九龙藤总黄酮调控自噬对抗心肌缺血/再灌注损伤的实验研究

目的研究九龙藤总黄酮(Bauhinia championii flavones,BCF)调控自噬抗心肌缺血/再灌注损伤的作用。方法120只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、BCF高剂量组、BCF低剂量组、自噬抑制剂(3-MA)组(n=8),采用左冠状动脉前降支结扎法制备大鼠心肌缺血/再灌注模型,以紫外分光光度法检测缺血30min、缺血/再灌注1 h及3 h时肌酸激酶同工酶(CK-MB)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、总抗氧化力(T-AOC)的含量;以Western blot法检测心肌微管相关蛋白轻链3蛋白-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)的表达。结果与模型组相比,BCF能剂量依赖性提高心肌缺血/再灌注不同时段的T-AOC,降低CK-MB及i NOS含量,下调LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达,上调m TOR蛋白表达(P<0.05或P<0.01);与3-MA组相比,BCF能够降低i NOS及CK-MB,提高TAOC水平,缺血期上调LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达,再灌注期下调LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达,缺血/再灌注期均下调m TOR蛋白表达(P<0.05)。结论自噬在心肌缺血期即发生,并随着缺血/再灌注时间延长而进一步加强;BCF预处理可促进缺血期自噬发生及抑制再灌注时自噬过表达,从而减轻心肌缺血/再灌注损伤。

九龙藤化学成分研究(Ⅱ)

从九龙藤 (BauhiniachampioniiBenth .)的乙醇提取物中分离鉴定 5个黄酮类化合物 ,经波谱分析确定其结构分别为 :Quercitrin(1) ,Myricitrin(2 ) ,(- ) Epicatechingallate(3) ,5 ,6 ,7,3′ ,4′,5′ hexamethoxyflavone(4 ) ,5 ,6 ,7,5′ tetramethoxy 3′ ,4′ methylenedioxyflavone(5 )。化合物1～ 3为首次从该植物中分到 ,另外 。

九龙藤总黄酮对垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血的保护作用

目的研究九龙藤总黄酮(Bauhinia championii(Benth)Benth flavones,BCF)对急性心肌缺血的作用及机制。方法♂SD大鼠随机分为生理盐水、模型、阳性药维拉帕米、BCF低、中、高剂量(60、120、240 mg·kg-1)共6组。除生理盐水组外,各组大鼠舌下静脉注射垂体后叶素(pituitrin,pit)造模,观察Ⅱ导联心电图ST段和血流动力学指标、心率(HR)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dt max)和左心室内压最大下降速率(-dp/dt max)的变化;紫外分光光度计法检测血清总抗氧化力(TAOC)、组织Na+,K+-ATP酶、Ca2+,Mg2+-ATP酶活力;ELISA法检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(cTnI)和肌红蛋白(MyoG)的含量。结果与模型组相比,BCF能剂量依赖性地抑制注射pit后15 s、1 min心电图ST段抬高,减小HR、+dp/dt max、-dp/dt max降低和LVEDP升高的幅度,增加血清T-AOC,改善Na+,K+-ATP、Ca2+,Mg2+-ATP酶活力,减少心肌损伤标志物CK-MB、cTnI、MyoG的漏出(P<0.05或P<0.01)。结论 BCF对pit所致大鼠急性心肌缺血有明显保护作用,其机制可能与改善缺血心肌舒缩功能、抗氧化、抑制钙超载、减轻心肌损伤有关。

九龙藤乙酸乙酯提取物清除自由基、镇痛抗炎作用研究

[目的]研究九龙藤乙酸乙酯提取物的清除自由基及镇痛抗炎作用。[方法]建立体外氧自由基(O2-.)和羟自由基(.OH)发生体系,检测九龙藤乙酸乙酯提取物对O2-.和.OH的清除和抑制作用;采用热板法、扭体法和二甲苯致小鼠耳廊肿胀法,研究九龙藤乙酸乙酯提取物的镇痛抗炎作用。[结果]与空白对照组相比,九龙藤乙酸乙酯提取物的低、中、高浓度(终浓度分别为5、10、20 mg/ml)均能清除O2-.和.OH、抑制O2-.的生成(P<0.05),并随着浓度的增加,作用增强;同时,其能明显增强小鼠的痛阈值,具有镇痛作用,并且能明显抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀(P<0.05)。[结论]九龙藤乙酸乙酯提取物有良好的清除自由基和镇痛抗炎作用。

岩溶植物青冈和九龙藤叶片光学特性日变化研究

采用LI-6400便携式光合测定系统测定分析喀斯特生态系统重要乔木植物青冈(Cyclobalanopsis glauca)和藤本植物九龙藤(Bauhinia championii)的净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Gs)、水分利用效率(WUE)等生理特性指标。结果表明:净光合速率日变化在青冈为双峰型,九龙藤则为单峰型,其中日均Pn、Tr值九龙藤(3.58μmolCO2·m-2·s-1、2.06 mmolH2O·m-2·s-1)>青冈(2.13μmolCO2·m-2·s-1、1.08mmolH2O·m-2·s-1),WUE值青冈(2.40mmol·mol-1)>九龙藤(1.83mmol·mol-1)。比较而言,乔木树种青冈为低Pn、弱Tr、高WUE的树种,而九龙藤则属高Pn、高Tr树种。

大孔树脂纯化九龙藤总黄酮的工艺研究

目的探寻大孔树脂纯化九龙藤总黄酮的最佳纯化工艺。方法以静态吸附率和解吸率为考察指标,确定大孔树脂型号;以黄酮含量及回收率为指标,优选层析条件。结果 D101型大孔树脂对九龙藤黄酮的吸附性能及解析效果较好;最佳纯化工艺条件为:3.5 g九龙藤总黄酮粗品,干法上样,流速5 ml.min-1,13倍柱床层体积(BV)水和12BV 20%醇洗脱除杂质,4BV 60%醇洗脱;在此工艺条件下九龙藤总黄酮含量为47.2%,回收率为78%。结论以D101大孔吸附树脂纯化九龙藤总黄酮具有较好效果。

九龙藤总黄酮对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的研究九龙藤总黄酮(BCF)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法分离出生1~3 d的大鼠乳鼠心肌细胞,培养72 h后随机分为空白对照组、缺氧/复氧模型组、九龙藤总黄酮(60、120和240μg/ml)干预组和舒血宁注射液(SXN,100μg/ml)阳性对照组,每组设8个复孔。药物干预6 h后,观察各组细胞形态学变化,通过MTT比色法测定细胞存活率;测定各组细胞培养液中谷草氨酸氨基转移酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)释放量;测定各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量;通过流式细胞术测定细胞凋亡率。结果与空白对照组相比,缺氧/复氧模型组心肌细胞形态明显异常、细胞存活数明显减少,培养液中AST、CPK、LDH释放量显著升高,细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性显著降低且MDA含量显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与缺氧/复氧模型组比较,九龙藤总黄酮120、240μg/ml干预组心肌细胞形态明显好转,存活细胞数明显增加,培养液中AST、CPK释放量显著减少,细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低,细胞凋亡率显著降低,并且九龙藤总黄酮240μg/ml干预组培养液中LDH释放量显著降低及细胞中GSH-Px活性显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论九龙藤总黄酮能够有效改善缺氧/复氧损伤心肌细胞形态、提高细胞存活率、改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤、并降低细胞凋亡率,提示九龙藤总黄酮对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有剂量依赖性的保护作用。

九龙藤中黄酮类化合物的研究

从豆科植物九龙藤(Bauhinia championii Benth)的乙醇提取物中分离出7个已知黄酮类化合物,经过核磁共振谱(NMR)和质谱(MS)分析及标准品对照,鉴定了它们的结构,分别为:5,6,7,5′-四甲氧基-3′,4′-亚甲二氧基黄酮(1),5,6,7,3′,4′,5′-六甲氧基黄酮(2),5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(3),5,6,7,3′,4′-五甲氧基黄酮(甜橙素)(4),5,7,4′-三甲氧基黄酮(5),5,7,3′,4′-四甲氧基黄酮(6),(-)-表阿夫儿茶素(7).其中化合物5,7为首次从该植物中分离得到.

九龙藤茎化学成分和抑菌活性研究

从九龙藤茎部的乙醇提取物中分离得到了15个非黄酮类化合物,经IR,1HNMR,13 CNMR等分析法表征,结合标样对照,鉴定了它们的结构,分别为:β-谷甾醇(1)、正三十烷(2)、正六十烷(3)、羽扇豆醇(4)、β-香树脂醇(5)、计曼尼醇(6)、cameroonan-7α-ol(7)、silphiperfolane-3,5,6-trio1(8)、齐墩果酸(9)、β-胡萝卜苷(10)、没食子酸(11)、3,4-二羟基苯甲酸乙酯(12)、阿魏酸(13)、3,4-二甲氧基-5-羟基苯甲酸(14)和4-羟基-3-甲氧基苯甲酸(15).其中,化合物3~4,7~9和12~14为首次从该植物中得到.抑菌实验结果表明,该植物的乙酸乙酯提纯部分和正丁醇提纯部分均具有较好的抑菌活性.

九龙藤乙酸乙酯部位化学成分的分离鉴定

目的:对九龙藤乙酸乙酯部位的化学成分进行研究。方法:利用色谱法和波谱方法对九龙藤乙酸乙酯部位的化学成分进行分离和结构鉴定。结果:从九龙藤乙酸乙酯部位共分离得到8个化合物,分别为儿茶素(1)、表儿茶素(2)、儿茶素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(3)、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(4)、(R)-六羟基联苯邻二甲酸甲酯(5)、4-羟基-3-甲氧基苯基-1-O-(6'-O-没食子酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、3,5-二甲氧基-4-差羟基苯基-1-O-β-D-(6'-O-没食子酰基)-吡喃葡萄糖苷(7)、3,4-二羟基苯乙醇4-O-b-D-(6"-O-没食子酰基)-吡喃葡萄糖苷(8)。结论:这8个化合物均为首次从九龙藤中分离得到。

九龙藤总黄酮抑制自噬减轻心肌缺血/缺氧损伤

目的研究九龙藤总黄酮(Bauhinia championii flavones,BCF)对心肌缺血/缺氧损伤的抑制作用及机制。方法培养H9c2大鼠心肌细胞,建立OGD模型模拟心肌缺血/缺氧,给予或不给予BCF预处理。以Giemsa染色法观察细胞形态;CCK-8检测细胞活力;ELISA检测细胞培养上清液中心肌肌钙蛋I(cTnI)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量;腺病毒(Ad-mRFP-GFP-LC3)转染观察自噬体及自噬溶酶体数量;RT-qPCR检测LC3、P62 mRNA表达;Western blot检测自噬相关蛋白表达。结果与模型组相比,BCF预处理明显改善心肌细胞形态和细胞活力,降低cTnI及CK-MB含量,下调LC3、P62基因及Cathepsin D蛋白表达,上调P62蛋白表达,减少LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,抑制自噬(P<0.05 or P<0.01)。结论 BCF通过抑制自噬减轻心肌缺血/缺氧损伤。

基于PGC-1α-Sirt3通路探讨九龙藤总黄酮对氧糖剥夺诱导HT22细胞损伤的保护作用

目的:基于PGC-1α-Sirt3信号通路探讨九龙藤总黄酮(BCF)对氧糖剥夺(OGD)诱导小鼠海马神经元(HT22)细胞损伤的保护作用。方法:25,50,100,200,400,600μg·ml^-1的BCF预处理HT22细胞24 h后,OGD诱导HT22细胞损伤12 h,MTT法检测HT22细胞存活率,筛选BCF作用OGD诱导HT22细胞的最佳浓度。HT22细胞分为空白对照组、OGD组、OGD+BCF(200μg·ml^-1)组、OGD+BCF(200μg·ml^-1)组+过氧化物酶体增殖物受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α)抑制剂(SR-18292)组、OGD+SR-18292组。TUNEL法检测HT22细胞凋亡,试剂盒检测HT22细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,Rt-PCR和Western Blot分别检测HT22细胞PGC-1α、沉默信息调节因子3(Sirt3)mRNA和蛋白表达。结果:200μg·ml-1的BCF作用OGD诱导的HT22细胞存活率最大。OGD诱导后,HT22细胞凋亡指数、LDH漏出量和MDA含量升高(P<0.05),SOD和GSH-Px活力、PGC-1α和Sirt3 mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05)。BCF作用后,OGD诱导的HT22细胞凋亡指数、LDH漏出量和MDA含量降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活力、PGC-1α和Sirt3 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05)。而加入PGC-1α抑制剂SR-18292后,BCF对OGD损伤的HT22细胞各项检测指标均无显著影响(P>0.05)。结论:BCF通过激活PGC-1α-Sirt3信号通路发挥对OGD诱导损伤的HT22细胞的保护作用。

微波消解-ICP-MS法同时测定壮药九龙藤中6种重金属元素的含量

目的:建立一种同时测定九龙藤药材中铬、铜、砷、镉、汞、铅元素含量的方法。方法:样品通过硝酸-过氧化氢溶样,微波消解法处理,选取锗、铑、铟、铼作为内标元素,采用电感耦合等离子体质谱法同时测定上述6种重金属元素的含量。结果:各元素标准曲线的相关系数为0.9999~1.0000,加标回收率为90.1%~98.9%,测定值的相对标准偏差(RSD)在2.39%~6.19%之间。结论:该方法快速、简便、重现性好、准确度高,可用于九龙藤中重金属元素含量分析测定研究,其测定结果可为九龙藤的质量标准提供参考。

九龙藤总黄酮对缺氧/复氧心肌损伤的作用

目的研究九龙藤总黄酮对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的影响及作用机制。方法建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,给予不同剂量九龙藤总黄酮(终质量浓度分别50、100、200 mg·L-1)预处理,倒置显微镜下观察心肌细胞形态学变化;酶联免疫法测定肿瘤坏死因子活性;免疫组化方法观察Bcl-2、Bax、NF-κB蛋白的表达;Annex v-FITC/PI双染法测定心肌细胞凋亡率。结果与模型组相比,九龙藤总黄酮预处理能减轻心肌细胞损伤,降低肿瘤坏死因子-α、诱导型一氧化氮合酶、维持内皮型一氧化氮合酶水平,上调Bcl-2、下调Bax、NF-κβ蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡(P<0.01或P<0.05)。结论九龙藤总黄酮对缺氧/复氧心肌损伤具有保护作用,其机制可能与调节诱导型一氧化氮合酶、核转录因子-κβ信号通路,上调Bcl-2、下调Bax和核转录因子-κB蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡有关。

正交试验优选九龙藤总黄酮纯化工艺

目的：优选D101型大孔树脂纯化九龙藤总黄酮的工艺条件,为该成分的工业制剂开发提供参考。方法：以总黄酮纯度及回收率为评价指标,在单因素试验基础上,采用正交试验考察上样液质量浓度、洗脱剂浓度、洗脱速度及上样液p H对九龙藤总黄酮大孔树脂纯化工艺的影响。采用UV测定黄芩苷含量,检测波长278.5 nm。结果：最佳纯化工艺为上样液质量浓度15.5 g·L^-1,上样液pH 2-3,最大上样量16.85 mg·g^-1,上样速度0.125 BV·h^-1,径高比1∶6,加60%乙醇4 BV以1 BV·h^-1洗脱。总黄酮纯度48.95%,回收率96.08%。结论：优选的纯化工艺稳定可行,有效提高了九龙藤总黄酮纯度及回收率,适用于九龙藤总黄酮的纯化。

九龙藤总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤后自由基代谢和细胞凋亡的影响

目的:研究九龙藤总黄酮(Bauhinia championii Benth flavones,BCF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤后自由基代谢及细胞凋亡的影响。方法:将实验动物随机分为6组:假手术组、心肌缺血再灌注模型组、九龙藤总黄酮(30、60、120和240mg/kg)预处理组、复方丹参滴丸(135mg/kg)阳性对照组,术前1周开始灌胃给药。测定各组大鼠血清中谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量以及总抗氧化能力(T-AOC);检测心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量;通过HE染色方法观察各组大鼠心肌组织病理学改变,并通过TUNEL染色观察细胞凋亡状况。结果:与模型对照组相比,九龙藤总黄酮(60、120和240mg/kg)预处理组大鼠血清中AST、CK、LDH活性显著降低,MDA含量显著升高,T-AOC显著升高;九龙藤总黄酮(60、120和240mg/kg)预处理组心肌组织中SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高、MDA含量显著降低;心肌组织病理性改变和细胞凋亡程度均显著较轻。其中以240mg/kg组各指标变化最显著。结论:九龙藤总黄酮能够有效增强抗氧化酶活性,提高自由基清除能力,改善组织病理学改变,抑制细胞凋亡,提示九龙藤总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有剂量依赖性的保护作用。

九龙藤总黄酮对过氧化氢诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 观察九龙藤总黄酮对过氧化氢（H2O2）诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用.方法分离SD大鼠乳鼠心肌细胞,培养72 h后随机分为空白对照组,模型组,九龙藤总黄酮高、中、低剂量组,舒血宁注射液组.除空白对照组外,其余各组细胞经H2O2（100μg/ml）处理.九龙藤总黄酮高、中、低剂量组给予含240、120、60μg/ml九龙藤总黄酮的培养液干预,舒血宁注射液组给予含100μg/ml舒血宁注射液的培养液,空白对照组和模型组给予普通培养基培养.干预6 h后,通过倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞存活率;检测各组细胞培养液中天冬氨酸转氨酶（AST）、磷酸肌酸激酶（CPK）、乳酸脱氢酶（LDH）水平;测定各组细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）水平;通过流式细胞术测定细胞凋亡率,并通过Western blot方法检测心肌细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）表达.结果与模型组比较,九龙藤总黄酮中、高剂量组心肌细胞培养液中AST[（28.8±6.1）U/ml、（24.5±5.3）U/ml比（36.2± 6.7）U/ml]、CPK[（1.8±0.4）U/ml、（1.5±0.3）U/ml 比（2.5±0.4）U/ml]、LDH[（805.2±160.9）U/L、（671.5± 128.7）U/L比（916.5±168.4）U/L]水平降低（P〈0.05或P〈0.01）;心肌细胞中SOD[（84.8±17.4）U/mg、（95.3±18.2）U/mg比（55.7±13.1）U/mg]、CAT[（23.4±3.1）U/mg、（26.3±3.5）U/mg比（15.2±3.0）U/mg]水平升高（P〈0.05 或 P〈0.01）,MDA[（8.1±1.7）nmol/mg、（6.8±1.5）nmol/mg 比（11.1±2.3）nmol/mg]水平降低（P〈0.05或P〈0.01）,caspase-3[（1.64±0.16）、（1.30±0.12）比（2.06±0.25）]表达、细胞凋亡率[（24.2±5.5）%、（13.4±3.9）%比（51.2±9.1）%]显著降低（P〈0.05或P〈0.01）;九龙藤总黄酮高剂量组细胞中 GSH-Px[（3.6±0.9）U/mg 比（2.4±0.7）U/mg]活性显著升高（P〈0.05）.结论 九龙藤总黄酮可有效改善 H2O2诱导氧化应激损伤乳鼠心肌细胞形态、提高细胞存活率、改善抗氧化酶活性、下调 caspase-3表达、降低细胞凋亡率,对H2O2诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤具有剂量依赖性的保护作用.

九龙藤的化学成分及药理作用研究现状

九龙藤(Bauhinina championii),为豆科羊蹄甲属植物龙须藤的干燥藤茎。九龙藤含有黄酮类等多种化学成分,其药理作用主要体现在镇痛抗炎、心肌保护、抗凝血等方面。在此本文对其主要化学成分和药理作用进行综述,为九龙藤进一步研究开发及合理应用提供参考。

九龙藤总黄酮通过lncRNA MIAT调控自噬对大鼠急性心肌梗死的影响

目的探讨九龙藤总黄酮(BCF)通过lncRNA心肌梗死相关转录本(MIAT)对大鼠急性心肌梗死(AMI)的作用及机制。方法随机选取雄性SD大鼠,分为sham组、AMI组、BCF组,除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法制备大鼠心肌缺血模型,缺血24 h后进行lnc RNA基因检测;设计并合成lnc RNA MIAT si-RNA,将雄性SD大鼠分为si-NC组、siMIAT组、BCF+si-NC组和BCF+si-MIAT组,按实验分组制备大鼠心肌缺血模型,随后HE染色观察心脏组织病理学变化,ELISA实验检测血清心肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)含量,透射电镜观察自噬小体数量,RT-qPCR和Western blot检测lncRNA MIAT、Beclin1、Cathepsin D与LC3表达。结果BCF+AMI组MIAT表达低于AMI组(P<0.05)。HE染色结果显示,BCF+siMIAT组心肌细胞形态较BCF+si-NC组进一步改善;AMI+si-MIAT组、AMI+BCF+si-NC组和AMI+BCF+si-MIAT血清cTn-Ⅰ含量低于AMI+si-NC组(P<0.05),且AMI+BCF+si-MIAT组血清cTn-Ⅰ含量低于AMI+BCF+si-NC组(P<0.05);BCF+si-MIAT组自噬小体数量低于BCF+si-NC组(P<0.05);AMI+si-NC组Beclin1、Cathepsin D、LC3表达及蛋白高于AMI+si-MIAT组、AMI+BCF+si-NC组、AMI+BCF+si-MIAT组(P<0.05);而AMI+BCF+si-MIAT组Beclin1、Cathepsin D、LC3表达低于AMI+BCF+si-NC组(P<0.05)。结论BCF可能通过MIAT抑制自噬抗AMI。