vc对铁氰化钾的还原率呈比较高的平稳趋势;3.0mg/mLPAS840对铁氰化钾的还原率为93.95%,同等浓度Vc的还原率为82.2%;PAS840还原铁氰化钾的IC_(50)为0.498mg/mL。随着浓度的增加,PAS840对羟自由基的清除率呈比较中等的平稳趋势,Vc对羟自由基的清除率呈逐渐升高趋势;1.8mg/mLPAS840对羟自由基的清除率为45.72%,其后逐渐趋于平缓,同等浓度Vc的清除率为74.06%;3.0mg/mLPAS840对羟自由基的清除率为47.83%,同等浓度Vc的清除率为89.73%;PAS840清除羟自由基的IC_(50)为3.65mg/mL。结论PAS840具有较强的AChE活性抑制作用和抗氧化能力。

基于同源建模和分子对接技术研究不同物种乙酰胆碱酯酶和有机磷农药的相互作用

研究25种有机磷农药与30个不同物种乙酰胆碱酯酶(Acethlcholinesterase, AChE)的相互作用,分析分子结合过程中的关键氨基酸残基所产生的正向作用,并阐明内在结合机制。旨在为对有机磷农药敏感的AChE定点突变寻找潜力位点和为有机磷农药中毒的治疗在分子结构层面提供理论依据。30个物种AChE蛋白质序列来自于NCBI和Uniport;25种有机磷农药二维结构分子来自于ZINC15在线检索器,三维结构模型使用Chem 3D软件生成;模板蛋白晶体结构来自于ProteinDataBank数据库;同源建模采用SWISS-MODEL服务器进行3D结构建模;采用UCLA-DOELAB-SAVESv6.0在线服务器进行模型质量评估;分子对接采用Discovery Studio 2019软件中Flexible Docking模块进行。同源建模结果经过SAVESv6.0服务器的ERRAT、Verift-3D和PROCHECK程序评估质量可靠可进行下一步分子对接研究。分子对接结果显示绝大部分物种的AChE对25种有机磷农药都有亲和力,仅个别有机磷农药对某些物种未体现出对接构象,而不同物种与不同有机磷农药分子以氢键、疏水作用等相互作用提供结合力,分子作用模式符合外周阴离子位点、酰胺骨架、酰基口袋、氧离子洞和芳香引导机制等乙酰胆碱酯酶功能位点假说。与大部分有机磷农药展现出普遍亲和力的物种如家蝇、桔小实蝇、三化螟和斜纹夜蛾等可作为有机磷农药快检的新酶源开展研究。

黄连内生真菌抑乙酰胆碱酯酶活性菌株的筛选及鉴定

目的从黄连(Coptis chinensis)植株内分离筛选具有较高乙酰胆碱酯酶抑制活性的内生真菌,并对筛选出的强抑制活性菌株进行菌种分类及鉴定,为阿尔茨海默病新药的研发提供潜在的菌种资源。方法采用改良Ellman法对黄连植株内分离获得的内生真菌菌株进行乙酰胆碱酯酶抑制活性测定,对筛选的活性较强菌株,根据菌株的形态学特征结合分子生物学方法进行菌种鉴定。结果在黄连根、茎和叶部共分离获得24株内生真菌,有9株对乙酰胆碱酯酶有抑制活性。活性菌株中SCLH12抑制活性较强,经初步鉴定该菌株为枝孢菌属的Cladosporium tenuissimum。结论从黄连根部筛选分离出乙酰胆碱酯酶抑制活性菌株,其中菌株SCLH12(Cladosporium tenuissimum)具有较强乙酰胆碱酯酶抑制活性,可为开发新的乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)奠定基础。

基于哺乳动物细胞系的重组乙酰胆碱酯酶表达载体构建研究

目的 构建具有不同信号肽、载体骨架元件以及乙酰胆碱酯酶编码基因序列的真核表达载体,为基于哺乳动物细胞系表达重组乙酰胆碱酯酶提供前期研究基础。方法 通过NCBI数据库查询苍蝇头部、电鳗鱼电器官来源的乙酰胆碱酯酶基因序列(mdAChE和eleelAChE),经密码子优化后,选择Humaninsulin、小鼠重链、Human CD33 3种信号肽序列,将其与合成的上述目的基因连接后分别与pCMV3、pcDNA3.1(+)、pcDNA3.4 3种载体骨架元件进行组合,构建重组乙酰胆碱酯酶的表达载体,随后分别在CHO-S、Expi293F细胞系进行瞬时转染表达,产物采用镍柱亲和纯化后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)与蛋白免疫印迹(Western blot)分析鉴定。结果 经菌液聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)及DNA测序鉴定,成功构建了4种重组mdAChE酶的表达载体以及3种重组eleelAChE酶的表达载体。SDS-PAGE、Western blot的结果表明,基于pcDNA3.1(+)和pcDNA3.4载体骨架元件的重组表达载体可实现重组mdAChE和eleelAChE酶的可溶性表达;以p CMV3为载体骨架元件的表达载体,仅在以Human CD33为信号肽时,能在CHO-S细胞系中实现重组mdAChE酶的可溶性表达,其余情况下均未见有效表达。结论 实现了昆虫、鱼类来源的重组乙酰胆碱酯酶在哺乳动物细胞系的可溶性表达,发现载体骨架元件、信号肽类型对其重组表达具有重要影响, CHO-S以及Expi293F细胞均适合重组乙酰胆碱酯酶的表达,后续还需对影响其酶活、农药敏感性的关键限制性因素开展深入研究。

乙酰胆碱酯酶染色和钙视网膜蛋白免疫组化染色在先天性巨结肠患儿术前诊断中的应用价值

【目的】探讨乙酰胆碱酯酶染色(AChE)和钙视网膜蛋白(Calretinin)免疫组化染色在先天性巨结肠(HD)患儿术前病理诊断中的价值。【方法】回顾性分析2021年4月至12月本院收治的89例慢性便秘、腹胀,或其他怀疑先天性巨结肠但症状不明显患儿的一般临床资料,其中HD患儿39例(HD组)和非HD患儿50例(非HD组)。分析Calretinin免疫组化染色、AChE染色在HD和非HD患儿中的特点,并分析两者诊断HD的准确性和敏感性。【结果】在HD组中AChE染色阳性为38例,阴性1例,而在非HD组中,AChE染色阳性为1例,阴性49例。HD组患儿Calretinin免疫组化染色均为阴性,而在非HD组患儿中,Calretinin免疫组化染色阳性为49例,阴性1例。AChE染色在HD的诊断中的特异度、灵敏度分别为97.4%、98.0%,Calretinin免疫组化染色在HD诊断中的灵敏度为100%,特异度为98%。【结论】结肠黏膜活检标本AChE染色联合Calretinin免疫组化染色是HD术前诊断的一种可靠的方法,值得临床推广应用。

氢溴酸加兰他敏片对阿尔茨海默病患者血清乙酰胆碱酯酶水平的影响及临床疗效探究

目的探寻氢溴酸加兰他敏片对阿尔茨海默病(AD)患者血清乙酰胆碱酯酶(AchE)水平的影响和临床疗效。方法选取2022年3-12月于北京市隆福医院确诊为阿尔茨海默病的患者共100例。利用简单随机分配法,将接受此次研究的100例AD患者分为治疗组(50例)和安慰剂组(50例)。所有患者均接受常规治疗和认知康复训练治疗,治疗组患者服用氢溴酸加兰他敏片(初始剂量为5 mg/次,4次/d,3 d后增加药量至10 mg/次,4次/d),安慰剂组患者给予同等剂量的安慰剂(糖果)进行安慰治疗。比较两组患者治疗前后的认知功能、日常生活能力水平、焦虑抑郁症状的严重程度、血清乙酰胆碱酯酶水平、临床疗效以及用药后的不良反应。结果治疗组总有效率(94%)高于安慰剂组(80%),差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗前,安慰剂组和治疗组患者的MoCA评分、MMSE评分、ADL评分分别为(20.18±2.50 vs.20.63±2.37)、(18.20±2.45 vs.18.03±2.11)、(48.37±3.43 vs.48.23±3.15),治疗后,安慰剂组和治疗组的MoCA评分、MMSE评分、ADL评分分别为(23.98±2.16 vs.27.11±2.21)、(22.07±2.10 vs.25.03±2.58)、(56.99±3.31 vs.67.99±3.11),治疗后两组各项评分均较治疗前提高(P<0.05),且治疗组高于安慰剂组(P<0.05);治疗前,安慰剂组和治疗组的HAMA评分、HAMD评分分别为(17.48±3.74 vs.17.60±3.57)、(18.15±2.94 vs.18.46±2.83),治疗后,安慰剂组患者和治疗组患者的HAMA评分、HAMD评分分别为(14.54±3.23 vs.6.74±3.40)、(14.54±3.85 vs.7.44±3.43),两组患者治疗后焦虑及抑郁的严重程度较治疗前降低(P<0.05),且治疗组的评分低于安慰剂组(P<0.05);治疗前,安慰剂组和治疗组患者的血清乙酰胆碱酯酶水平分别为(23.26±3.50)mmol/L、(23.39±3.10)mmol/L,治疗后分别为(19.85±2.29)mmol/L、(17.85±2.30)mmol/L,两组患者治疗后血清AchE水平较治疗前降低(P<0.05),且治疗后治疗组患者的血清AchE水平明显低于安慰剂组患者(P<0.05)。安慰剂组有3例(6%)患者出现了不良反应,1例(2%)失眠,1例(2%)心悸,1例(2%)ST段压低;治疗组有12例(24%)患者出现了不良反应,1例(2%)失眠,1例(2%)头晕,2例(4%)恶心、呕吐,1例(2%)视力模糊,1例(2%)嗜睡,1例(2%)腹泻,3例(6%)心悸,1例(2%)EEG中-轻度异常。治疗组AD患者不良反应发生率高于安慰剂组患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论氢溴酸加兰他敏片可以有效降低阿尔茨海默病患者的血清AchE水平,并且有效地提高了患者的记忆力、认知功能以及日常生活能力,明显缓解了患者的焦虑、抑郁等症状,显著延缓了患者病情发展速度,并且明显提高了患者的生存质量。

欧芹酚甲醚肟酯类化合物的制备及其抗乙酰胆碱酯酶活性研究

为研发具有AChE双位点抑制的新型乙酰胆碱酯酶抑制剂,本论文以香豆素类化合物欧芹酚甲醚为先导化合物,通过氧化、还原、酯化等反应设计合成了14个欧芹酚甲醚肟酯衍生物,并经核磁共振波谱(NMR)和质谱(MS)进行结构确证。采用Ellman法测定了目标化合物在1μmol·mL^(-1)下对乙酰胆碱酯酶的抑制活性,结果显示目标化合物4i和4n对乙酰胆碱酯酶的抑制率分别达到61.6%和51.2%,且与化合物浓度呈正相关。分子对接分析表明化合物4i可以和AChE的催化位点和外周阴离子位点结合。

家蝇抗药性相关乙酰胆碱酯酶基因突变的进化起源分析

家蝇是多种人与动物疾病的传播媒介,化学防治是家蝇防治的重要手段之一,但杀虫剂抗性是家蝇化学防治的一大障碍。以往的研究表明,乙酰胆碱酯酶(由Ace基因编码)的某些点突变与家蝇对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂抗性相关。在我国野外家蝇群中发现了可以导致抗药性的乙酰胆碱酯酶V260L、G342A、G342V和F407Y氨基酸置换,但对其进化起源模式尚缺乏认识。本研究采用基因片段测序的方法,获得了来自北京、山东、上海、广东4个省份的728头家蝇的Ace基因片段序列,从中鉴定出9种不同的Ace单倍型。分子系统树和网络图分析发现了V260L、G342A和F407Y突变的多起源性,4种三位点突变(L-A-Y)的单倍型源自两条不同的进化途径。

苯线磷和甲胺磷对TF-1细胞乙酰胆碱酯酶影响的差异

有机磷农药(organophosphorus pesticides,OPs)具有较强的神经毒性,主要是通过抑制胆碱能神经传导中的关键酶,乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE,EC 3.1.1.7)的活性来实现的。苯线磷和甲胺磷是广泛用于农业生产的OPs,但对它们抑制人AChE活性的机制研究十分有限。本研究应用2种不同的给药方式,包括对培养的细胞和细胞裂解液进行药物处理,明确苯线磷和甲胺磷对人血液白血病细胞系TF-1中AChE酶活性的直接作用和对AChE基因转录表达的影响,从而揭示苯线磷和甲胺磷抑制AChE酶活性的机制与两者的差别。结果表明,高浓度苯线磷(10^(-3) mol·L^(-1))处理后,TF-1细胞活力降低,同时诱导细胞凋亡和坏死;而所有被试浓度的甲胺磷对细胞活力均没有明显影响。此外,对于TF-1细胞裂解液中的AChE,苯线磷和甲胺磷短期处理(1 h和5 h)均可产生直接抑制作用,其中苯线磷的抑制作用略强于甲胺磷(孵育1 h,IC_(50)值分别为1.181×10^(-6) mol·L^(-1)和2.837×10^(-6) mol·L^(-1))。对培养细胞的药物处理实验结果显示,苯线磷和甲胺磷(10^(-6) mol·L^(-1)和10-5 mol·L^(-1))处理24 h后,均显著降低了TF-1细胞的AChE酶活性,苯线磷的抑制率略高于甲胺磷。而与对酶活性的抑制作用相反,苯线磷和甲胺磷对TF-1中AChE H转录本表达有轻微的上调作用,以甲胺磷更为明显,提示存在反馈调节机制。总结上述结果,我们发现苯线磷对TF-1细胞中AChE的抑制作用总体略强于甲胺磷,而甲胺磷对AChE基因表达的反馈上调作用更明显。从而首次从对AChE酶的直接抑制作用和生物合成影响的不同角度阐述了2个OPs对AChE影响的差异,为进一步的分子机制研究提供了实验数据。

绶草中活性成分Spiranthol-A的快速制备及抑制乙酰胆碱酯酶活性研究

为建立“大孔吸附树脂柱色谱-凝胶柱色谱-HPLC”三步法快速制备绶草中活性成分Spiranthol-A方法,并评价其抑制乙酰胆碱酯酶活性,在HPLC导向下,将绶草95%乙醇提取物先经大孔吸附树脂柱色谱分离得到含Spiranthol-A部位,再通过Sephadex-LH 20柱色谱和HPLC纯化,得单体化合物Spiranthol-A;采用微孔板法评价Spiranthol-A体外抑制乙酰胆碱酯酶活性。结果表明:Spiranthol-A纯度较高且抑制乙酰胆碱酯酶活性较强,IC_(50)值仅为(10.58±0.44)μg·mL^(-1)。综上,该研究所建立的快速制备Spiranthol-A方法具有一定的应用前景,且Spiranthol-A具有显著抑制乙酰胆碱酯酶作用,值得深入研究。

含农药污水对乙酰胆碱酯酶结构影响的分子模拟

乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)是一种重要的生态环境监测大分子标记物。环境中污染物对蛋白结构的影响是AChE环境监测效果的关键因素。本文以对硫磷作为农药的代表,通过分子模拟方法在分子水平下对AChE在纯水和含农药污水体系中的结构进行了研究。结果表明,在分子模拟过程中,AChE蛋白在纯水和污水体系中结构变化均不明显。AChE蛋白在污水体系中表面积的增加归因于对硫磷分子导致的蛋白疏水性表面积的增加。AChE蛋白二级结构所含残基数量在纯水和污水中均没有明显变化,但污水会导致蛋白中氢键数目增加,以及水分子与蛋白间氢键数目的减少。AChE蛋白与对硫磷分子间的范德华力与库仑作用力均为吸引力,范德华力为主要作用力。在含对硫磷农药污水中,蛋白结构中PHE284残基的波动大,是影响AChE结构的关键残基。

乙酰胆碱酯酶检测方法研究进展

乙酰胆碱酯酶在生命活动中具有重要的作用,其检测方法一直为研究者所关注,其中比色法和荧光检测法是目前发展较快的检测方法。如何发展出高效率低成本的快速检测方法,仍然是乙酰胆碱酯酶测定方法优化的主要方向。本文简要综述了近年来比色法与荧光分析法在乙酰胆碱酯酶检测中的应用。

沸石咪唑酯骨架材料/石墨相氮化碳量子点/乙酰胆碱酯酶复合物定量检测小鼠脑组织中的乙酰胆碱

以二水合乙酸锌、2-甲基咪唑、石墨相氮化碳量子点(g-CNQDs,7mg)和乙酰胆碱酯酶(AchE)为起始原料,采用一锅法制备了沸石咪唑酯骨架材料(ZIFs)包载g-CNQDs和AchE的酸度敏感型复合物ZIFs@g-CNQDs@AchE,并和患阿尔茨海默病(AD)小鼠的脑组织样品在pH 7.4磷酸盐缓冲溶液中室温反应2.5h,在380nm激发波长下测量体系在475nm处的荧光强度,用于测定乙酰胆碱(Ach)的含量。结果显示,合成的复合物呈十二面体结构,平均粒径约300nm,加入Ach后,Ach渗透进入复合物,被AchE催化生成乙酸,体系酸度增加,复合物结构瓦解,g-CNQDs释放,475nm处出现明显的荧光发射峰。Ach的浓度在5.5~82.5mmol·L^(-1)内和对应的体系荧光强度呈线性关系,检出限(3S/N)为1.83mmol·L^(-1);常见的干扰物质(葡萄糖、多巴胺)以及干扰离子(Fe^(2+)、Fe3+、Cu^(2+)、Mg^(2+)、Zn^(2+))对Ach的检测无干扰,复合物的特异性较高;按照标准加入法对阳性实际样品进行回收试验,成功检出了Ach,回收率为93.2%~112%,测定值的相对标准偏差(n=5)为0.82%~3.4%。构建的酸度敏感型复合物可作为一种潜在的载体,用于AD诊疗。

针对有机磷中毒的新型非肟类乙酰胆碱酯酶重活化剂的筛选

目的筛选针对有机磷毒剂中毒乙酰胆碱酯酶(AChE)更高效的非肟类重活化剂。方法以前期研究发现的高活性非肟类重活化剂L10R1为先导,通过基于片段药物设计策略构建系列含有曼尼希碱结构的非肟类重活化剂,通过核磁、质谱验证结构;用5,5’二硫双(2硝基苯甲酸)法测试该系列化合物对维埃克斯、沙林、塔崩、梭曼、对氧磷、对硫磷和敌敌畏等抑制AChE的重活率,并优选高活性化合物动态测试其重活化速率;基于活性测试结果进行构效关系分析。结果成功构建了全新结构的非肟类化合物21个并完成了结构确证,筛选出了对维埃克斯、沙林、对氧磷和对硫磷中毒AChE重活化能力较好的非肟类化合物L49R1和L51R1,L49R1对有机磷农药对氧磷和对硫磷中毒酶重活化效能优于先导L10R1。结论在曼尼希碱结构中引入磺胺类活性片段未能得到高效重活化剂,但引入三氮唑并嘧啶酮(L51R1)或硝基噻唑(L49R1)片段可得到广谱且相对高效的重活化剂,并以硝基噻唑结构最佳,本研究为开发更高效的全新非肟类重活化剂奠定了良好基础。

昆虫乙酰胆碱酯酶基因研究进展

对昆虫乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE,EC3·1·1·7)的基因结构和表达等方面的研究进展进行了综述。分析了昆虫乙酰胆碱酯酶基因的结构,包括10个外显子的特征。对已经报道的昆虫AChE基因进行了系统归纳,并基于已知全序列的昆虫AChE基因,进行了昆虫AChE基因的分子进化分析。对昆虫AChE基因的结构特点及其功能,以及昆虫AChE基因的活性位点、AChE的变构与昆虫抗药性的关系进行了探讨。最后对昆虫AChE基因研究中存在的问题和前景进行了分析和展望。