乳糖化-去甲斑蝥素抗肿瘤药效学及急性毒性试验研究

目的:观察乳糖化-去甲斑蝥素(Lac-NCTD)及其纳米粒(Lac-NCTD-NPs)的体内外抗肿瘤的作用,并进行急性毒性考察。方法:采用MTT法考察Lac-NCTD及Lac-NCTD-NPs对肿瘤细胞株HepG2、SMMC-7721和SGC-7901的细胞毒作用和半乳糖化小牛血清(Gal-FBS)的竞争性抑制作用,并建立H22肝癌细胞小鼠荷瘤模型考察药物在体内抗肿瘤活性;通过急性毒性实验计算Lac-NCTD腹腔给药的最大耐受量(MTD)。结果:HepG2、SMMC-7721细胞培养48h的体外细胞毒结果显示:Lac-NCTD-NPs的最强,其次是Lac-NCTD,且均能显著被Gal-FBS抑制;对SGC-7901,Lac-NCTD-NPs和Lac-NCTD的细胞毒作用并不比去甲斑蝥素(NCTD)强,且不受Gal-FBS的影响;体内抗肿瘤实验表明Lac-NCTD能有效地抑制H22肿瘤的生长。Lac-NCTD单次给药时最大耐受量MTD>20g/kg,多次给药时MTD>30g/kg,毒性远小于NCTD。结论:Lac-NCTD是毒性较小的安全的新型抗肿瘤药物。

乳糖化-去甲斑蝥素纳米粒在大鼠体内的药动学研究

目的:研究乳糖化-去甲斑蝥素(lactosyl-norcantharidin,Lac-NCTD)水溶液及纳米粒2种制剂在大鼠体内药动学特征。方法:建立测定大鼠血浆中Lac-NCTD的HPLC检测法,并用3P97软件进行药动学拟合。结果:Lac-NCTD能与血浆中其他成分较好分离,在0.1～100μg/mL范围内线性关系良好。与Lac-NCTD水溶液相比,Lac-NCTD纳米粒的AUC及t1/2β显著增加,分别为Lac-NCTD水溶液的8.96倍和1.68倍,清除率显著降低(P<0.01)。结论:与水溶液相比,Lac-NCTD制备成纳米粒制剂后能显著改变药物在大鼠体内的药动学特征,延长了药物在体内的循环时间,有利于更好地发挥抗肿瘤效果。

微柱离心-HPLC法测定半乳糖化去甲斑蝥素脂质体的包封率

采用SephadexG-50微柱离心法结合HPLC法测定了半乳糖化胆固醇配体修饰去甲斑蝥素脂质体(Gal-NCTD-Lips)的包封率,并进行质量评价。当离心力为1000 r/min,离心时间为1 min,Gal-NCTD-Lips上样量为0.2 mL时,微柱离心法能有效分离脂质体和游离药物。在所建立的色谱条件下,去甲斑蝥素在0.03~0.18 mg/mL范围内线性关系良好(r=0.9994),高、中、低三种浓度的加样回收率分别为98.5%、98.9%、97.9%,包封率为51.06%±2.65%(n=5)。3种浓度的凝胶微柱的加样回收率分别为101.8%、99.25%、101.1%,RSD分别为1.69%、1.95%、1.40%,结果显示该方法准确、快速,能用于Gal-NCTD-Lips包封率的测定。

肝靶向去甲斑蝥素修饰物的结构确证及急性毒性研究

目的对具有主动肝靶向性的去甲斑蝥素(NCTD)修饰物乳糖化-去甲斑蝥素(Lac-NCTD)的结构进行进一步的确证,同时对其进行小鼠腹腔注射给药的急性毒性研究。方法通过氢氢相关谱(1H-1HCOSY)和碳氢相关谱(13C-1HCOSY)进一步确证Lac-NCTD的结构,并以其能配制的最大浓度和最大给药体积对小鼠腹腔注射,测定一日内单次给药的最大耐受量(MTD)。结果1H-1HCOSY和13C-1HCOSY谱图表征了Lac-NCTD的结构,通过腹腔注射给药时,小鼠对Lac-NCTD的MTD大于4 g.kg-1,远大于人临床去甲斑蝥素的拟用量。结论新化合物Lac-NCTD结构确证,且安全性高,有望应用于临床。

去甲斑蝥素的药理作用机制及其在肾脏病领域中的应用前景研究进展

去甲斑蝥素(NCTD)是斑蝥素的重要衍生物,其毒性低,药理作用明确,无骨髓抑制等不良反应,在治疗癌症及疑难杂症方面具有独特疗效。近年有研究发现,NCTD可降低肾病大鼠尿蛋白水平,通过多种机制减轻肾间质纤维化,可能在治疗免疫相关性肾病及防治肾间质纤维化方面具有良好的应用价值。该文对NCTD的药理作用机制及其在肾脏病领域中的应用前景作一综述。

乳糖化-去甲斑蝥素及其纳米粒在Caco-2细胞模型中的跨膜转运机制

目的研究乳糖化-去甲斑蝥素(Lac-NCTD)及其壳聚糖纳米粒(Lac-NCTD-NPs)的细胞摄取、转运机制。方法采用Caco-2细胞单层模型研究Lac-NCTD和Lac-NCTD-NPs的摄取和跨膜转运,考察了时间、温度、pH值、药物质量浓度、吸收抑制剂和促进剂对药物跨膜吸收的影响,并比较两种剂型吸收过程的差异。结果 Lac-NCTD以主动转运为主要方式被细胞摄取和转运,少部分通过旁路转运。药物的摄取和时间呈正相关,与温度呈负相关。P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)抑制剂能增加Lac-NCTD的细胞摄取(P<0.05)。药物从基底侧(basolateral,BL)到肠腔侧(apical,AP)的渗透系数(Papp(BL→AP))大于Papp(AP→BL)。内吞抑制剂氧化苯砷对药物的转运无影响,旁路转运促进剂去氧胆酸钠能增加药物转运。结论 Lac-NCTD主要以主动转运方式被吸收,少部分通过旁路转运被Caco-2细胞摄取和转运,此过程受P-gp和MRP2外排蛋白的影响,且药物纳米粒的摄取和转运较其溶液均有增加。

乳糖化-去甲斑蝥素纳米粒的肝靶向抗癌活性研究

目的研究新型的乳糖化-去甲斑蝥素纳米粒(Lac-NCTD-NPs)的体内外抗癌活性。方法通过MTT法考察去甲斑蝥素(NCTD)、乳糖化-去甲斑蝥素(Lac-NCTD)及Lac-NCTD-NPs对肿瘤细胞株HepG2、SMMC-7721和SGC-7901的细胞毒作用和半乳糖化小牛血清(Gal-FBS)的竞争性抑制作用;采用HPLC法评价肝肿瘤细胞SMMC-7721对Lac-NCTD的摄取效果;通过H22荷瘤小鼠模型考察药物体内对肝癌的抑制作用。结果体外细胞毒试验结果显示,对HepG2和SMMC-7721细胞,培养48 h时Lac-NCTD-NPs的IC50最低,细胞毒作用最强,其次是Lac-NCTD,且均能显著地被Gal-FBS抑制;对SGC-7901细胞,Lac-NCTD-NPs和Lac-NCTD的细胞毒作用并不比NCTD强,且不受Gal-FBS的影响;培养12 h后SMMC-7721对Lac-NCTD的摄取量为3.89μg(7.02×10-3μmol,1×106个细胞);小鼠体内抑瘤实验结果显示Lac-NCTD-NPs中剂量的抑瘤率为63.9%,显著高于相同浓度的NCTD和Lac-NCTD。结论Lac-NCTD-NPs能有效地靶向于肝肿瘤组织,抑制肿瘤的生长,是一种强的具有体内外抗癌活性的新型肝靶向性制剂。

乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物及其pH敏感型脂质体的制备

目的:合成乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物,并制备其pH敏感型脂质体。方法:将乳糖化-去甲斑蝥素与磷脂聚合成药物磷脂复合物,并采用FT-IR、DSC和1H-NMR对其进行表征。逆向蒸发法制备药物磷脂复合物脂质体;利用羧甲基壳聚糖与脂质体表面的静电吸附作用,使羧甲基壳聚糖吸附在脂质体表面,制备乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物pH敏感型脂质体;考察了药物与磷脂的复合率,磷脂复合物脂质体的包封率,粒径大小和分布,以及体外释药特性。结果:药物磷脂复合率为(97.2±2.01)%,磷脂复合物脂质体的平均包封率为(70.00±1.30)%,平均粒径为(47.18±4.16)nm,粒径跨距为(0.70±0.07),电镜显示其形态圆整,体外释药符合Weibull方程。结论:乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合率高,制成的pH敏感型脂质体性质稳定,且具有缓释特性。

乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物pH敏感型脂质体肝靶向抗肿瘤活性研究

目的考察乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物pH敏感型脂质体(pH-LPC-lips)的体内外抑瘤作用,及其在小鼠体内的肝脏靶向性。方法以空白脂质体(blank-lips、blank-pH-lips)为对照,MTT法考察乳糖化-去甲斑蝥素(Lac-NCTD)和2种载药脂质体(Lac-lips、pH-LPC-lips)对人体肝癌细胞HepG2的细胞毒作用。采用HPLC法评价HepG2细胞对Lac-NCTD及其脂质体的摄取过程。建立H22肝癌细胞小鼠荷瘤模型考察脂质体在体内抗肿瘤活性。用Cy-7标记羧甲基壳聚糖(CMCT)制备Cy-7荧光标记的pH-LPC-lips,通过小动物活体成像仪,采集荧光信号,考察该脂质体在小鼠体内的靶向性。结果与Lac-NCTD、Lac-lips相比,pH-LPC-lips在体外对肿瘤细胞HepG2的亲和性更好,细胞毒作用更显著。体内抑瘤实验表明,pH-LPC-lips可以更好地抑制H22肿瘤的生长。pH-LPC-lips可以靶向聚积在小鼠肝脏和肿瘤部位,有很好的靶向作用,从而减小药物毒副作用,提高抗肿瘤效果。结论优化的pH-LPC-lips可以在呈弱酸性的肿瘤部位主动释药,并对肝脏和肿瘤部位具有靶向性,从而表现出更好的抗肿瘤作用。

半乳糖化胆固醇配体修饰去甲斑蝥素脂质体的制备及表征

以半乳糖和胆固醇氯甲酸酯为底物,通过化学反应合成半乳糖-胆固醇偶联物,并经1H NMR、13C NMR和HRMS确证了产物的结构。以此为配体,采用薄膜超声分散法制备半乳糖化胆固醇配体修饰的去甲斑蝥素脂质体,通过单因素试验和正交设计优化处方。结果所得优化工艺为:磷脂与半乳糖化胆固醇的质量比3∶1,药脂比1∶12,溶胀时间30 min。优化脂质体的包封率为(50.75±1.61)%,载药量为(7.85±2.16)%,平均粒径为(128.4±5.7)nm,平均ζ电位(-22.78±1.80)mV;与去甲斑蝥素溶液相比,优化脂质体的体外释放呈现出一定的缓释特征。

肝靶向去甲斑蝥素修饰物的合成及其纳米粒的制备

目的合成乳糖化-去甲斑蝥素作为主动肝靶向性修饰物,并将其制成纳米粒。方法利用乙二胺为连接臂合成乳糖化-去甲斑蝥素修饰物,并考察其相关理化性质;采用离子诱导法制备乳糖化-去甲斑蝥素壳聚糖纳米粒,以粒径分布、包封率、载药量为综合指标,正交设计优化载药纳米粒的制备工艺,并考察其体外释放特性。结果乳糖化-去甲斑蝥素是一种具有良好水溶性的多羟基化合物,其合成产率为68.35%;经优化工艺制备的乳糖化-去甲斑蝥素的纳米粒的平均粒径(149.46±1.79)nm,包封率(80.29±0.56)%,载药量(9.58±0.09)%,其体外释药遵循Higuchi方程。结论乳糖化-去甲斑蝥素合成简单,产率高,其纳米粒体外释放具有良好的缓释特性。