半乳糖化温敏水凝胶的制备及其作为原代肝细胞培养载体的研究

文章在前期工作基础之上,进一步研究半乳糖糖化温敏水凝胶P(NIPAAm-co-GAC)的生物相容性。通过原位胶原酶灌注法分离得到大鼠正常肝细胞,将其接种于P(NIPAAm-co-GAC)水凝胶表面,在未加任何生长因子的前提下研究肝细胞的增殖行为及细胞功能的表达情况,MTT实验结果表明含有肝细胞特异性吸附配体的P(NIPAAm-co-GAC)(r=0.4)水凝胶能够促进细胞粘附增殖,细胞受损伤程度低,细胞膜保持较好的完整性(LDH漏出量少)并降低了细胞的炎症反应(ALT、AST、ALT/AST比值低),不会引起细胞坏死,并且肝细胞能保持其合成分泌白蛋白、尿素的功能。研究正常肝细胞比研究肝肿瘤细胞或其它细胞系细胞具有更大的临床价值,为其进一步应用于生物人工肝领域提供充分的理论依据。

温敏性半乳糖基化壳聚糖水凝胶的制备及其对HL-7702细胞增殖行为影响的研究

以壳聚糖(CS)为原料,在1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳-二亚胺盐酸盐(EDC.HCL)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的活化作用下,合成了半乳糖基化壳聚糖(GC)单体,并与N-异丙基丙烯酰胺(NIPAAm)反应,制备了温敏性半乳糖基化壳聚糖N-异丙基丙烯酰胺共聚水凝胶(Gal-CS-g-PNIPAAm).通过红外光谱(FTIR)、光电子能谱(XPS)和扫描电子显微镜(SEM)等测试方法对其成分和结构进行了表征,并对其溶胀率和表面亲疏水性进行了研究.在Gal-CS-g-PNIPAAm凝胶表面培养人正常肝细胞系(HL-7702),研究其生长、脱附及转载(再增殖)行为.结果表明Gal-CS-g-PNIPAAm水凝胶具有良好的温度响应性和生物相容性,与PNIPAAm水凝胶相比,Gal-CS-g-PNIPAAm凝胶表面更有利于HL-7702细胞增殖.将温度降低至临界温度(LCST,32.5℃)以下,细胞可以从凝胶表面自发脱附,与酶消化脱附相比,细胞损伤更少.Gal-CS-g-PNIPAAm凝胶表面脱附的细胞比PNIPAAm凝胶表面脱附的细胞活性更高,表明PNIPAAm水凝胶引入GC单体后,凝胶的生物相容性得到改善,且脱附后细胞的增殖活力明显增加.