催乳素对奶牛乳腺上皮细胞乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响

本试验旨在探讨催乳素对奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响。选取中国荷斯坦奶牛BMECs为试验材料,经纯化培养后,培养基中添加不同浓度催乳素[0（对照）、100、300、500和1 000 ng/m L],继续培养24 h。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞活力;利用试剂盒检测胞内甘油三酯的含量;采用实时定量PCR法检测乳脂和乳蛋白合成相关基因的表达。结果表明：1）催乳素浓度为100、300 ng/m L时,BMECs相对增殖率显著高于对照组与其他试验组（P〈0.05）。2）与对照组相比,300 ng/m L催乳素能够显著提高BM ECs乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、二酰甘油酰基转移酶（DG AT）、脂肪酸结合蛋白3（FABP3）基因表达量及甘油三酯的含量（P〈0.05）,硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）基因表达量有增加的趋势。3）与对照组相比,100、300 ng/m L催乳素能够显著提高哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（m TOR）、催乳素受体（PRLR）基因表达量（P〈0.05）;300 ng/m L催乳素能显著提高αS1酪蛋白（CSN1 S1）基因表达量（P〈0.05）。综上所述,100~300 ng/m L的催乳素对BM ECs乳脂和乳蛋白合成有较好的促进效果。

维生素A对奶牛乳腺上皮细胞乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响

本试验旨在研究维生素A对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响。采用单因素完全随机试验设计,将第3代BMECs随机分为6个处理,每个处理6个重复,使用无血清培养基饥饿24 h后,采用维生素A浓度分别为0(对照)、0.05、0.10、0.20、1.00和2.00μg/m L的培养基培养24 h。结果表明:与对照组相比,1.00、2.00μg/m L维生素A可以显著提高相对增殖率以及甘油三酯(TG)含量(P<0.05);维生素A能显著提高乳脂合成相关基因过氧化酶体增殖物激活受体γ(PPARG,0.05、0.10、0.20、1.00和2.00μg/m L)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1,0.05、0.10μg/m L)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD,0.05、0.10μg/m L)的基因表达量(P<0.05);维生素A也能显著提高乳蛋白合成相关基因信号转导转录激活因子5(STAT5,0.20μg/m L)、αs1-酪蛋白(CSN1S1,0.05和0.10μg/m L)、κ-酪蛋白(CSN3,0.10μg/m L)基因表达量(P<0.05);维生素A也能显著提高乳脂合成相关酶乙酰辅酶A羧化酶(ACACA)活性(0.05、0.10、0.20和1.00μg/m L)(P<0.05)。结果提示,维生素A对BM ECs内乳脂、乳蛋白合成相关基因表达的促进效果呈浓度依赖性,以0.10μg/m L维生素A效果较好。

改良根治术与保乳手术治疗早期乳腺癌的疗效及对中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白和基质金属蛋白酶-9影响对比

目的对比改良根治术与保乳手术治疗早期乳腺癌(EBC)的疗效及对中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响。方法以2014年1月至2017年4月河北省秦皇岛市第一医院收治的145例EBC患者作为研究对象,按照不同的治疗方式分为保乳手术组70例与改良根治术组75例。两组术后均随访1、5年。对比两组患者的手术指标及手术前后血清NGAL、MMP-9水平变化情况,采用创伤后应激障碍问卷(PCL-C)评估创伤后应激障碍(PTSD),比较两组患者乳房美容效果满意度及术后1、5年的局部复发率、生存率、远处转移率。结果保乳手术组患者术中出血量少于改良根治术组,手术时间、切口长度、住院时间短于改良根治术组(P<0.05);两组的清除淋巴数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术前两组患者的血清NGAL、MMP-9水平比较差异无统计学意义,术后3、5 d时,保乳手术组的NGAL、MMP-9水平均低于术前及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。出院时,保乳手术组的PTSD阳性率、PCL-C总评分均低于改良根治术组,乳房美容效果满意度高于改良根治术组(P<0.05)。两组患者术后1、5年的局部复发率、总生存率、远处转移率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论与改良根治术相比,保乳手术改善早期乳腺癌患者的效果明显,可改善患者的手术情况,降低创伤后应激反应,提高患者的乳房美容效果满意度,且对近远期患者的预后并无不利影响,同时并未增加外周血NGAL、MMP-9的表达,安全性较高。

沉默信息调节因子2相关酶1对乳脂、乳蛋白合成和乳腺炎的调节及其可能机制

沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)是Sirtuins家族成员,可以对染色质和非组蛋白进行去乙酰化,在乳脂、乳蛋白合成以及乳腺炎的调控中发挥重要作用。本文主要综述了SIRT1通过AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、蛋白酪氨酸激酶-2(JAK2)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和核转录因子-κB(NF-κB)等信号通路调控奶牛乳脂、乳蛋白合成以及乳腺炎的分子机制,以期为奶牛在乳脂、乳蛋白合成以及乳腺炎的靶向治疗提供理论支撑。

牛科物种甲状腺激素应答(THRSP)基因在乳脂合成中的功能作用研究进展

甲状腺激素应答(Thyriod hormone responsive,THRSP)基因参与动物从头脂肪酸的合成,主要在肝脏、乳腺和脂肪组织中表达,在转录水平上受到与脂代谢相关因子的诱导并作为转录激活剂调节下游脂肪合成酶基因的表达。本文对牛科物种THRSP基因的结构和功能、转录调控机制和调节脂肪酸合成的生物学路径及该基因多态性对泌乳性状的影响等方面的研究进展进行了综述。

油酸对奶牛乳腺上皮细胞内甘油三酯含量和乳脂肪合成相关基因表达的影响

本试验旨在探讨油酸对奶牛乳腺上皮细胞内甘油三酯含量和乳脂肪合成相关基因表达的影响。选取中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)为试验材料,经纯化培养后,培养基中添加0(对照)、50、100、200、400μmol/L油酸,继续培养24 h。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活力;利用试剂盒检测胞内甘油三酯的含量;采用实时定量PCR法检测乳脂肪合成相关基因的表达。结果表明:油酸浓度为200、400μmol/L时,BMECs相对增殖率显著低于对照组与其他试验组(P<0.05);添加100、200μmol/L的油酸促进了胞内甘油三酯的合成(P<0.05);添加油酸上调了二酰甘油酰基转移酶(DGAT)基因表达量,50μmol/L的油酸显著上调了乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARGγ)基因表达量(P<0.05),100~400μmol/L的油酸显著抑制了硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)、脂肪酸结合蛋白3(FABP3)、固醇调节原件结合蛋白1(SREBP-1)基因表达量。综上所述,50~100μmol/L的油酸对BMECs乳脂肪合成具有较好的促进效果。

嗜乳脂蛋白基因外显子7多态性及其与奶牛产乳性状的相关性研究

采用PCR-RFLP对奶牛嗜乳脂蛋白基因的第7外显子进行了扩增,并用HaeⅢ进行酶切,产生了2个等位基因A(331+170 bp)和B(295+201 bp)。分析不同基因型对个体乳脂率、乳蛋白、乳糖、干物质和305 d产奶成年当量等生产性能的影响。结果表明:AA基因型和A等位基因的频率分布在所试的4个群体中都较高(>60%),AA基因型奶牛的乳脂率、乳蛋白含量显著高于BB基因型(P<0.05),同时乳固形物含量和乳糖的含量也高于BB基因型,但不存在显著性差异;另外,AA基因型奶牛的305 d产奶成年当量则显著低于BB基因型(P<0.05)。对305 d成年当量、乳脂率、乳蛋白质含量、乳干物质含量和乳糖含量A基因的加性效应分别为-345.34 kg/胎次、0.07%、0.09%、0.09%和0.07%,A等位基因的显性效应分别为187.72 kg/胎次、0.07%、0.08%、0.04%和0.04%。

β-羟丁酸对奶牛乳腺上皮细胞内乳脂肪合成及其相关基因相对表达量的影响

本试验主要研究了不同浓度的β-羟丁酸（ BHBA）对奶牛乳腺上皮细胞（ BMECs）活力、甘油三酯（ TAG）含量、脂滴形成以及乳脂肪合成相关基因转录水平的影响。将传至第3代的BMECs悬液（1×10^5个/孔）接种于细胞培养板上,每孔加入含10%胎牛血清（ FBS）的DMEM/F12培养液,于37℃的5%二氧化碳（CO2）培养箱培养48 h。再将培养48 h的BMECs随机分配到6个组,各组向培养孔中加入含不同浓度BHBA的DMEM/F12培养液,培养液中的FBS用1 g/L无脂肪酸的牛血清白蛋白（ BSA）代替,并使反应体系中BHBA的最终浓度分别为0（对照）、0.58、1.16、2.32、4.64和9.28 mmol/L。置于37℃的5%CO2培养箱继续培养48 h。试验结果显示：随着BHBA浓度的增加,BMECs活力[（相对增殖率（ RGR）]呈显著的二次曲线增加（P=0.041）,其中BMECs活力以0.58～4.64 mmol/L BHBA组较高,9.28 mmol/L BHBA组较低；低浓度（0.58～2.32 mmol/L）的 BHBA 可促进 BMECs 内脂滴的形成,而较高浓度（4.64～9.28 mmol/L）的BHBA对脂滴形成的促进作用减弱；BHBA与TAG含量及乳脂肪合成相关基因脂肪酸合成酶（ FASN ）、乙酰辅酶 A 羧化酶α（ ACACA ）、硬脂酰辅酶 A 去饱和酶（ SCD）、脂肪酸结合蛋白3（ FABP3）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（ PPARG）和分化抗原簇36（CD36）的相对表达量均无显著的一次线性或二次曲线关系（P〉0.05）。综上,BHBA 对BMECs活力的促进作用呈显著的二次曲线增加,即BHBA对BMECs活力呈显著浓度依赖关系；BHBA对细胞内乳脂肪的合成有提高的趋势。

影响奶牛乳蛋白合成的主要营养因素分析

乳蛋白是奶牛乳汁的重要组成成分,它主要通过乳腺组织吸收血液中游离的氨基酸及小分子蛋白质来合成。乳蛋白的合成会受到日粮营养水平、胃肠道微生物、乳腺血流量及血中氨基酸浓度、血中可利用氨基酸比例、氨基酸载体转运效率等多种因素的影响。文章主要从乳蛋白的合成途径、影响乳蛋白合成的因素、乳蛋白合成相关基因表达及乳蛋白合成信号通路的调控四个方面进行阐述,以期通过改善乳腺对氨基酸的有效利用,为提高乳蛋白合成效率、改善乳品质提供科学依据。

乳铁蛋白肽基因的合成及其在动物乳腺中的表达

根据已发表的编码牛乳铁蛋白肽（LfcinB）25个氨基酸的mRNA序列，设计了4条用于合成牛乳铁蛋白肽全基因的引物，用重叠延伸PCR法合成149bp的牛乳铁蛋白肽基因（包括牛乳铁蛋白信号肽序列、上下游酶切位点和终止密码子），并将此基因克隆到载体pI-B，获得了乳腺特异性表达质粒pI-BL，该质粒经生理盐水稀释后直接注入稳定泌乳期奶山羊和奶牛乳腺组织（注射量为400μg），以琼脂板溶圈法检测奶样抑菌活性。结果显示，注射后3～48h，奶样有明显抑菌活性，其中3～9h抑菌活性最高。

奶牛乳铁蛋白基因启动子区PCR-RFLP分析与乳房炎的相关性

采用CMT方法检测奶牛的乳房炎发病情况.筛选 90头分别设为对照组(健康奶牛)、隐性乳房炎组 (试验组Ⅰ )和临床乳房炎组(试验组Ⅱ),每组 30头.检测每头奶牛的NAGase活性,并用限制性片段长度多态性 (RFLP)分析技术,检测乳铁蛋白(Lf)基因启动子区域的RFLP多态性.结果表明:不同组别的奶牛之间NAGase活性差异显著 (P<0. 01),且Lf基因启动子区域存在RFLP多态性,说明该多态性与乳房炎存在一定关系,可能是奶牛乳房炎的一个分子标记.

固醇调控元件结合蛋白及其对乳脂合成的调节作用

固醇调控元件结合蛋白(SREBPs)广泛分布于哺乳动物的肝脏、白色脂肪组织、肾上腺、乳腺组织等处,与乳脂的合成关系密切,它可以调控脂类合成相关酶基因的表达,通过与目的酶基因启动子中的固醇调节元件(SRE)结合激活目的基因转录,从而调控脂类合成。SREBPs在自身合成过程中会在转录、翻译及翻译后水平上受到多重因素的调控。本文从SREBPs的结构功能、组织分布、合成调节及其与乳脂合成的关系等方面进行了综述。

乳脂合成前体对奶牛乳腺上皮细胞亚细胞蛋白质组学影响

向奶牛乳腺上皮细胞中添加β-羟基丁酸钠,利用双向电泳技术进行细胞亚细胞蛋白质组学方面的研究。结果表明,β-羟基丁酸钠对奶牛乳腺上皮细胞亚细胞蛋白表达有显著影响。Imagemaster6.0软件分析出4个表达上调的蛋白点,鉴定分别是ENO1、α-glucosidase、plastin3和ARPC2。通过实时荧光PCR检测以上蛋白在mRNA水平的表达差异,结果均有不同程度的提高,其中以ENO1、α-glucosidase及Arpc2提高显著(P<0.05)。研究所筛选出的蛋白,将有助于进一步揭示奶牛乳腺上皮细胞增殖和泌乳机制。

trans-10,cis-12共轭亚油酸抑制牛乳脂的合成及乳脂合成相关基因的表达

奶牛日粮添加共轭亚油酸 (CL A)抑制乳脂合成 ,已经证明这是 trans- 10 ,cis- 12 CL A异构体的特殊功能。本试验主要探讨 trans- 10 ,cis- 12 - CL A抑制乳脂合成的机制。试验动物为 4头泌乳晚期的经产荷斯坦奶牛 ,采用 2× 2交叉试验设计。每种处理包括 5 d真胃灌注脱脂乳或将 trans-10 ,cis- 12 - CL A乳化于其中的脱脂乳。灌注的第 5 d进行乳腺活体切片检测 ,一部分乳腺组织用于分析乙酰辅酶 A羧化酶、脂肪酸合成酶、Δ9-去饱和酶、脂蛋白脂酶、脂肪酸结合蛋白、磷酸甘油酰基转移酶的 m RNA表达情况。另一部分乳腺组织用于脂肪合成能力的评定。灌注 tuans- 10 ,cis- 12 - CL A使乳脂肪含量及产量分别降低 4 2 %和 4 8% ,同时乳中 trans-10 ,cis- 12 - CL A含量从低于 0 .1m g/ g增加至 4 .9mg/ g。 C4～ C1 6 脂肪酸的减少量占乳脂总减少量的 6 3%。通过对几种特定脂肪酸双键的分析结果表明 ,trans- 10 ,cis- 12 - CL A对脂肪酸组分变化的另外一种影响与 Δ9-去饱和酶的降低一致。通过与放射性标记乙酸一起进行的乳腺移植培养发现 ,给奶牛饲喂 trans- 10 ,cis- 12 - CL A后 ,脂肪合成能力降低 82 % ,乙酸氧化为 CO2 减少 6 1% ;同时 ,灌注 trans- 10 ,cis- 12 - CL A还使上述几种酶的 m

植物化的猪α-乳清蛋白基因人工合成

根据猪α-乳清蛋白基因 c DNA序列设计了多对特异性引物 ,采用循环 PCR方法人工合成了植物化的猪α-乳清蛋白基因编码区 (398bp)并对该 PCR产物进行测序。DNA序列测定结果表明 ,采用循环 PCR法扩增的产物是预期的猪 α-乳清蛋白基因编码区 ,该植物化的猪 α-乳清蛋白基因编码区可以用于植物转化 ,为猪 α-乳清蛋白基因转基因植物研究和在转基因植物中进行动物基因表达研究奠定了基础。

牦牛乳脂合成和转运相关基因哺乳期表达规律研究

为了解雌性牦牛乳腺中乳脂代谢与转运等现象的分子机理特征。该文提出实验方法和实验步骤,利用统计学分析研究方法,对牦牛乳脂合成和转运相关基因哺乳期表达规律进行系统性研究。结果表明,牦牛的乳脂代谢和转运基因在哺乳期的表达谱与常见奶牛具有较大差异。

牦牛乳脂合成关键酶基因全泌乳期的表达研究

试验以川西北高原的乳用麦洼牦牛为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术对麦洼牦牛乳腺组织中的氨酰-CoA合成酶长链家族成员1(acyl-CoA synthetase long-chain family member 1,ACSL1)、氨酰-CoA合成酶短链家族成员1、2(acyl-CoA synthetase short-chain family member 1、2,ACSS1、ACSS2)和脂肪酸结合蛋白家族成员3(fatty acid binding protein 3,FABP3)等乳脂代谢相关基因全泌乳期转录水平进行了分析。结果表明,4个基因在整个泌乳期均持续表达;分娩后30d(30d)ACSL1、ACSS1、ACSS2和FABP3基因的转录水平均比分娩前15d(-15d)显著增加(P<0.05),且达到最大值后逐步下降。产乳量测定结果表明,麦洼牦牛产乳量在120d达到峰值,比乳脂代谢相关基因峰值表达水平晚90d,其后产乳量逐步下降。结果表明,牦牛脂肪合成关键酶基因在全泌乳期的表达规律可能与牦牛对青藏高原生存环境的适应有关。

荷斯坦牛乳脂率、乳蛋白率变化规律及其相关性分析

为探讨原料乳中乳脂率、乳蛋白率的影响因素及其之间的相关关系,本文收集新疆地区呼图壁种牛场牧一场和牧三场、天山畜牧生物股份有限公司牛场、沙湾金牛场、西部牧业共5个牧场4 727头次荷斯坦奶牛的生产性能记录,采用SAS(8.1)软件分析不同牧场、年度、季节、胎次对乳脂率和乳蛋白率的影响,并运用SPSS16.0软件进行相关性分析。结果表明:牧场、年度、季节、胎次均对乳脂率和乳蛋白率有极显著影响(P<0.01)。相关性分析结果表明,乳脂率与乳蛋白率呈极显著正相关,相关系数为0.11。通过分析牧场、年度、季节、胎次对乳脂率、乳蛋白率的影响及相关关系,加深影响乳成分因素的认识,提示在生产中要做好饲养管理工作,并根据季节变化、奶牛胎次的增加,结合奶牛营养需求,采取具体措施调控影响乳成分的因素,从而提高原料乳质量。

黄花蒿乙醇提取物对脂多糖诱导损伤奶牛乳腺细胞中乳蛋白合成的影响

本试验旨在通过奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)体外培养技术,研究黄花蒿乙醇提取物(AAE)对脂多糖(LPS)诱导损伤BMECs活力以及乳蛋白合成相关基因表达的影响。试验分为5组,对照组:BMECs用基础培养基常规培养15 h;模型组:BMECs用基础培养基常规培养3 h+10μg/mL LPS处理12 h;AAE+LPS组:BMECs分别用含3、6、12μg/mL AAE的基础培养基培养3 h+10μg/mL LPS处理12 h。结果表明:1)与对照组相比,模型组的BMECs活力显著降低(P<0.05)。与模型组相比,6和12μg/mL AAE组的BMECs活力显著增加(P<0.05)。2)与模型组相比,12μg/mL AAE组总蛋白含量显著增加(P<0.05),6、12μg/mL AAE组β-酪蛋白含量显著增加(P<0.05),3、6、12μg/mL AAE组α_(s1)-酪蛋白含量显著增加(P<0.05)。3)与模型组相比,12μg/mL AAE组α-酪蛋白(CSN1S1)基因表达量显著增加(P<0.05),3、6、12μg/mL AAE组β-酪蛋白(CSN2)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、信号转导和转录激活因子5(STAT5)、真核细胞翻译启动因子4E结合蛋白1(EIF4EBP1)、核糖体S6蛋白激酶1(S6K1)、Janus激酶2(JAK2)基因表达量显著增加(P<0.05),6、12μg/mL AAE组真核起始因子4E(EIF4E)基因表达量显著增加(P<0.05)。由此可见,12μg/mL AAE对LPS诱导损伤BMECs活性和乳蛋白合成有较好的预保护效果。

奶牛乳脂合成及其关键基因的调控作用

牛奶是提高身体抵抗力、抵抗疾病的最佳营养品。我国奶牛养殖业蓬勃发展的同时,牛奶品质的提高已成为奶业发展的重大课题与挑战。乳脂,作为牛奶主要营养成分之一,不仅为人们提供高质量的天然脂肪,还成为衡量奶牛产奶性能的重要指标,消费者所追求的优质牛奶(营养品)就是乳脂≥3.2%的牛奶。大量的研究报道证明,除了饲养管理与营养因素外,关键基因在奶牛乳腺发育、血液中脂肪酸(fatty acid,FA)摄取、从头合成与转录、三酰甘油的合成、脂滴的形成等起着重要的调控作用。此文就乳脂合成过程中相关蛋白、酶的协同作用,以及一些关键基因对奶牛乳脂生成的研究进展进行综述分析,旨在为后期奶牛乳脂的理论研究奠定基础。