菠菜乙醇酸氧化酶编码区cDNA在酵母表达载体中的克隆

目的 :克隆菠菜乙醇酸氧化酶cDNA并构建其酵母表达载体。方法 :从新鲜菠菜叶子中提取总RNA ,用RT PCR法扩增菠菜乙醇酸氧化酶编码区cDNA并插入pMD T载体中进行序列测定 ;将此cDNA构建入P .Pastoris酵母表达体系中的pPIC3 5k上的SnaBI/NotI位点 ,进行PCR筛选和限制性酶切鉴定。结果 :测序表明获得的基因为乙醇酸氧化酶cDNA序列 ,与国外文献报道的序列相比有约 98%的同源性 ;重组质粒的SnaBI/NotI双酶切证明构建正确。结论 :菠菜乙醇酸氧化酶cDNA克隆及重组质粒pPIC3 5K GO的获得 。