高效液相色谱法测定筋骨痛消液中11-羰基-β-乙酰乳香酸和川续断皂苷Ⅵ的含量

目的:建立筋骨痛消液中11-羰基-β-乙酰乳香酸和川续断皂苷Ⅵ的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定筋骨痛消液中11-羰基-β-乙酰乳香酸和川续断皂苷Ⅵ的含量,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18(4.60 mm×250 mm, 5μm),以0.05%磷酸-乙腈(20∶80)为流动相在254 nm波长下测定11-羰基-β-乙酰乳香酸;以水-乙腈(70∶30)为流动相在212 nm波长下测定川续断皂苷Ⅵ,随机挑选10批次筋骨痛消液,并对其含有的11-羰基-β-乙酰乳香酸和川续断皂苷Ⅵ分别进行测定。结果:11-羰基-β-乙酰乳香酸在0.010 2~1.020 5 mg·mL^(-1)(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率为99.11%,RSD为1.50%(n=9),10批次样品中的平均含量为1.435 3 mg·mL^(-1);川续断皂苷Ⅵ在0.010 2~1.020 0 mg·mL^(-1)(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率为99.21%,RSD为2.17%(n=9),10批次样品中的平均含量为0.816 3 mg·mL^(-1)。结论:该方法结果准确,灵敏度高,重复性好,可用于筋骨痛消液的质量控制。

HPLC法测定冠脉宁片(胶囊)中11-羰基-β-乙酰乳香酸及松香酸检查

目的 建立HPLC法测定冠脉宁片（胶囊）（乳香、没药、血竭等）中11-羰基-β-乙酰乳香酸和掺伪物松香中松香酸的含有量.方法 冠脉宁片（胶囊）和松香的乙醇提取物的分析采用Agilent TC-C18 （4.6 mm×150 mm,5 μm）色谱柱,以乙腈-0.1％甲酸（75∶25）为流动相;检测波长为251 nm（11-羰基-β-乙酰乳香酸）,241 nm（松香酸）.同时采用液-质联用方法对松香酸进一步确证.结果 松香酸的检出限为0.3 μg/mL;松香酸和11-羰基-β-乙酰乳香酸线性范围分别为3.036 ～ 303.6 μg/mL和3.068～306.8 μg,/mL; 11-羰基-β-乙酰乳香酸和松香酸回收率分别为98.16％和104.22％.结论 本研究建立的HPLC方法可用于冠脉宁片（胶囊）中11-羰基-β-乙酰乳香酸的测定及掺伪松香中松香酸的检查.

西黄丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸含量测定及松香酸检查方法研究

目的建立HPLC法测定西黄丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸含量及检查掺伪物松香中松香酸的方法,为评价西黄丸质量和监测掺伪掺假问题提供有效手段。方法采用Agilent ZORBAX-SB C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸(82∶18)为流动相;检测波长:251nm(11-羰基-β-乙酰乳香酸)、241nm(松香酸)。同时采用液-质联用(HPLC-MS)方法,对检测出松香酸的样品进行了进一步确证。结果松香酸的检出限为0.11mg.g-1;线性方程:Y乳香酸=1.2779×104 X-4.8896×103(r=0.9994)Y松香酸=2.5069×104 X+4.8678×103(r=0.9995);线性范围:松香酸为1.254～50.16μg.mL-1;11-羰基-β-乙酰乳香酸为1.217～48.67μg.mL-1;回收率:11-羰基-β-乙酰乳香酸为101.5%;松香酸为103.1%。结论本研究建立的HPLC方法稳定可靠,简便易行,可用于西黄丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸的含量测定及松香酸的检查。

11-羰基-β-乙酰乳香酸(AKBA)调节基质金属蛋白酶-1,-2,-9的活性(英文)

目的:降低创面的高MMPs活性是治疗慢性皮肤溃疡的新途径。本研究主要观察11-羰基-β-乙酰乳香酸(AKBA,中药乳香的一种活性成分)对MMP-1、MMP-2和MMP-9活性的调节作用。方法:人间质胶原酶(MMP-1)或者明胶酶A(MMP-2)被醋酸氨基苯汞(p-aminophenylmercuric acetate,APMA)激活后,与不同浓度的AKBA共同孵育1h,通过底物裂解法观察其活性的改变。MMP-9在中性粒细胞(polymorphonuclear neu-trophils,PMNs)中含量丰富,因此以大鼠腹腔PMN作为MMP-9的来源。PMN裂解产物与不同浓度的AKBA共同孵育1h,通过明胶酶谱法观察其中MMP-9活性的改变。我们建立了3个细胞模型:由TNF-α活化的人皮肤成纤维细胞模型;PMA活化的THP-1细胞模型和成纤维细胞-THP-1共培养细胞模型。AKBA与这3个细胞模型共同孵育24h后,用ELISA法检测细胞上清中MMP-1、MMP-2和MMP-9的含量,用明胶酶谱法检测细胞上清中MMP-2、MMP-9的活性。结果:AKBA在0.1-0.8mmol/L浓度范围内对MMP-1、MMP-2的活性有抑制作用,IC50分别为0.18mmol/L和0.27mmol/L;在0.05-0.85mmol/L浓度范围内对MMP-9活性表现出不同程度的抑制作用(P<0.01),其抑制作用呈浓度依赖性。AKBA促进成纤维细胞分泌MMP-2,但是,对THP-1细胞分泌MMP-9表现出抑制作用。在共培养细胞模型中,AKBA对MMP-1、MMP-2和MMP-9的分泌均表现出抑制作用。结论:AKBA作为乳香的一种活性成分,它对MMPs活性的直接抑制作用和对MMPs分泌的抑制作用可能是中药乳香治疗慢性皮肤溃疡的机制之一。

西黄丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸的鉴别及含量测定

目的:建立西黄丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸的定性定量检验方法。方法:采用薄层色谱法和高效液相色谱法建立西黄丸中乳香类成分11-羰基-β-乙酰乳香酸的方法。结果:运用建立的薄层色谱法检测12个生产厂家提供的17批西黄丸,均含有11-羰基-β-乙酰乳香酸,但含量差别大,运用高效液相色谱法对其进行含量测定,其中11-羰基-β-乙酰乳香酸含量最低为0.27%,最高为1.05%。结论:建立薄层色谱法和高效液相色谱法可用于西黄丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸的定性定量检验,可作为西黄丸现行法定检验标准中乳香显微鉴别的有益补充。

11-羰基-β-乙酰乳香酸对盐酸异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血的保护作用

目的:研究11-羰基-β-乙酰乳香酸(AKBA)对盐酸异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌缺血损伤的保护作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、AKBA低剂量组、AKBA高剂量组。皮下注射ISO 100 mg·kg-1诱导心肌缺血损伤模型后,测定各组大鼠心电图ST段变化,检测血清的肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌钙蛋白I(c Tn I)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量变化,观察心肌组织病理性改变,检测心肌细胞的凋亡情况。结果:AKBA高剂量组大鼠心电图ST段移位显著低于模型组;AKBA高剂量组能显著降低大鼠血清中心肌酶的CK-MB、c Tn I、LDH;AKBA高剂量组降低大鼠血清中MDA,升高SOD活力;AKBA高剂量组的心肌组织病理损伤小于模型组;AKBA高剂量组抑制心肌缺血损伤中的心肌细胞的凋亡。结论:AKBA组能有效抑制ISO所致心肌缺血损伤,抑制心肌细胞凋亡,对心肌具有保护作用。

Z-没药甾酮联合11-羰基-β-乙酰乳香酸对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的改善作用研究

目的:研究Z-没药甾酮(Z-GL)联合11-羰基-β-乙酰乳香酸(AKBA)对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的改善作用。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和Z-GL+AKBA低、高剂量组(二者低、高剂量均分别为25、50 mg/kg),每组10只。除假手术组外,其余各组均采用线栓法复制大脑中动脉闭塞/再灌注损伤模型。各给药组大鼠均于再灌注后灌胃相应药物,假手术组和模型组大鼠灌胃等容二甲基亚砜,每12 h给药1次,连续7 d。采用改良Longa评分法评价各组大鼠的神经功能缺损情况,采用苏木精-伊红染色法观察各组大鼠脑组织的病理学变化,采用TTC法检测其脑梗死面积并计算脑梗死百分比,采用TUNEL法检测其脑组织中在体细胞凋亡情况,采用免疫荧光染色法、免疫印迹法分别检测其脑组织中CD34、血管内皮生长因子(VEGF)、Delta样配体4(DLL4)的表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑组织皮层细胞数量减少且排列不规则,可见明显梗死区,并伴有新生血管明显减少;其神经功能缺损评分和脑梗死面积百分比均显著升高,TUNEL阳性细胞数显著增多,CD34、VEGF、DLL4的表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠上述症状均有明显改善,其神经功能缺损评分和脑梗死面积百分比均显著降低,TUNEL阳性细胞数显著减少,CD34、VEGF、DLL4的表达水平均显著升高,且Z-GL+AKBA高剂量组神经功能缺损评分、脑梗死面积百分比、TUNEL阳性细胞数均显著低于或少于低剂量组,CD34、DLL4的表达水平均显著高于低剂量组(P<0.05或P<0.01)。结论:Z-GL和AKBA联用可减轻脑缺血再灌注损伤模型大鼠的神经功能缺损,改善其脑损伤;这种作用可能与促进血管新生以及上调VEGF、DLL4蛋白的表达有关,并具有一定的剂量依赖性。

应用近红外光谱定量分析模型测定乳香中11-羰基-β-乙酰乳香酸含量

目的:用近红外光谱技术快速测定市售药材乳香中11-羰基-β-乙酰乳香酸含量。方法:根据乳香在4 894.45~4 466.33 cm^(-1)、5 750.69~5 499.99 cm^(-1)内的近红外吸收光谱,应用偏最小二乘法(PLS)建立校正模型,采用二阶导数预处理方法时能最有效地提取光谱的信息。结果:11-羰基-β-乙酰乳香酸的校正集相关系数为0.930 0,校正集标准偏差(RMSEC)为0.473,预测集相关系数为0.990 1,预测集标准偏差(RMSEP)为0.261。结论:近红外光谱技术快速简便,适合中药乳香指标成分的快速分析。

4，7-二甲氧基-N-乙酰神经氨酸的合成

对4,7-二甲氧基-N-乙酰神经氨酸合成方法进行了研究和改进.以N-乙酰神经氨酸为起始原料,经酯化、缩醛保护、甲基化及水解开环等7个反应,通过四步操作制得目标产物.该路线避免了毒性试剂硫酸二甲酯和危险试剂氢化钠的使用,而且操作简单,条件温和,重复性好.

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定中药制剂中松香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸及苏丹红Ⅰ~Ⅳ的含量

建立了快速检测中药制剂中松香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸、苏丹红Ⅰ～Ⅳ的超高效液相色谱-串联质谱方法。样品以甲醇为提取溶剂，经ZorbaxSB—C18色谱柱分离，以乙腈-0．1％甲酸水溶液为流动相梯度洗脱，流速为0．3mL／min；采用电喷雾离子源（ESI），正离子多反应监测（MRM）扫描方式检测；基质匹配标准曲线法定量。结果表明，6种化合物分别在3．0～100μg／L（苏丹红Ⅰ，Ⅱ）及30～1000μg/L（松香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸及苏丹红Ⅲ，Ⅳ）范围内线性关系良好，相关系数均大于0．99，方法检出限为0．7～8．6μg·kg^-1，定量下限为2．2—25．1μg·kg^-1低、中、高3个加标水平下各化合物的平均回收率为76．5％～94．9％，相对标准偏差（RSD）为2．3％-9．9％。采用酸化提取液的方法解决了苏丹红Ⅲ和Ⅳ的光学异构现象带来的计算误差。通过对目标化合物碎片离子的研究以及质谱裂解规律的总结，为其定性鉴别和定量分析提供了参考。该方法操作简便、准确、快速、灵敏，适合掺假中药制剂中松香酸及苏丹红含量的检测。

超高效液相色谱-串联质谱法测定根痛平胶囊及片剂中松香酸和11-羰基-β-乙酰乳香酸的含量

样品0.200 0g在乙醇中超声提取30min,再用乙醇稀释至10.0mL。提取液以Zorbax SB-C18色谱柱为固定相,以乙腈-0.1%(体积分数)甲酸溶液(17+3)混合液为流动相进行色谱分离。质谱分析中采用电喷雾正离子源,多反应监测模式,基质匹配制作标准曲线,外标法定量。结果表明:松香酸和11-羰基-β-乙酰乳香酸的质量浓度均在10.0~1 000μg·L^(-1)范围内呈线性,检出限(3S/N)分别为0.9,3.1μg·kg^(-1)。按标准加入法在3个浓度水平上进行加标回收试验,测得回收率在95.2%~101%之间,日内、日间精密度(n=6)均小于9%。

HPLC法测定乳香药材中11-羰基-β-乙酰乳香酸的含量

目的测定乳香药材中11-装基-β-乙酰乳香酸的含量，建立有效方法。方法采用HPLC法，二极管阵列检测器Empower色谱工作站；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;C18柱（250×4．6mm，5μm）；以乙腈-水-冰乙酸（79：21：0．1）为流动相；检测波长为249nm。结果11-羰基-β-乙酰乳香酸在12μg·mL^-1-495μg·mL^-1（r=0.9999）范围内线性关系良好，平均回收率为100．12％，RSD为1.51％（n=6）。结论所刹11-羰基-β-乙酰乳香酸含量符合标准，本法可作为11-羰基-β-乙酰乳香酸的质量控制方法。

腰痛宁胶囊中11-羰基-β-乙酰乳香酸的含量测定方法研究

目的建立腰痛宁胶囊中11-羰基-β-乙酰乳香酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定腰痛宁胶囊中11-羰基-β-乙酰乳香酸的含量,色谱柱为Agilent SB-C 18(4.6×150mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸(82∶18),检测波长为251nm,流速为1.0mL·min^-1,进样体积为10μL。结果11-羰基-β-乙酰乳香酸的线性范围:1.014~50.72μg·mL^-1(r=1),平均加样回收率为100.59%,RSD为0.88%(n=9)。结论所建立的方法准确、灵敏、简便,稳定性和重现性良好,专属性强,可较好地控制腰痛宁胶囊的质量。

参三七伤药片(胶囊)中11-羰基-β-乙酰乳香酸含量测定及掺假物松香酸的检查

目的建立HPLC波长切换法同时测定参三七伤药片(胶囊)中11-羰基-β-乙酰乳香酸及掺伪物松香中松香酸的含量。方法采用Aglient Eclipse Plus C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:0.1%甲酸-乙腈(28∶72);流速:1.0 ml/min;波长切换:0~30 min,241 nm,30~45 min,251 nm;进样量:10μl。同时采用UPLC-MS/MS方法对检出松香酸的样品进行进一步确证。结果松香酸检测限为0.04 mg/g,11-羰基-β-乙酰乳香酸和松香酸分别在2.012~201.2μg/ml(r=0.9999,n=5)和4.272~427.2μg/ml(r=0.9999,n=5)范围内呈良好的线性关系,其平均回收率分别为99.62%和99.71%。结论该方法简便、准确、重复性好,适用于参三七伤药片(胶囊)中11-羰基-β-乙酰乳香酸及掺伪松香中松香酸的检测。

苏合香丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸的鉴别及含量测定

目的:建立苏合香丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸的定性定量检测方法。方法:采用薄层色谱法和高效液相色谱法,建立苏合香丸中乳香类成分11-羰基-β-乙酰乳香酸的检测方法。结果:运用建立的薄层色谱法检测了3个生产厂家提供的9批苏合香丸,均含有11-羰基-β-乙酰乳香酸,但含量不同,故建立高效液相色谱法对3个厂家22批苏合香丸进行含量测定。结论:建立的薄层色谱法和高效液相色谱法可用于苏合香丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸的定性定量检验,为苏合香丸质量控制和评价提供了科学依据。

乳香酸与三氧化二砷配伍对成纤维细胞和THP-1细胞基质金属蛋白酶产生及活性的调节作用

目的:探讨乳香、砒石主要单体成分11-羰基-β-乙酰乳香酸(acetyl-11-keto-beta-boswellic acid,AKBA)与三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)配伍对人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast,HSFb)、人单核细胞系THP-1细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-1、MMP-2和MMP-9的调节作用,揭示其在促进创面愈合中的作用。方法:模拟创面炎症微环境建立3个细胞模型:由肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)刺激的HSFb模型,佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)活化的THP-1细胞模型和HSFb、THP-1共培养细胞模型。AKBA、ATO与这3个细胞模型共同孵育24 h后,分别用酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedi mmunosorbent assay,ELISA)法和明胶酶谱法检测细胞培养上清中MMP-1、MMP-2和MMP-9的含量及MMP-2和MMP-9的活性;逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞中MMP-1、MMP-2和MMP-9 mRNA的表达情况;ELISA法检测各细胞模型炎性因子TNF-α和白细胞介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)的分泌量;蛋白印迹法检测细胞中细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases 1 and 2,ERK1/2)及p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38mitogen-activated proteinkinase,p38 MAPK)磷酸化水平。结果:AKBA与ATO配伍对TNF-α刺激后的HSFb、PMA活化的THP-1细胞以及细胞共培养体系产生的MMP-1、MMP-2和MMP-9分别在活性、含量和mRNA水平有一定抑制作用(P<0.05,P<0.01);同时,AKBA与ATO配伍可降低THP-1细胞和共培养体系中TNF-α和IL-1β的分泌(P<0.01),并降低HSFb和THP-1细胞中ERK1/2及p38 MAPK磷酸化水平(P<0.05,P<0.01)。结论:AKBA与ATO配伍应用可能是通过抑制炎症状态下细胞炎症因子释放及抑制p38 MAPK信号转导通路,使成纤维细胞和炎性细胞产生MMP减少,从而发挥活血化腐、促进创面愈合的作用。

11-羰基-β-乙酰乳香酸对皮肤T细胞淋巴瘤细胞系HuT 78增殖、凋亡的作用研究

为探究11-羰基-β-乙酰乳香酸(acetyl-11-keto-β-boswellic acid,AKBA)对皮肤T细胞淋巴瘤(cutaneous T cell lymphoma,CTCL)细胞系HuT 78增殖和凋亡的影响及作用机制,用不同浓度的AKBA处理HuT 78细胞系24、48 h后,应用CCK-8法检测HuT 78细胞的增殖;应用FACS检测肿瘤细胞的凋亡水平;通过Real-time PCR及Western blotting检测凋亡相关基因及蛋白的表达水平。结果显示,AKBA通过抑制HuT 78细胞NF-κB抑制蛋白α(NF-κB inhibitor alpha,IκB-α)的磷酸化抑制NF-κB活化;下调抗凋亡蛋白Bcl-xL、Bcl-2的表达,促进caspase3的活化降解,同时上调Fas的配体FasL的表达,对HuT 78细胞发挥抑制增殖和促进凋亡的作用,可作为免疫治疗的候选药物。

HPLC法测定乳香中乙酰乳香酸类成分的含量

目的:建立乳香中3种乙酰乳香酸类成分的HPLC含量测定方法,为全面评价乳香药材质量提供依据。方法:采用HPLC方法测定,Diamonsil(钻石)C8色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm);乙腈-0.1%磷酸(A:80:20;B:70∶30)为流动相;检测波长210nm,250nm;柱温35℃。结果:α-乙酰乳香酸、β-乙酰乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸分别在0.099～9.9μg(0.999 9)、0.097 6～9.76μg(0.999 9)、0.099 7～9.97μg(0.999 9)范围内呈线性,平均回收率分别为98.6%、101.9%、98.25%,RSD分别为1.38%、1.49%、1.86%(n=6);乳香药材供试品中3种乙酰乳香酸的百分含量分别在0.23%～2.41%、0.45%～4.27%、0.35%～5.27%范围。结论:本方法简便,稳定,可用于乙酰乳香酸类成分的定量分析。

β-环糊精辅助提取乳香的工艺优化研究

目的:改进乳香配方颗粒的提取工艺并增强药效作用。方法:采用正交试验法,以11-羰基-β-乙酰乳香酸(AKBA)的含量及干浸膏质量的综合评分为评价指标,优选水溶性淀粉类辅料辅助提取的种类及其用量、煎煮时间、加水量等工艺参数,并结合药效学指标,评价工艺改进后对其活血化瘀、镇痛、消肿效果的影响。结果:选择药材量30%的β-环糊精作为乳香辅助提取的辅料,提取2次,每次加入8倍量水,煎煮60 min;工艺改进后提取制得的乳香配方颗粒其活血、镇痛以及消肿作用均有显著增强。结论:新工艺明显改善了原有工艺存在的不足,促进了有效成分的溶出,并增强了药效作用,为乳香配方颗粒的开发利用提供了实验依据,该研究成果具有推广应用的前景。

基于熵权法结合Box-Behnken响应面优化筋骨痛消液的制剂醇提工艺

目的优化筋骨痛消液的制剂工艺。方法采用熵权法结合Box-Behnken响应面法对筋骨痛消液中乳香、续断、龙血竭与红花及大黄与薄荷的醇提工艺进行优化。结果11-羰基-β-乙酰乳香酸含量与乳香醇提液浸膏得率权重系数分别为0.5166,0.4834;川续断皂苷Ⅵ含量与续断醇提液浸膏得率权重系数分别为0.4790、0.5210。乳香、续断、龙血竭与红花、大黄与薄荷最优醇提条件乙醇浓度分别为95%,55%,80%,60%;加醇倍量分别为5倍,5倍,7倍,8倍;浸泡时间分别为48 h,72 h,24 h,72 h。结论通过熵权法结合响应面法设计优化筋骨痛消液的制剂提取工艺,为筋骨痛消液制剂质量提升及质量保证提供科学依据。