家蚕乳糖酶-根皮苷水解酶基因BmLPH014192的表达和序列选择性剪接分析

乳糖酶-根皮苷水解酶(lactase-phlorizin hydrolase,LPH)是肠组织上皮细胞微绒膜上的一种糖蛋白,对乳糖和根皮苷有水解活性。鉴定了家蚕基因组中的一个LPH基因,命名为BmLPH014192。该基因CDS长1 305 bp,编码434个氨基酸,预测蛋白质分子质量为50.8 kD,等电点(pI)为5.35。将该基因的cDNA与家蚕基因组序列比对,显示其具有7个外显子,外显子/内含子边界处均符合GT-AG规则。将BmLPH014192与哺乳动物人、褐鼠、家兔和昆虫黑腹果蝇、冈比亚按蚊、二化螟、佛罗里达弓背蚁、大红斑蝶等的LPH进行氨基酸序列比对,相似度都在60%左右;聚类分析中BmLPH014192与昆虫类LPH聚在一起。芯片数据分析结果表明BmLPH014192在家蚕5龄第3天幼虫的9个组织中,只在中肠中有表达,并且表达量很高。在绿茧品种大造和白茧品种19-710幼虫的中肠中扩增到的特异性条带其长度分别为1 000 bp和750 bp,存在序列选择性剪接;在其它白茧品种的中肠中没有扩增出特异性条带。推测BmLPH014192的特殊表达方式可能与其在不同家蚕品种中肠组织中的特异性功能有关。

大鼠肠道水解酶对射干黄酮苷吸收特征的影响

目的:研究大鼠肠道水解酶(LPH酶)对射干黄酮苷中射干苷及野鸢尾苷大鼠肠道吸收特征的影响。方法:应用大鼠在体肠灌流模型,采用高效液相法测定射干苷及野鸢尾苷含量,比较加入LPH酶抑制剂葡糖酸内酯前后,射干苷、野鸢尾苷肠道吸收率变化。结果:与未加入抑制剂前比较,2个射干黄酮苷成分在大鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠的水解抑制率均有不同程度的变化,其中射干苷在4个肠段的水解抑制率分别为66%、52%、43%、38%;野鸢尾苷分别为51%、45%、26%、31%。结论:LPH酶抑制剂葡糖酸内酯能一定程度地抑制射干苷和野鸢尾苷的水解,提示大鼠肠黏膜上的LPH酶可能参与了射干中射干苷和野鸢尾苷在肠道的代谢过程。

根皮素与根皮苷对酪氨酸酶的抑制机制

目的研究根皮素与根皮苷对酪氨酸酶的抑制机制。方法采用紫外光谱法、高效液相色谱法、荧光光谱法和分子对接技术研究比较二者的单双酚酶活性,并从分子层面探索和比较二者的抑制机制。结果根皮素和根皮苷均具有单双酚酶活性抑制作用,单酚酶活性抑制能力源于二者的2,6-二羟基苯乙酮和2,4,6-三羟基苯基结构,导致双酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC 50)分别为169.36和707.14μmol·L-1;根皮素和根皮苷均是酪氨酸酶的底物,而根皮素与酪氨酸酶的亲和力更强;根皮素和根皮苷均能使酪氨酸酶的内在荧光发生猝灭;分子对接表明根皮素与酪氨酸酶结合能低于根皮苷。结论根皮苷的酪氨酸酶抑制活性比根皮素低,二者抑制机制相似。研究结果为根皮素和根皮苷的进一步开发利用提供了理论依据和数据支持。

大鼠肠道水解酶对淫羊藿黄酮苷的处置影响

目的研究大鼠肠道水解酶对淫羊藿所含黄酮成分淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C在肠道处置的影响。方法应用大鼠在体肠灌流模型,用高效液相法测定药物浓度,比较淫羊藿黄酮苷在加入肠道乳糖酶根皮苷水解酶(LPH酶)抑制剂葡糖酸内酯(gluconolactone)前后表观渗透系数的变化。结果加入抑制剂后,4个淫羊藿黄酮苷在大鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠的表观渗透系数都有不同程度的下降,其中淫羊藿苷在4个肠段的水解抑制率分别为:62%,50%,40%,46%;朝藿定A分别为:55%,26%,21%,14%;朝藿定B分别为:42%,40%,74%,22%;朝藿定C分别为:42%,40%,52%,35%。结论LPH酶抑制剂葡糖酸内酯能不同程度地抑制淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C在大鼠肠道的水解,说明大鼠肠黏膜上的LPH酶参与了淫羊藿苷、朝藿定A,B,C在肠道的代谢。

家蚕LPH基因的生物信息学分析及表达模式研究

[目的]对家蚕LPH基因进行系统的分析。[方法]以家蚕基因组数据和EST数据为基础,用比较基因组学方法从基因组层次系统地鉴定家蚕LPH基因,对基因的结构、染色体分布、基因进化以及与其他模式昆虫的LPH基因进行比较分析,并利用基因芯片数据对LPH基因在家蚕5龄3 d组织中的表达情况进行研究。[结果]家蚕LPH是一个基因家族,包含19个直向同源基因,分布于6条染色体上,系统发生树分析表明它们主要分成二大类群;基因芯片数据分析表明家蚕LPH基因具有不同的表达模式,推测可能具有不同的功能,其中绝大部分基因在中肠组织中有表达,推测其可能参与黄酮类物质在家蚕体内的转运途径。[结论]该研究为家蚕LPH自身功能的研究提供分子基础,更重要的是为研究其他昆虫的LPH基因提供参考。