不同死后时间骨骼肌运动终板乙酰胆碱酯酶(AChE)降解变化的研究——酶组织化学定量分析(英文)

为进一步了解骨骼肌的死后变化特点和规律及其与死后时间 (PMI)的关系 ,本文选用成年实验大鼠 ,系列观察了死后 0 - 96小时 (0 - 96 hpm)骨骼肌运动终板和肌纤维在不同温度条件下 ACh E(乙酰胆碱酯酶 ) ,SDH(琥珀酸脱氢酶 ) ,L DH(乳酸脱氢酶 ) ,Ca2 + - ATPase(钙激活三磷腺苷酶 )的酶组织化学变化 ,并使用图象处理系统对上述酶反应结果进行了定量分析和比较。结果发现 ,上述改变与 PMI有明显的相关关系 ,其中运动终板 Ach E因位于突触间隙的特殊位置以及自身的耐活性质 ,故反应明确 ,稳定性高 ,降解缓慢显示更清晰和持久的降解曲线 ,可作为藉肌肉组织降解变化用于推断死亡时间的标志酶。

利用乙酰胆碱酯酶传感器监测海水久效磷

用戊二醛(GA)将乙酰胆碱酯酶(AChE)交联在透析膜上,并与pH电极结合,由此开发出一种基于固定化酶的电位型传感器。该酶电极可以快速、灵敏地测定海水中的久效磷。仪器对海水中10-10～10-7的久效磷农药具有极好的线性响应,检测下限为0.1μg／L,加标回收率在90%～103%之间,分析1个海水样品只需50min。

不同中华稻蝗种群对马拉硫磷的敏感性及乙酰胆碱酯酶特性的比较

采用生物测定方法,对采自山西省晋源区和陕西省长安县的中华稻蝗种群对马拉硫磷的敏感性及其乙酰胆碱酯酶(AChE)进行了研究。结果表明,长安种群比晋源种群对马拉硫磷的敏感性低4.79倍。动力学研究表明,晋源种群的动力学参数米氏常数(Km值)和最大反应速度(Vmax值)均比长安种群的高。体外抑制结果表明,两个种群中华稻蝗对所选用的3种有机磷杀虫剂的敏感性从高到低依次为:氧化毒死蜱>对氧磷>甲基内吸磷,且长安种群的双分子速率常数(ki值)比晋源种群的低。体外抑制结果与生物测定的结果相一致,但动力学研究结果与生物测定存在差异。由此可见,两种群对马拉硫磷的敏感性差异的原因之一可能是乙酰胆碱酯酶的不敏感性,而与酶活性的升高没有明显相关性。

中华稻蝗两地理种群乙酰胆碱酯酶生化特性研究

采用生物测定方法,对采自山西省临猗县和江苏省徐州市郊中华稻蝗五龄若虫的乙酰胆碱酯酶(AChE)特性进行了比较研究,同时测定了2种群五龄若虫对马拉硫磷的敏感性。用对氧磷、氧化毒死蜱和甲基内吸磷3种有机磷抑制剂对2种群中华稻蝗五龄若虫AChE的体外抑制进行的研究表明,该2种群AChE对对氧磷、氧化毒死蜱、甲基内吸磷的敏感性没有显著差异,临猗种群比徐州种群分别高1.24、1.13和0.82倍;乙酰胆碱酯酶动力学研究结果表明,临猗种群的动力学参数米氏常数(Km值)和最大反应速度(Vmax值)均较徐州种群为高;用乙酰硫代胆碱(ATC)做底物测定AChE活性,2种群AChE活性无显著差异,临猗种群是徐州种群的1.24倍。而2种群生物测定结果表明,临猗种群和徐州种群五龄若虫对马拉硫磷的敏感度有差异,徐州种群五龄若虫的LD50值(13.00μg·g-1虫质量)是临猗种群(4.64μg·g-1虫质量)的2.8倍。据此推测,中华稻蝗徐州种群马拉硫磷敏感性下降与AChE无相关性,可能存在其他影响因素。

地塞米松对甲醛吸入肺水肿大鼠心、肺、脑及血清乙酰胆碱脂酶活性的影响

目的喷雾吸入甲醛复制大鼠急性肺水肿并研究地塞米松对其心、肺、脑及血清乙酰胆碱脂酶(AchE)的干预作用。方法 27只SD大鼠随机分对照组、甲醛组和甲醛加地塞米松组。甲醛加地塞米松组于造模前半小时腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液10mg.kg-1,其余两组注射等量生理盐水。造模8h后眼球采血处死,取心、肺称重并计算肺/心系数,肺组织作常规病理切片H.E染色。血清和心、肺、脑组织匀浆测定蛋白浓度和AchE活性;对照组以生理盐水替代甲醛,处理方法同上。结果与生理盐水对照组比较,甲醛组和甲醛加地塞米松组大鼠肺/心系数均显著升高(P【0.05,P【0.01);甲醛组和甲醛加地塞米松组肺匀浆AchE显著增高(P【0.05,P【0.01)而心匀浆AchE显著下降(均P【0.01);甲醛加地塞米松组心匀浆AchE较甲醛组显著回升(P【0.05)。病理切片镜下观可见甲醛组肺组织呈间质性肺水肿,甲醛加地塞米松组肺类似甲醛组但轻微且局限。结论喷雾吸入甲醛肺水肿大鼠肺组织AchE显著增高而心组织AchE显著下降,地塞米松能部分减轻但不能完全阻止肺水肿的发生。

微小膜壳绦虫神经系统的乙酰胆碱脂酶定位研究

何毅勋(1991),王勇(1991)应用乙酰胆碱酯酶(AchE)的组织化学定位方法显示华支睾吸虫,肺吸虫等一些寄生虫的神经组织,取得了满意的结果。鉴于绦虫的神经解剖学资料较少,我们采用AchE组织化学定位技术对微小膜壳绦虫的神经系统作了研究。 结果表明,虫体头节后部左右各有一个神经节。两神经节由一较粗大的向后成攀的后连合相连。从每个神经节向前、向后各发出3对神经干并由此发出神经纤维支配头节及链体。

基于乙酰胆碱酯酶抑制的有机磷农药生物传感器研究进展

有机磷农药(OPs)残留可通过食物链在生物体内富集,从而对自然生态和人类健康带来极大威胁。用于检测有机磷农药的传统分析方法(如高效液相色谱法和气相色谱法)具有响应时间较长、成本较高以及检测程序复杂等局限。近年来,生物传感因具有专一性强、速度快、准确度高等优势被广泛用于分析领域。而利用乙酰胆碱酯酶(AChE)作为识别元件和催化元件的生物传感器为检测实际样品中有机磷农药残留开创了新的前景。该综述概述了基于不同反应机理的乙酰胆碱酯酶抑制的各种最新传感方法和装置,特别是近年来结合新生代检测技术的传感装置,并总结了当前基于AChE抑制的方法在有机磷农药检测方面所面临的挑战和不足,展望了未来的研究方向。

有机磷化合物抑制乙酰胆碱脂酶的理论探讨

生物体中的乙酰胆碱脂酶(AChE)存在于神经元和肌细胞之间的突触上。它"耐心等待"并在信号通过之后迅速发挥作用。将乙酰胆碱降解为二部分,乙酸和胆碱。此过程有效地终止了信号,使得降解产物得以回收,为下次传导重建新的神经递质。乙酰胆碱酯酶是人体中反应最快的酶之一,降解一个分子约80微秒。有机磷(OP)是一类乙酰胆碱脂酶的有效抑制剂,本文主要阐述的是OP抑制机理理论研究的现状。

甘露醇对骨髓间充质干细胞治疗血管性痴呆大鼠行为学及海马胆碱能系统的影响

目的探讨甘露醇对骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植治疗血管性痴呆（VD）大鼠行为学及海马胆碱能系统活性的影响。方法体外全骨髓培养结合细胞贴壁法培养大鼠BMSCs。采用双侧颈总动脉结扎法制备VD模型。将大鼠随机分为4组：（1）甘露醇预处理BMSCs组：造模4w后,先进行尾静脉注射20%甘露醇,10~30m in后,再尾静脉注射BMSCs;（2）BMSCs组：造模4w后,经尾静脉注射等量BMSCs;（3）培养基组：造模4w后,经尾静脉注射等量BMSCs基础培养基;（4）假手术组：不进行任何干预。BMSCs移植4w后进行Morris水迷宫试验和大鼠海马内胆碱乙酰转移酶（ChAT）和乙酰胆碱酯酶（AChE）活性检测。结果甘露醇预处理BMSCs组的ChAT和AChE活性均比BMSCs组、培养基组有明显提高（P〈0.05）,同时其行为学亦较BMSCs组、培养基组有明显改善（P〈0.05）。结论甘露醇预处理后进行静脉注射移植BMSCs,使VD大鼠模型海马胆碱能系统的活性明显增强,并进一步改善VD大鼠的学习与记忆能力。

缺氧对大鼠纹状体边缘区AChE和NADPH-d含量的影响及其与学习记忆的关系

目的观察大鼠缺氧后纹状体边缘区(MrD)的病理改变及乙酰胆碱酯酶(AChE)和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)的含量改变,探讨缺氧对纹状体边缘区的损害及与学习记忆的关系。方法建立40只大鼠缺氧模型(予氧含量为8%、氮气含量为92%的混合气,5h/d,连续5d)并对其进行Y迷宫实验,缺氧5d后处死动物观察其脑组织切片HE染色和AChE和NADPH-d组织化学染色情况并与对照组比较。结果(1)大鼠缺氧前后Y迷宫实验成绩差异显著。(2)AChE组化结果显示,正常大鼠纹状体可见大量AChE阳性反应纤维和少量阳性细胞,MrD内AChE染色略淡;缺氧后纹状体其他部分AChE染色无明显变化,而MrD则明显加深。(3)NADPH-d组化反应显示,MrD内NADPH-d阳性细胞多呈梭形,纹状体内阳性细胞数较其他区域多;缺氧后阳性细胞形态变化不明显,但数目明显少于正常对照。结论缺氧可导致大鼠学习记忆功能下降以及MrD内AChE、NADPH-d染色的明显改变。这些改变较纹状体其他区域更为明显,表明MrD对于缺氧较敏感,缺氧后AchE和NADPH的减少可能与学习记忆功能的下降有关。

大白鼠海马神经元NOS与AChE活性的研究

目的:观察大白鼠海马不同亚区一氧化氮合酶(NOS)与乙酰胆碱酯酶(AChE)阳性神经元的活性。方法:分别采用还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)和乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学方法对大白鼠海马不同亚区NOS和AChE阳性神经元的分布以及活性进行研究。结果:海马不同亚区均含有NOS和AChE阳性神经元,其中CA2区NOS呈强阳性反应,CA3区AChE呈强阳性反应。结论:实验表明,NOS和AChE阳性神经元广泛分布于大白鼠海马不同亚区,为进一步探讨海马的学习记忆功能机制提供了形态学佐证。

孕期锰染毒对仔鼠脑、肝AchE的影响

为探讨孕期锰染毒对仔鼠脑、肝乙酰胆碱脂酶(ACHE)的影响,将妊娠大鼠随机分为3组,腹腔注射氯化锰溶液,待其自然分娩后,分别取1d,11d仔鼠脑、肝组织进行匀浆,检测匀浆AchE活性。结果表明,随着染锰剂量的增加,1d龄仔鼠肝AchE活性各组,下降趋势明显(P<0.05);但两染毒组之间差异无显著意义(P>0.05)。11d仔鼠脑、肝AchE活性对照组均显著高于染毒组。表明孕期锰染毒能抑制仔鼠肝、脑组织AchE活性,从而影响子代学习、记忆能力和神经肌肉接点处的兴奋传导。

电针穴位对肠缺血-再灌注大鼠回肠内AChE活性的影响

目的探讨电针穴位对肠缺血 -再灌注大鼠回肠内AChE活性的影响。方法采用夹闭大鼠肠系膜上动脉造成肠缺血 -再灌注损伤模型 ,以改良Ellman法测定AChE ,每日电针双侧“百会”、“风池”、“大钟”及“足三里穴”3 0min ,持续 7d和 1 4d ,波频率 2 -2 0Hz,强度 2 .0A。结果实验后第 7d ,大鼠回肠内的AChE活性在缺血 -再灌注组明显低于假手术组 ,电针组的活性则基本恢复 ;第 1 4d ,缺血 -再灌注及电针组的AChE活性恢复。结论肠缺血 -再灌注所致的肠损伤可能与肠内AChE活性有关 ,电针能提高大鼠回肠内的AChE活性 ,从而可能对抗肠缺血

热污染对金鲫鱼组织内四种酶活性的影响

在实验室模拟条件下,研究了热污染对金鲫鱼(Carasslusauratus)肝脏、肾脏与血清中的谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)和过氧化氢酶(CAT)活性及脑中乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响.结果表明,金鲫鱼肝脏和血清中的GOT、肝脏和肾脏中的CAT以及脑中的AChE活性均可以用作其组织细胞因热污染受胁迫及损伤的生物标志物,金鲫鱼可作为热污染环境下的指示生物.同时分析热污染时各种酶活性的变化表明,酶活性的改变是鱼体对环境增温产生的一种应激机制,用以减小危害;若超过其耐受范围,这一机制则被破坏,而使机体受损.

茶树品种对假眼小绿叶蝉抗药性相关酶活性及其分布的影响

测定了毛蟹、黄旦、铁观音、肉桂和福鼎大白茶5个茶树品种上假眼小绿叶蝉成虫3种抗药性相关酶系,即谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)、羧酸酯酶(CarE)和乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性及其分布.黄旦、福鼎大白茶上假眼小绿叶蝉成虫的GSTs和CarE活性较高、AChE敏感性较低,其他3个品种的GSTs和CarE活性较低、AChE敏感性较高;各种酶活性分布也存在一定程度的差异.说明茶树品种对假眼小绿叶蝉的个体分化及抗性的产生有影响.

松油烯-4-醇对粘虫幼虫的生物活性

测定了杀虫植物砂地柏SabinavulgarisAnt.的精油中主杀虫成分———松油烯 4 醇 (terpinen 4 ol)对粘虫MythimnaseparataWalker幼虫的生物活性。结果表明 ,松油烯 4 醇对粘虫主要表现为熏蒸作用 ,对粘虫 3龄幼虫 2 4h的熏蒸LC50 为 5 3473μL L ;还具一定触杀作用 ,对粘虫 4龄幼虫 2 4h的LD50 为 14 7 8μg 虫。试虫的中毒症状可明显地分为兴奋、痉挛、麻痹和死亡 4个阶段 ,而麻痹的部分试虫有复苏现象。可明显抑制Na+ ,K+ ATP酶的活性 ,在兴奋期、痉挛期、麻痹期和复苏期 ,抑制率介于2 1 2 8%～ 34 92 %之间。离体条件下对Na+ ,K+ ATP酶的I50 为 133 75 μg·mL- 1 ;对AChE活性有一定的影响 ;对酯酶 ,在兴奋期 ,酶活力为对照的 77 0 % ,在麻痹期则为对照的 1 33倍 ,而复苏期试虫的酯酶活力与对照相当。

葛根醇提物及总黄酮对动物学习记忆功能的影响

用小鼠跳台法和大鼠操作式条件反射观察了葛根醇提物及总黄酮对动物学习记忆功能的影响。结果二者均能对抗东莨菪碱所致的小鼠记忆获得障碍和40％乙醇所致的记忆再现障碍;葛根醇提物尚能对抗东莨菪碱所致的大鼠操作式条件反射的抑制。研究发现,东莨菪碱能降低小鼠大脑皮层和海马乙酰胆碱含量并降低海马胆碱乙酰转移酶活性,而葛根醇提物能显著对抗东莨菪碱的上述作用,提示这可能是葛根改善学习记忆的作用机制之一。

久效磷对单环刺螠体内几种酶活性影响的初步研究

运用冰冻切片技术和酶组织化学的方法研究了长期暴露于不同质量浓度久效磷(0,50,100,150ng/L)下的单环刺螠(Urechisunicinctus)体内的乙酰胆碱酯酶(AChE)、细胞色素C氧化酶(CCO)、碱性磷酸酶(AKP)的活性变化。实验表明,AChE在单环刺螠的体壁上呈现出较强的酶活性,活性位点处为红棕色的颗粒沉淀、并随久效磷胁迫浓度的提高显色越来越深;消化道切片上基本上没有AChE的活性。CCO在单环刺螠的体壁及肠道上都呈现出较强的酶活性,活性位点显示为棕色;肠道上,不同质量浓度组由低到高其CCO活性位点依次增多、显色也依次加深。低质量浓度久效磷(<150ng/L)胁迫对单环刺螠体内的AKP活性没有明显的影响。

白藜芦醇对阿尔茨海默病合并糖尿病大鼠的氧化应激作用

目的观察白藜芦醇对阿尔茨海默病合并糖尿病大鼠模型脑内氧化应激的作用。方法动物随机分为对照组、阿尔茨海默病合并糖尿病模型组、白藜芦醇对照组和白藜芦醇治疗组。模型组采用链脲佐菌素腹腔内注射诱导出糖尿病的大鼠模型,在脑立体定位仪的指导下把凝聚态的Aβ_(1-40)注射到糖尿病大鼠脑内的双侧海马内,白藜芦醇对照组和白藜芦醇治疗组从术后1周开始每天给予25mg/kg的白藜芦醇灌胃,持续4周。采用Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆水平,同时测定大鼠脑皮质和海马组织乙酰胆碱酯酶(AchE)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的活性以及与氧化应激有关的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽(GSH)活性的变化情况。结果与对照组相比,阿尔茨海默病合并糖尿病模型组大鼠的学习记忆能力明显下降(P<0.05),且脑皮质和海马组织内AchE活性明显升高(P<0.05),而ChAT的活性却明显降低(P<0.05);阿尔茨海默病合并糖尿病模型组脑皮质和海马组织内MDA的活性与对照组相比明显升高(P<0.05),而SOD及GSH活性却明显降低(P<0.05)。与阿尔茨海默病合并糖尿病模型组相比,白藜芦醇治疗组上述指标的变化程度均明显减轻(P<0.05)。结论白藜芦醇可明显提高阿尔茨海默病合并糖尿病大鼠的学习记忆能力,其作用机制通过调节脑组织内乙酰胆碱代谢以及氧化应激反应实现。

枳壳醇提脂溶性成分对脉络瘀滞合并缺血再灌注血管性痴呆模型大鼠的影响

目的:探讨枳壳醇提脂溶性成分对脉络瘀滞合并缺血再灌注血管性痴呆模型大鼠的保护作用。方法:对实验大鼠灌服脂肪乳使其血脂升高后再行双侧颈总动脉结扎造模,以Morris水迷宫试验进行行为学测试,观察大鼠的学习记忆能力,同时测定各组大鼠脑组织中Ach E和SOD活性以及MDA含量的变化。结果:枳壳醇提脂溶性浸膏各剂量组对脉络瘀滞型血管性痴呆大鼠的学习记忆能力均有不同程度的改善,并能显著提高大鼠脑内SOD活性,抑制Ach E的活力,显著降低MDA含量。结论:枳壳醇提脂溶性浸膏各剂量对脉络瘀滞型血管性痴呆模型大鼠的有较明显的保护作用,其作用机制可能与其改善脑内乙酰胆碱的含量,改善血液循环,从而减轻缺氧缺血对脑组织的损伤,提高学习记忆能力改善智力有关。