乙醛脱氢酶-1作为心肌干细胞有效标志物的实验研究

目的研究乙醛脱氢酶-1(ALDH-1)是否可以作为分选心肌干细胞(CSC)的有效标志物。方法从裸鼠心脏分离培养细胞球,收集细胞球制成单细胞悬液,利用Aldefluor试剂结合流式细胞术来分选心脏球体细胞中的SSCloAldebr细胞(ALDH-1阳性细胞),通过增殖能力、克隆形成、表型分析及定向分化能力鉴定其干细胞(SC)的特性。结果裸鼠心脏细胞无血清培养可形成细胞球,球体细胞中可检测到ALDH-1阳性细胞的存在;ALDH-1阳性细胞具有高增殖性、高克隆形成率及定向分化的能力,具有SC的特性。结论裸鼠心脏中存在CSC;ALDH-1可以作为CSC有效的标志物。

乳腺浸润微乳头状癌中乙醛脱氢酶-1表型细胞的研究

目的：探讨肿瘤干细胞标志物乙醛脱氢酶-1（aldehyde dehydrogenase-1，ALDH-1）在乳腺浸润性微乳头状癌（ invasive micropapillary carcinoma ，IMPC）原发灶及淋巴结转移灶中的表达及临床意义。方法选取乳腺IMPC伴淋巴结转移103例和非特殊型浸润性导管癌伴淋巴结转移（ invasive ductal carci-noma not otherwise specified ，IDC-NOS）110例的石蜡包埋组织标本，所有入选病例术前均未经放、化疗治疗。免疫组织化学染色技术检测2组肿瘤原发灶和相应的淋巴结转移灶癌组织中ALDH-1的表达、定位和分布情况，并分析其与乳腺癌各临床病理学特征之间的关系及预后意义。结果①IMPC组原发灶及淋巴结转移灶中肿瘤细胞 ALDH-1阳性表达率[原发灶37.9％（39/103）；淋巴结转移灶47.6％（49/103）]，明显高于IDC-NOS组[原发灶21.8％（24/110）；淋巴结转移灶23.6％（26/110）]，差异有统计学意义（P＜0.05）。②IMPC原发灶及淋巴结转移灶中肿瘤细胞ALDH-1阳性表达与患者的肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移、ER阴性状态、PR阴性状态、HER2过表达呈明显正相关（P＜0.05）。③与IDC-NOS组相比，IMPC组患者的无病生存期明显缩短，差异具有统计学意义（ P＝0.003）。淋巴结阳性乳腺IMPC原发灶及淋巴结转移灶肿瘤细胞中 ALDH-1蛋白阳性表达患者的无病生存期明显低于其阴性表达患者，差异有统计学意义（ P＜0.05）。多因素分析乳腺IMPC转移淋巴结中ALDH-1蛋白阳性表达与患者的预后差有关（P＝0.005）。结论 ALDH-1可作为淋巴结阳性乳腺IMPC患者预后不良的指标，且IMPC肿瘤细胞中干细胞的存在可能是导致IMPC高淋巴管侵袭、高淋巴结转移及耐药等恶性生物学行为的重要原因。

老年食管鳞癌患者术后组织中乙醛脱氢酶1和血管内皮生长因子表达的临床意义

食管鳞癌病情进展快,预后差。近来多项研究显示患者病变进展中多种基因和蛋白出现明显变化。乙醛脱氢酶(ALDH)1是ALDH家族的重要成员,参与机体多种组织的分化和基因表达,也是正常干细胞分化的重要物质〔1〕。近年来学者发现其在恶性肿瘤中表达明显升高〔2〕。血管内皮生长因子(VEGF)是重要的血管生成促进因子,可以引起肿瘤间质新生血管的形成〔3〕。本实验检测食管鳞癌中ALDH1和VEGF的表达及二者的关系。

乙醛脱氢酶1和Numb在食管鳞癌患者中的表达及意义

目的探讨乙醛脱氢酶(ALDH) 1和Numb基因在食管鳞癌患者中的表达及意义。方法应用实时荧光定量PCR技术检测120例食管鳞癌及癌旁组织标本中ALDH1和Numb基因的表达情况,并且采用Western印迹检测ALDH1和Numb蛋白表达,探讨其与患者临床特征的关系。结果食管鳞癌组织中ALDH1 mRNA相对表达量(11. 07±1. 18)显著高于癌旁组织(7. 13±2. 05,P<0. 05);而食管鳞癌组织中Numb mRNA的相对表达量(2. 02±0. 02)显著低于癌旁组织(5. 87±0. 47,P<0. 05)。ALDH1蛋白和Numb蛋白表达与转移情况、浸润深度、最大直径、分化程度及Ki67指数密切相关(P<0. 05)。AL-DH1蛋白和Numb蛋白表达呈负相关(r=-0. 46,P=0. 034 9)。结论 ALDH1在食管癌的生物学过程中发挥致癌作用,Numb基因发挥抑癌的作用。

耐放疗宫颈癌Caski细胞ALDH-1表达的研究

目的研究耐放疗宫颈癌Caski细胞亚群转染醛脱氢酶基因(ALDH-1)表达的情况,以了解ALDH-1能否作为宫颈癌干细胞的标记物,为今后宫颈癌干细胞的研究提供方向。方法使用两种照射方案(2 GY组:2 GY×10次;4 GY组:4 GY×5次),对宫颈癌Caski细胞进行β射线照射诱导出耐放疗细胞亚群;并检测Caski细胞照射前后的群体倍增时间、细胞凋亡、放射敏感性和ALDH-1表达的情况。结果与无照射组(对照组)相比,2 GY组、4 GY组的细胞群体倍增时间明显延长(P均<0.05);细胞凋亡率、SF2、ALDH-1阳性率均有明显升高(P均<0.01)。结论放疗诱导宫颈癌Caski细胞凋亡,导致细胞生长延缓。耐放疗宫颈癌Caski细胞亚群的ALDH-1表达明显升高,提示ALDH-1可能可以作为宫颈癌干细胞的标记物之一。

SIRT1在非小细胞肺癌TKIs获得性耐药中的调控作用

目的分析组蛋白去乙酰化酶SIRT1在非小细胞肺癌干细胞样特性中的调控作用。方法通过流式细胞术在PC-9及PC-9-GR细胞系中检测肿瘤干细胞比例;采用CCK8法检测IC50;采用qPCR检测SIRT1 mRNA表达;采用Western blot法检测SIRT1蛋白表达;通过细胞悬浮克隆成球实验检测不同组的细胞成球能力。结果成功建立了耐药细胞系PC-9-GR,PC-9-GR的IC50、ALDHbright肿瘤干细胞百分比、SIRT1蛋白表达以及SIRT1mRNA表达均高于PC-9(P <0.05);通过细胞悬浮克隆成球实验发现PC-9-GR成球能力显著高于PC-9(P <0.05),应用吉非替尼后,其成球能力较对照组差异无统计学意义(P> 0.05);应用SIRT1特异性抑制剂TV6及双药联合后,两组细胞株的成球能力均显著降低(P <0.05)。结论非小细胞肺癌-酪氨酸激酶抑制剂获得性耐药的产生与酪氨酸激酶抑制剂药物富集ALDH1+标记的肿瘤干细胞密切相关,而组蛋白去乙酰化酶SIRT1在维系这群肿瘤干细胞干性中发挥着重要作用,其抑制SIRT1对肿瘤干细胞的靶向,可能有助于延缓酪氨酸激酶抑制剂获得性耐药。

ALDH1在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究食管鳞状细胞癌组织中乙醛脱氢酶-1(ALDH1)的表达与食管鳞状细胞癌的生物学行为和预后之间的相关性。方法应用免疫组织化学链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP法)分别检测80例术前无放、化疗食管鳞状细胞癌标本的ALDH1表达情况。结果根据Q评分(quick score),按Q>120为高表达的标准,80例食管鳞状细胞癌标本中有25例高表达ALDH1,高表达率为31.25%。研究显示ALDH1的表达与食管鳞状细胞癌患者年龄、性别、TNM分期、淋巴结转移均无明显的相关关系(P均>0.05),而与食管鳞状细胞癌的组织分化程度有关(P<0.05),食管鳞状细胞癌患者中ALDH1高表达组的生存率明显低于低表达组(P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌ALDH1的表达与组织分化程度及患者的预后有密切关系,ALDH1可作为食管鳞状细胞癌预后评价的参考指标。

酒精代谢相关基因位点多态性与酒依赖风险及酒精主观反应的关系

目的探讨酒精代谢酶及药效酶基因ALDH2(rs671)、ADH1B(rs1229984)、ADH1C(rs141973904)、OPRM1(rs1799971)、PDYN(rs1997794)位点多态性与个体的酒精主观反应、饮酒行为之间的关系。方法选取2018年1~12月在新疆医科大学第一附属医院及新疆精神卫生中心住院且符合DSM-Ⅳ诊断的酒依赖患者(酒依赖组,n=100)。酒依赖组与正常健康被试(对照组,n=100)完成一般情况调查表、签署知情同意书,抽取静脉血5 ml提取DNA,酒依赖组完成酒精挑战试验,于饮酒前、饮酒后30、60、120、180 min分别完成双相酒精反应问卷(biphasic alcohol effect scale,BAES)、药物效应问卷(drug effect questionaire,DEQ)。利用效用程序计算遗传连锁分析的Hardy-Weinberg平衡。采用Pearson卡方检验并计算优势比OR值,使用重复测量卡方检验法分析个体酒精主观反应的变化趋势。结果rs671等位基因位点A与酒依赖的风险相关(χ2=23.97,P<0.01,OR=7.11,95%CI=2.93~17.30),rs1229984位点单核苷酸多态生以显性遗传模型"T/T-C/T"为最佳拟合模型(P<0.01,OR=0.16,95%CI=0.08~0.32),是酒依赖的保护性因素。酒依赖患者rs1229984位点基因型TT者较CC和CT者的个体最大饮酒量(F=4.86,P=0.01)、每周饮酒量(F=4.51,P=0.01)更低,rs1799971位点基因型GG与GA者的个体最大饮酒量(F=20.28,P<0.01)、周饮酒量(F=12.46,P<0.01)均大于AA型者。rs1799971位点基因型AA者较GG及GA者表现出更低的兴奋作用(F=7.99,P=0.01)、更高的镇静作用(F=57.04,P<0.01)及更低的"喜欢"(F=13.38,P<0.01)和"还想要一些"(F=26.37,P<0.01)效应。结论酒精代谢酶rs671、rs1229984基因多态性与个体饮酒行为、饮酒量关系密切,rs1799971既与个体饮酒行为有关,又与饮酒后主观反应关系有关。