基于蛋白质组学探讨九蒸九晒地黄延缓去卵巢小鼠脑衰老的药效与机制

探究九蒸九晒地黄延缓去卵巢小鼠脑衰老的药效与机制。小鼠去卵巢之后随机分成模型组、戊酸雌二醇组(0.3 mg·kg^(-1))以及九蒸九晒地黄低、中、高剂量组(1.0、2.0、4.0 g·kg^(-1)),另设假手术组,每组15只。术后1周,开始灌胃给药连续15周。跳台实验和水迷宫实验检测小鼠行为学变化。HE染色和尼式染色观察小鼠脑组织形态学变化。免疫组化检测小鼠脑组织Aβ和ER_(β)的表达。试剂盒检测小鼠血清雌激素水平和脑组织胆碱酯酶及胆碱酯酶转移酶水平。提取海马蛋白,Nano-ESI-LC-MS联用系统检测蛋白,Protein Discovery软件鉴定蛋白,SIEVE软件进行蛋白相对定量定性分析,PANTHER Classification System数据库对差异蛋白进行GO分析和KEGG数据库信号通路富集。与假手术组比较,模型组学习记忆能力下降,跳台潜伏期显著缩短(P<0.05),Morris水迷宫实验中,逃避潜伏期显著延长(P<0.05),穿越平台次数和目标象限停留时间缩短;海马区神经细胞排列散乱,细胞间隙变大,Aβ阳性细胞表达显著增多(P<0.05),ER_(β)阳性细胞表达显著减少(P<0.05),雌激素水平明显下降(P<0.05),胆碱功能减退(P<0.05)。与模型组相比,九蒸九晒地黄组学习记忆能力改善,跳台潜伏期显著延长,雌激素水平明显升高(P<0.05),海马区神经细胞排列整齐,形态完整,Aβ阳性细胞数量减少,ER_(β)阳性细胞表达增多。蛋白质组学筛选差异蛋白得到146个,KEGG信号通路富集分析得到75条信号通路,其中参与dopaminergic synapse信号通路的蛋白最多,有13个蛋白参与。综上,九蒸九晒地黄可延缓去卵巢小鼠脑衰老进程,其机制可能为提高雌激素水平,介导dopaminergic synapse信号通路,提高胆碱功能。

基于双波长高效液相色谱法同时测定九蒸九晒熟地黄中7种成分的含量

目的 建立同时测定九蒸九晒熟地黄中梓醇、益母草苷、地黄苷A、地黄苷D、毛蕊花糖苷、异类叶升麻苷、5-羟甲基糠醛(5-HMF)等7种成分含量的方法。方法 采用超声法提取九蒸九晒熟地黄炮制过程中每一次蒸晒后的样品,然后应用高效液相色谱(HPLC)法同时测定样品中7种成分的含量;色谱柱为赛默飞C18(250.0 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%磷酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱,柱温30℃,检测波长203,332 nm,进样量10μL。结果 7种成分在各自线性范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.57%~100.58%,RSD为0.60%~1.78%。结论 该方法准确、稳定,重复性好,可用于九蒸九晒熟地黄饮片的质量控制。