大肠杆菌脂多糖诱导人乳牙牙周膜干细胞炎症模型的建立

目的体外培养人乳牙牙周膜干细胞,建立符合实验设计需要的人乳牙根尖周炎细胞模型。方法采用酶解组织块法培养人乳牙牙周膜干细胞,连续梯度稀释法进行纯化,流式法鉴定细胞表面标记物,检测其多向诱导分化能力。在培养基中加入不同终浓度(0.1,0.075,0.05,0.025,0.01μg/ml)的大肠杆菌脂多糖,通过检测细胞活性及炎症因子表达,选择合适的大肠杆菌脂多糖浓度。结果酶解组织块法可获得成集落状生长的人乳牙牙周膜干细胞,流式鉴定高表达CD146、STRO-1、CD105、CD90、CD29,低表达CD45、CD34,细胞成骨、成脂诱导后分别对茜素红、油红O染色阳性。0.05μg/ml的大肠杆菌脂多糖不影响细胞增殖活性(P>0.05),能显著提高炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论0.05μg/ml的大肠杆菌脂多糖可作为诱导人乳牙牙周膜干细胞炎症模型的适宜浓度。

根吸收不同时期乳牙牙周膜干细胞通过NK细胞进行免疫调节作用的研究

目的探讨根吸收不同时期乳牙牙周膜干细胞(PDLSCs)通过自然杀伤细胞(NK)发挥破骨分化的调节作用。方法酶消化法和有限稀释法分离培养根吸收不同时期乳牙和恒牙与PDLSCs与NK细胞、RAW264.7细胞进行共培养。采用实时定量PCR和ELISA,检测各组共培养体系中NK细胞IFN-γ表达及其差异,以及阻断转化生长因子-β(TGF-β)后IFN-γ的表达及差异。采用实时定量PCR和Western blot检测NK细胞、RAW264.7细胞共培养体系中RAW264.7细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)表达。结果根吸收中期组(B)NK细胞干扰素γ(IFN-γ)表达明显下降(P<0.05)。阻断TGF-β后,IFN-γ表达明显升高(P<0.05)。外源性加入NK细胞与PDLSCs共培养上清液后,RAW264.7细胞RANKL表达降低,OPG表达升高,RANKL/OPG比值降低。结论在乳牙生理性根吸收过程中,PDLSCs通过分泌TGF-β等细胞因子对NK细胞发挥免疫抑制作用,影响破骨分化进程。