内皮细胞乙酰胆碱靶标不同于M受体的药理学特征

目的 研究内皮细胞乙酰胆碱靶标与M受体药理学特征的差异。方法 采用离体血管环实验方法,观察抗M_3受体的单克隆抗体和M受体激动剂毛果芸香碱对乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张血管作用的影响。结果 毛果芸香碱能够剂量依赖性拮抗乙酰胆碱诱导的内皮依赖性血管舒张作用,其拮抗性质为非竞争性拮抗;抗M_3受体的单克隆抗体不影响乙酰胆碱诱发的内皮依赖性舒张血管作用,但能拮抗乙酰胆碱诱发的离休肠肌收缩作用。结论 内皮细胞乙酰胆碱靶标的药理学特征不同于经典M受体。

阻断血管内皮细胞乙酰胆碱靶标功能对血管内皮细胞结构和功能的影响

目的 :研究阻断血管内皮细胞乙酰胆碱靶标(ETA)功能对血管内皮细胞结构和功能的影响。方法 :以山莨菪碱为工具药 ,喂食兔 3mon后急性处死 ,剖腹取主动脉 ,HE及ET +VG染色光镜观察主动脉的组织学改变 ,电镜观察血管内皮细胞的超微结构改变。同时取胸主动脉、肺动脉、颈动脉、肾动脉和股动脉 ,进行离体血管功能实验。结果 :生理状态下 ,长期给予兔山莨菪碱 ,血管内皮细胞结构受损 ,光镜下可见内皮细胞垂直附着在内弹力板上 ,电镜下可见内皮细胞呈网眼状损伤 ,有些内皮细胞即将脱落 ,线粒体肿胀。离体血管环实验研究发现ETA介导的内皮依赖性血管舒张反应显著减弱。结论 :生理状态下 ,反复阻断ETA ,可使内皮细胞结构和功能受损 。

激活血管内皮细胞乙酰胆碱作用靶标的抗血栓作用及其分子机制

目的 在角叉菜胶诱发的小鼠尾动脉血栓模型上 ,研究激活血管内皮细胞乙酰胆碱作用靶标对血栓形成的影响并探讨其可能的分子机制。方法 比较既可激活血管内皮乙酰胆碱作用靶标 ,又可激活M受体的槟榔碱和仅可激活M受体的毛果芸香碱对成栓率和血栓长度影响的差异 ,分析激活内皮乙酰胆碱作用靶标对血栓的影响 ;通过测定血小板最大聚集率 ;凝血酶原时间 (PT)、活化部分凝血活酶时间(KPTT)和凝血酶时间 (TT) ;血浆中组织型纤溶酶原激活物(t PA)的含量和纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1)的活性 ;血浆血栓素A2 (TXA2 )和前列环素 (PGI2 )含量 ,分析其可能的分子机制。结果 槟榔碱在 0 1～ 4 0mg·kg-1(ip)可剂量依赖性地对抗血栓形成 ,而在相同条件下 ,大剂量 (4mg·kg-1)的毛果芸香碱仍无抗血栓作用 ;槟榔碱对TT ,PT和KPTT和血小板最大聚集率 (MAR)均无影响 ;使血浆中t PA的含量升高 ,PAI 1的活性降低 ;使血栓形成过程中升高的TXA2 降低 ,并呈明显的量效关系 ,使血栓形成过程中降低的PGI2 升高。结论 激活血管内皮细胞乙酰胆碱靶标可对抗血栓形成 ,其可能的分子机制不通过直接影响凝血系统和血小板的聚集 ,而通过促进内皮细胞释放t PA和抑制内皮细胞合成并释放的PAI 1的活性 ,间接激活纤溶系统 ,发挥抗血栓?

大、小动脉内皮细胞乙酰胆碱作用靶标药理学特性的比较

目的 :比较大、小动脉内皮细胞乙酰胆碱作用靶标药理学特性的差异。方法 :采用大鼠尾动脉螺旋状血管条和主动脉离体血管环两种组织 ,对比观察乙酰胆碱 (ACh)诱发大、小动脉内皮依赖性舒张反应特征的差异 ,从而进一步研究小动脉内皮细胞乙酰胆碱作用靶标的药理学特性。结果 :氯化钾 (6 0mmol/L)预致血管收缩的尾动脉和主动脉对不同浓度ACh (10 -8～ 10 -4mol/L)产生内皮依赖性舒张反应 ,且呈剂量依赖性。L Nω 硝基精氨酸甲酯 (L NAME :10 -4mol/L)或美蓝 (MB :10 -5mol/L)与吲哚美辛 (Indo :10 -4mol/L)联用仅可部分地阻断ACh诱发尾动脉内皮依赖性舒张反应 ;而L NAME或MB可完全阻断ACh诱发主动脉内皮依赖性舒张反应。结论 :ACh激活大、小动脉上内皮细胞乙酰胆碱作用靶标诱发内皮依赖性舒张反应的药理学性质不同 ,在小动脉上 ,除了NO和PGI2介导外 ,还有一种非NO和非PGI2 的舒血管因子参与 ;在大动脉上 。

血管内皮细胞乙酰胆碱作用靶标相关新基因的电子克隆

血管内皮细胞乙酰胆碱作用靶标(ETA)作为特异性血管内皮细胞药物作用新靶点具有良好的抗动脉粥样硬化应用前景。通过培养前后血管内皮细胞表达差异基因的筛选,有可能分离获得ETA或其相关基因。在利用抑制削减杂交技术获得14个牛未知基因片段基础上,采用电子克隆途径,使6个未知基因片段得以延伸,并在GenBank的非冗余基因库中找到了对应或同源基因,其中3个延伸出了全长阅读框,另外3个延伸出部分长度;对于延伸出全长阅读框的基因,设计特异性引物进行PCR扩增,验证了电子延伸的可信性,同时也克隆了整个阅读框架区。

激活乙酰胆碱作用靶标对血管内皮细胞基因表达的影响

目的 研究激活乙酰胆碱作用靶标 (ETA)对血管内皮细胞基因表达的影响。方法 采用人类cDNA表达谱芯片 ,比较氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对人冠脉内皮细胞基因表达的影响及其生物学功能。结果 既激活ETA又激活M受体的氨甲酰胆碱 ,以及仅激活M受体的毛果芸香碱 ,在 10 0μmol·L-1浓度下与内皮细胞共孵育 10h ,以含有 14 0 0 0条人类unigene的BiostarH 14 112ScDNA表达谱芯片检测内皮细胞基因表达的变化 ,发现差异基因共 80 1条。两药共同诱导的差异基因 4 91条 ,上调 2 0 5条 ,下调 2 86条。两药诱导差异基因存在很大差别 ,其中氨甲酰胆碱诱导上调基因 119条 ,下调基因 191条 ,这些差异基因均不受毛果芸香碱的影响。进一步分析氨甲酰胆碱特异性诱导差异基因的功能 ,发现有受体与G蛋白、离子通道、血栓、动脉粥样硬化相关基因等七大类。结论 氨甲酰胆碱特异性诱导的差异基因与ETA及其效应器系统以及激活ETA产生抗动脉粥样硬化和抗血栓的分子机制相关。

吗啉环和哌嗪环类新衍生物对血管舒张功能的影响

目的 利用ETA与M受体的相似性和差异性 ,设计合成吗啉环和哌嗪环类新结构化合物 ,分析其对血管舒张功能的影响。方法 采用离体大鼠胸主动脉环 ,观察化合物对血管张力的影响 ;并观察L NAME ,吲哚美辛和阿托品对血管环最大舒张率的影响。结果 81个化合物中有 57个能舒张血管 ,其中 8个最大舒张率在 50 %～ 85 % ;活性化合物按母核可分为 8类 ;DMHPPP和PPVP诱发的内皮依赖性舒血管反应可被L NAME和吲哚美辛所拮抗 ,但不被阿托品拮抗 ;DMHPPP和PPVP还能显著增强乙酰胆碱 (ACh)诱发的内皮依赖性舒血管反应的最大舒张率。结论 具有舒血管作用的活性化合物通过促进内皮细胞释放一氧化氮(NO)和前列环素 (PGI2 )共同实现舒张效应 ;

偶联一氧化氮供体的槟榔碱结构类似物的合成及舒血管活性

目的寻找作用于血管内皮、具有血管舒张作用的抗动脉粥样硬化药物。方法将N-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶环通过酯键或酰胺键与NO供体单元3,4-二苯磺酰基-1,2,5-恶二唑-2-氧化物结合,合成具有NO释放和内皮乙酰胆碱靶标激动作用的槟榔碱结构类似物。结果合成了18个新的目标化合物,其结构经MS,IR,1HNMR及元素分析确证,并对合成的化合物进行大鼠胸主动脉血管舒张活性试验,所有化合物均具较好的体外舒血管活性。结论目标化合物具有较强的血管舒张作用,值得深入研究。