人抗HER2单链抗体/精氨酸九聚体融合蛋白的基因构建、表达及鉴定

目的:构建人源性抗HER2单链抗体(scFv)/精氨酸九聚体(9R)融合蛋白基因,在大肠杆菌里表达纯化并检测该融合蛋白的活性。方法:采用PCR的方法,扩增融合基因scFv-9R,将获得的基因克隆入原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,通过Ni-NTA螯合层析纯化,透析复性,超滤浓缩。ELISA分析scFv-9R融合蛋白抗原亲和活性,凝胶迁移实验检测scFv-9R融合蛋白与siRNA结合活性。结果:成功构建了人源性抗HER2 scFv-9R融合基因,经IPTG诱导后在M15中以包涵体形式表达。表达的目的蛋白scFv-9R能与HER2抗原结合,同时具有siRNA结合能力。结论:scFv-9R具有结合抗原与siRNA双重活性,为靶向递送siRNA的研究奠定了基础。

pH响应型DOX@R_(9)-PEC-NP药物载体的合成及释药性能研究

利用天然果胶(PEC)和九聚精氨酸(R_(9))构建一种具有穿膜效果及pH响应型的载药纳米球(R_(9)-PEC-NP),用于目标药物的靶向递送。以PEC和R_(9)为原料,合成了具有穿膜效果的九聚精氨酸修饰的果胶衍生物(R_(9)-PEC),并用元素分析仪(EA)和傅里叶红外光谱仪(FT-IR)对R_(9)-PEC进行了表征;在R_(9)-PEC溶液中CaCO_(3)自组装形成一种具有pH响应型的纳米球(R_(9)-PEC-NP),并用Zeta电位与粒度分析仪和扫描电子显微镜(SEM)对其形貌、尺寸和电位进行了测定,用紫外-可见分光光度计(UV-Vis)和倒置荧光显微镜分析了R_(9)-PEC-NP对阿霉素(DOX)的装载及释放情况。研究结果表明:R_(9)和PEC成功连接,呈现规则的球形,平均粒径为215 nm;所制备的R_(9)-PEC-NP微粒可对DOX实现有效装载,包封率为(88.70±3.56)%,载药量为(8.15±0.12)%;该纳米球可以缓控释放DOX,且具有较好的pH响应性,同时,因R_(9)的连接赋予其细胞穿膜性能,使其成为潜在的智能给药系统载体材料。

细胞穿膜肽转导大型海藻及对其光合作用的影响

细胞穿膜肽能够介导外源物质进入细胞,是一种简单高效的分子运输手段。传统的大型海藻外源物质转导方法较为复杂,并且效率偏低。目前尚没有将细胞穿膜肽应用于大型海藻的报道。本实验利用细胞穿膜肽九聚精氨酸(R9)对浒苔、紫菜和海带这三种常见的大型海藻进行转入,观察其转导效果,并测定转导后藻体光合作用效率的变化。实验结果表明,细胞穿膜肽R9能够成功的转入三种大型海藻,转入的效率与藻体细胞壁结构有一定联系;转导后藻体的Fv/Fm、ETR(I)和ETR(II)没有明显变化,说明R9对大型海藻的光合作用没有负面影响。本实验建立了一种新型的大型海藻外源物质转导方法,为今后的大型海藻育种,分子转化以及外源物质转入机制等研究奠定了基础。