油酸对奶牛乳腺上皮细胞内甘油三酯含量和乳脂肪合成相关基因表达的影响

本试验旨在探讨油酸对奶牛乳腺上皮细胞内甘油三酯含量和乳脂肪合成相关基因表达的影响。选取中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)为试验材料,经纯化培养后,培养基中添加0(对照)、50、100、200、400μmol/L油酸,继续培养24 h。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活力;利用试剂盒检测胞内甘油三酯的含量;采用实时定量PCR法检测乳脂肪合成相关基因的表达。结果表明:油酸浓度为200、400μmol/L时,BMECs相对增殖率显著低于对照组与其他试验组(P<0.05);添加100、200μmol/L的油酸促进了胞内甘油三酯的合成(P<0.05);添加油酸上调了二酰甘油酰基转移酶(DGAT)基因表达量,50μmol/L的油酸显著上调了乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARGγ)基因表达量(P<0.05),100~400μmol/L的油酸显著抑制了硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)、脂肪酸结合蛋白3(FABP3)、固醇调节原件结合蛋白1(SREBP-1)基因表达量。综上所述,50~100μmol/L的油酸对BMECs乳脂肪合成具有较好的促进效果。

β-羟丁酸对奶牛乳腺上皮细胞内乳脂肪合成及其相关基因相对表达量的影响

本试验主要研究了不同浓度的β-羟丁酸（ BHBA）对奶牛乳腺上皮细胞（ BMECs）活力、甘油三酯（ TAG）含量、脂滴形成以及乳脂肪合成相关基因转录水平的影响。将传至第3代的BMECs悬液（1×10^5个/孔）接种于细胞培养板上,每孔加入含10%胎牛血清（ FBS）的DMEM/F12培养液,于37℃的5%二氧化碳（CO2）培养箱培养48 h。再将培养48 h的BMECs随机分配到6个组,各组向培养孔中加入含不同浓度BHBA的DMEM/F12培养液,培养液中的FBS用1 g/L无脂肪酸的牛血清白蛋白（ BSA）代替,并使反应体系中BHBA的最终浓度分别为0（对照）、0.58、1.16、2.32、4.64和9.28 mmol/L。置于37℃的5%CO2培养箱继续培养48 h。试验结果显示：随着BHBA浓度的增加,BMECs活力[（相对增殖率（ RGR）]呈显著的二次曲线增加（P=0.041）,其中BMECs活力以0.58～4.64 mmol/L BHBA组较高,9.28 mmol/L BHBA组较低；低浓度（0.58～2.32 mmol/L）的 BHBA 可促进 BMECs 内脂滴的形成,而较高浓度（4.64～9.28 mmol/L）的BHBA对脂滴形成的促进作用减弱；BHBA与TAG含量及乳脂肪合成相关基因脂肪酸合成酶（ FASN ）、乙酰辅酶 A 羧化酶α（ ACACA ）、硬脂酰辅酶 A 去饱和酶（ SCD）、脂肪酸结合蛋白3（ FABP3）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（ PPARG）和分化抗原簇36（CD36）的相对表达量均无显著的一次线性或二次曲线关系（P〉0.05）。综上,BHBA 对BMECs活力的促进作用呈显著的二次曲线增加,即BHBA对BMECs活力呈显著浓度依赖关系；BHBA对细胞内乳脂肪的合成有提高的趋势。