相思子碱通过P53/mTOR通路缓解脂多糖对水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白合成的影响

【目的】探究相思子碱(Abrine)通过调节P53/mTOR通路缓解脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对水牛乳腺上皮细胞酪蛋白合成的影响,为缓解乳房炎引起的水牛乳品质下降提供理论依据。【方法】使用脂多糖构建水牛乳腺上皮细胞炎症模型,同时使用相思子碱、P53抑制剂(Pifithrin-μ)、P53激活剂(Kevetrin hydrochloride)与水牛乳腺上皮细胞共同孵育12 h;通过HE染色观察水牛乳腺组织形态,采用CCK-8法检测细胞活性,使用ELISA试剂盒检测水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白分泌水平,利用实时荧光定量PCR测定NF-κB、IL-1β、TNFα、β-casein、mTOR、P53、JAK2、STAT5和AKT1基因相对表达量,并以Western blotting检测NF-κB、IL-1β、TNFα、β-casein、mTOR和P53蛋白相对表达量。【结果】临床型乳房炎乳腺组织间隙及腺泡腔被大量中性粒细胞浸润,部分腺泡结构呈现一定程度的萎缩。经1.0μg/mL脂多糖处理,水牛乳腺上皮细胞活力显著降低(P<0.05,下同),2.0、4.0和8.0μg/mL脂多糖处理,水牛乳腺上皮细胞活力极显著降低(P<0.001),25、50、100和200μmol/L相思子碱处理能缓解脂多糖的影响,水牛乳腺上皮细胞活力明显升高。与空白对照组相比,脂多糖处理组水牛乳腺上皮细胞NF-κB、IL-1β、TNFα和P53基因和蛋白相对表达量显著升高,β-酪蛋白表达水平显著降低;与脂多糖组相比,相思子碱+脂多糖处理组水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白水平显著升高,NF-κB、IL-1β、TNFα、P53基因和蛋白相对表达量显著降低;与脂多糖组相比,脂多糖+Pifithrin-μ组水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白表达水平显著升高,与相思子碱组相比,相思子碱+Kevetrin hydrochloride组水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白表达水平显著降低。【结论】脂多糖降低了水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白合成水平与β-酪蛋白合成相关基因及其编码蛋白的表达水平;相思子碱能通过抑制NF-κB通路缓解脂多糖诱导的水牛乳腺上皮细胞炎症,并通过调节P53/mTOR通路缓解脂多糖诱导的水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白合成减少。

氯化两面针碱通过Wnt/mTOR信号通路缓解热应激水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低

【目的】探究氯化两面针碱(Nitidine chloride,NitC)对热应激水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低的影响,为实际生产中缓解热应激对水牛乳品质的负面影响提供理论依据。【方法】记录非热应激季节和热应激季节牛舍温湿度指数(Temperature-humidity index,THI),检测水牛呼吸频率和直肠温度以判断水牛是否处于热应激状态;采集奶样进行乳成分分析以探究热应激对水牛奶β-酪蛋白含量的影响;以水牛乳腺上皮细胞为研究对象,经40.5℃处理24 h建立细胞热应激模型,使用LiCl和LGK974分别激活和抑制Wnt通路,检测水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量及β-酪蛋白合成相关基因和蛋白的表达水平,探究氯化两面针碱缓解热应激水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低的作用机制。【结果】与非热应激季节相比,热应激季节牛舍THI升高并超过水牛热应激阈值,水牛呼吸频率和直肠温度显著升高(P<0.05,下同),水牛奶β-酪蛋白含量显著降低;细胞试验结果表明,40.5℃处理24 h能显著降低水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量、细胞活力及Wnt2、mTOR、β-casein基因和蛋白的相对表达量;而氯化两面针碱处理能有效缓解热应激对水牛乳腺上皮细胞的影响,显著提高水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量、细胞活力及Wnt2、mTOR、β-casein基因和蛋白的相对表达量。【结论】热应激降低了水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量及β-酪蛋白合成相关基因和蛋白的相对表达量,氯化两面针碱则通过Wnt/mTOR信号通路提高水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量、细胞活力及Wnt2、mTOR、β-casein基因和蛋白的相对表达量,以缓解热应激造成的水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低。

抗结核药物性肝损伤小鼠模型细胞角蛋白18与基质金属蛋白酶7的表达水平

目的 分析抗结核药物性肝损伤(ATB-DILI)模型小鼠组织及血清中细胞角蛋白18(CK18)与基质细胞金属蛋白酶7(MMP-7)表达,探讨CK18与MMP-7在肝损伤发生中的临床价值。方法 6周龄SPF级雄性KM小鼠20只,体重18~24 g,按照随机区组法分为4组,每组5只。选择3组进行卡介苗(BCG)滴鼻使小鼠感染结核分枝杆菌,其中两组分别灌胃异烟肼(INH)45 mg/(kg·d)、利福平(RIF)90 mg/(kg·d),持续3周,记为INH 3周组及RIF3周组,剩余一组为BCG感染对照组;未经任何处理的为空白对照组。通过PCR检测小鼠肺组织BCG含量,病理观察小鼠肝损伤证实动物模型建立成功。比较各组肝脏指数、病变范围;比较各组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、总胆红素(TBil)、CK18、MMP-7表达情况;比较各组小鼠肝脏组织CK18、MMP-7蛋白表达情况。结果 BCG感染对照组与空白对照组小鼠ALT、AST、ALP、GGT、TBil表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);INH 3周组和RIF 3周组小鼠ALT、AST、GGT、TBil表达高于BCG感染对照组(P<0.05)。空白对照组、BCG感染对照组小鼠肝脏组织CK18、MMP-7蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);INH 3周组、RIF 3周组小鼠肝脏组织CK18、MMP-7蛋白表达高于BCG感染对照组(P<0.05)。空白对照组、BCG感染对照组小鼠血清CK18、MMP-7表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);INH 3周组、RIF 3周组小鼠血清CK18、MMP-7表达高于BCG感染对照组(P<0.05)。空白对照组、BCG感染对照组小鼠肝脏指数、病变范围比较,差异无统计学意义(P>0.05);INH 3周组、RIF 3周组小鼠肝脏指数、病变范围高于BCG感染对照组(P<0.05)。结论 CK18与MMP-7可能影响ATB-DILI,明确CK18与MMP-7表达水平,提前干预,可以降低ATB-DILI发生风险。

血清细胞角蛋白18在慢性肝脏疾病中的应用

细胞角蛋白18(CK-18)是构成肝细胞中间丝的主要蛋白质,当肝细胞发生凋亡或坏死时会被释放入血。血清CK-18最初是用于评估非酒精性脂肪性肝炎的严重程度,而近些年越来越多的临床研究发现,在其他慢性肝脏疾病中血清CK-18水平也会升高,可作为评估慢性肝脏疾病程度的新型血清学标志物。本文围绕血清CK-18在不同慢性肝脏疾病的临床应用进行综述。

动态监测血清血清鳞状上皮细胞癌抗原细胞角蛋白19血清片段21-1人附睾蛋白4水平在非小细胞肺癌患者疗程中的变化及其临床价值

目的动态监测血清鳞状上皮细胞癌抗原(SCC-Ag)、细胞角蛋白19血清片段21-1(CYFRA21-1)、人附睾蛋白4(HE4)水平在非小细胞肺癌患者疗程中的变化,并分析其临床应用价值。方法自2021年1月至2023年9月择取我院非小细胞肺癌患者108例为研究组,另收集同期良性肺病患者108例为作为对照组。分别检测良性肺病患者及非小细胞肺癌患者入院时血清SCC-Ag、CYFRA21-1、HE4水平;对比研究组不同治疗疗程患者血清各指标水平,并分析其诊断价值。结果入院时血清SCC-Ag、CYFRA21-1、HE4比较,研究组高于对照组(P<0.05);研究组患者血清SCC-Ag、CYFRA21-1、HE4水平:术后1 d>术后7 d>术后30 d>术后90 d;入院时血清SCC-Ag、CYFRA21-1、HE4水平联合诊断非小细胞肺癌的曲线下面积(AUC)为0.923,灵敏度为88.0%,特异度为83.3%。结论血清中SCC-Ag、CYFRA21-1、HE4表达水平在非小细胞肺癌患者中升高,并在不同术后疗程中存在降低,并发现三者联合检测可提高非小细胞肺癌的诊断效率,为肺癌的早期诊断及疗效评估提供新的手段。

血清人附睾蛋白4与细胞角蛋白19片段及鳞状上皮细胞癌抗原联合检测对肺癌的预测价值

目的探究血清人附睾蛋白4(HE4)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)联合检测对肺癌的预测价值。方法选取2022年8月至2023年12月医院收治的50例肺癌患者纳入肺癌组;选取同期医院收治的50例肺部良性病变患者纳入良性病变组。患者入院时均接受实验室检查,测定血清HE4、CYFRA21-1、SCC水平。比较两组上述血清指标水平,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标单独、联合检测对肺癌的预测价值。结果肺癌组血清HE4、CYFRA21-1、SCC水平高于良性病变组(P<0.05)。经Logistic回归分析发现,血清HE4、CYFRA21-1、SCC过表达与肺癌有关,可能是肺癌的风险因子(P<0.05)。血清HE4、CYFRA21-1、SCC单独、联合预测肺癌的ROC曲线下面积(AUC)均>0.750,联合检测的AUC最高。结论血清HE4、CYFRA21-1、SCC在肺癌患者中呈过表达,三指标联合检测对肺癌的预测价值较高。

鳞状上皮细胞癌抗原、细胞角蛋白19及血清应答因子对食管癌淋巴结转移的诊断价值分析

目的:探讨鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)、细胞角蛋白19 (CYFRA21-1)及血清应答因子(SRF)对食管癌(EC)淋巴结转移的诊断价值分析。方法:回顾性分析2019年2月—2021年1月洛阳市东方人民医院治疗的128例EC患者的临床资料,根据患者淋巴结转移情况将其分为淋巴结转移组和未发生淋巴结转移组,对比两组患者临床资料,分析EC患者SCC、CYFRA21-1、SRF与EC患者发生淋巴结转移的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积评价SCC、CYFRA21-1和SRF对食管癌淋巴结转移的诊断效能。结果:本研究纳入的128例EC患者中,有40例患者发生了淋巴结转移,淋巴结转移发生率为31.25%;与未发生淋巴结转移组相比,淋巴结转移组年龄、性别、体质量指数(BMI)、居住地、婚姻情况、教育程度、抽烟、饮酒、病变部位、肿瘤长径、高血压、糖尿病等临床资料对比,差异无统计学意义(t/χ^(2)=0.302、0.236、1.283、0.145、0.348、0.348、0.984、0.046、0.029、0.332、2.086、0.398、1.112,P>0.05),而TNM分期、肿瘤分化程度、SCC、CYFRA21-1、SRF等临床资料对比,差异有统计学意义(t/χ^(2)=6.188、5.593、7.435、7.160、8.503,P<0.05);经logistic回归分析显示,肿瘤分化程度、SCC、CYFRA21-1及SRF均是淋巴结转移的危险因素;Pearson相关性分析结果显示,SCC、CYFRA21-1、SRF表达水平与淋巴结转移的发生呈正相关(r=0.645、0.667、0.658,P<0.05);SCC、CYFRA21-1、SRF预测淋巴结转移的曲线下面积(AUC)分别为0.666、0.860及0.883,而SCC、CYFRA21-1、SRF三者联合检测预测淋巴结转移的AUC为0.952高于各指标单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SCC、CYFRA21-1、SRF与淋巴结转移的发生具有较高的相关性,且SCC、CYFRA21-1、SRF三者联合检测淋巴结转移发生的效能优于各指标单独检测。

情志应激激素受体调控Yes相关蛋白1影响乳腺癌细胞上皮间充质转化进程研究

目的:探究情志应激激素受体(GR)与Yes相关蛋白1(YAP1)对乳腺癌MCF-7细胞转移的调控机制,以期为乳腺癌的治疗提供新思路。方法:通过免疫组化实验分析乳腺癌组织和癌旁组织GR和YAP1的表达;将MCF-7细胞分为:si NC组、si GR组和si YAP1组,分别通过MTT实验、Transwell实验、细胞划痕实验和流式细胞术分析MCF-7细胞的增殖、侵袭、迁移能力及凋亡率,通过蛋白免疫印迹实验分析细胞GR和YAP1的表达水平。结果:与癌旁正常组织比较,乳腺癌组织YAP1与GR的表达水平升高。与si NC组比较,si GR组和si YAP1组的MCF-7细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力显著降低,凋亡率增加(P<0.05)。与si NC组比较,si GR组的MCF-7细胞的YAP1和GR表达水平降低(P<0.05),si YAP1组的MCF-7细胞的YAP1表达水平降低(P<0.05)。结论:乳腺癌患者的癌组织中YAP1与GR的表达水平升高。GR被激活后,通过调控细胞内的YAP1通路影响MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及凋亡率,进而导致乳腺癌MCF-7细胞转移,靶向调节YAP1抑制乳腺癌上皮间充质转化(EMT)发生可为乳腺癌患者提供新的治疗策略。

黄芩素对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭、迁移、上皮间充质转化的调控作用及其机制

目的观察黄岑素对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的侵袭、迁移及上皮间充质转化(EMT)的调控作用,探讨其可能作用机制。方法取对数生长期MDA-MB-231细胞分为一组、二组、三组及对照组,一组、二组、三组分别加入2.5、5、10μmol/L的黄岑素,对照组不做任何处理。培养48 h时采用划痕修复实验观察四组细胞迁移能力、采用Transwell侵袭实验观察四组细胞侵袭能力,采用Western Blotting法检测细胞EMT标志物波形蛋白(vimentin)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)、整合素αv、β3、磷酸化黏着斑激酶(p-FAK)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(整合素p-PI3K)。结果与对照组相比,黄岑素组细胞迁移率降低、侵袭细胞数少,细胞E-cadherin相对表达量高,vimentin、整合素αv、整合素β3、p-FAK、p-PI3K蛋白相对表达量低,且呈剂量依赖性(P均<0.05)。结论黄芩素抑制MDA-MB-231细胞的侵袭、迁移及EMT。黄岑素可能通过抑制整合素αv、整合素β3表达,进一步抑制p-FAK、p-PI3K蛋白表达,抑制MDA-MB-231的侵袭、迁移及EMT。

消痈散结汤对浆细胞性乳腺炎模型大鼠Th1/Th2细胞因子平衡及上皮连接蛋白表达的影响

目的观察消痈散结汤对浆细胞性乳腺炎模型大鼠Th1/Th2细胞因子平衡及上皮连接蛋白表达的影响,探讨消痈散结汤的可能作用机制。方法将36只SPF级SD雌性大鼠随机分为正常对照组、模型组、消痈散结汤组,每组各12只。模型组、消痈散结汤组大鼠乳腺组织注射临床PCM患者浆乳组织混悬液,建立浆细胞性乳腺炎大鼠模型。造模成功后,消痈散结汤组给予消痈散结汤0.3 mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组等体积生理盐水灌胃,干预2周。干预结束后,酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immuno sorbent assay,Elisa)检测大鼠乳腺匀浆组织血清白细胞介素4(Interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)及干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)含量,免疫组化法检测大鼠乳腺组织CD138阳性浆细胞比例,HE检测大鼠乳腺组织形态学改变,免疫组化法检测大鼠乳腺组织中上皮连接蛋白E-cadherin、ZO-1及Claudin3的表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠乳头内陷、乳房肿块,部分可见乳头溢液、皮肤破溃,血清IL-4水平减少,IL-6、IFN-γ增加,乳腺组织导管上皮E-cadherin、ZO-1及Claudin3的蛋白表达降低,浆细胞标记CD138表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,消痈散结汤组大鼠乳头内陷及乳头溢液程度减轻,肿块体积变小。血清IL-6、IFN-γ减少,乳腺导管上皮E-cadherin、ZO-1及Claudin3的表达增加,CD138表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论消痈散结汤能够减轻浆细胞性乳腺炎模型大鼠病理损伤,可能与平衡Th1/Th2细胞因子,增加上皮连接蛋白表达有关。

β-谷甾醇对脂多糖诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎症反应及乳蛋白合成的影响

本试验旨在探讨β-谷甾醇(BSS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠乳腺上皮细胞(HC11细胞)炎症反应及乳蛋白合成的影响。以体外培养的HC11细胞为模型,分为5组,对照组(生长培养基处理)、乳腺炎症模型组(LPS组,1μg/mL LPS处理)以及炎症模型药物组(BSS+LPS组,分别用5、10、20μmol/L的β-谷甾醇预处理1 h后加入1μg/mL LPS),每组设置5个重复。检测炎性细胞因子和乳蛋白mRNA表达以及乳蛋白合成信号通路相关基因mRNA和蛋白表达。结果表明:1)与对照组相比,LPS组的HC11细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05)。与LPS组相比,5、10、20μmol/L BSS+LPS组的HC11细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、COX-2和iNOS的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,LPS组的HC11细胞β酪蛋白(CSN2)、κ酪蛋白(CSN3)和乳清蛋白(LALBA)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。与LPS组相比,5、10、20μmol/L BSS+LPS组的HC11细胞CSN2、CSN3和LALBA的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05)。3)与对照组相比,LPS组的HC11细胞信号转导和转录激活因子5(STAT5)、酪氨酸激酶2(JAK2)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、真核细胞翻译启动因子4E结合蛋白1(4EBP1)和核糖体S6蛋白激酶1(S6K1)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),同时磷酸化信号转导和转录激活因子5(p-STAT5)、磷酸化酪氨酸激酶2(p-JAK2)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。与LPS组相比,5、10、20μmol/L BSS+LPS组的HC11细胞STAT5、JAK2、mTOR、4EBP1和S6K1的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),同时p-STAT5、p-JAK2和p-mTOR的蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。由此可见,β-谷甾醇能够抑制LPS诱导的HC11细胞炎症反应和促进乳蛋白的合成。

GPR37L1对奶牛乳腺上皮细胞乳成分合成相关基因表达的影响

运用分子生物学技术构建GPR37L1表达和干扰载体,以奶牛乳腺上皮细胞为试验模型,通过瞬时转染技术构建载体转染乳腺上皮细胞,探究GPR37L1对乳成分合成相关基因表达的影响。结果表明,GPR37L1表达和干扰载体构建成功,GPR37L1过表达或干扰可提高或降低乳脂合成相关基因及β-酪蛋白表达,揭示GPR37L1可正向调节乳成分合成。

结缔组织生长因子体外调控奶牛乳腺上皮细胞生长和泌乳分化

旨在探究结缔组织生长因子在体外培养体系中对奶牛乳腺上皮细胞生长和泌乳分化的调控作用。本研究主要通过人为添加结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)重组蛋白和过表达CTGF基因分析其对细胞增殖、凋亡、乳脂和乳蛋白合成分泌及信号通路的影响。使用EdU试剂盒和流式细胞仪分别检测细胞增殖凋亡情况;应用尼罗红染料和甘油三酯试剂盒检测细胞内脂滴数量和细胞外培养液乳脂含量;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测细胞增殖凋亡,β酪蛋白,乳脂和乳蛋白合成关键信号分子以及细胞外基质细胞表面受体β1整联蛋白的表达;免疫共沉淀分析CTGF和β1整联蛋白之间的蛋白质相互作用。结果表明:体外培养时,无论CTGF重组蛋白还是CTGF过表达均能通过增强增殖、抑制凋亡促进贴壁细胞生长;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹结果表明,CTGF在转录和翻译水平增强促增殖的CyclinD1、MAPK和Bcl2表达,抑制促凋亡的Caspase3和Bax表达;CTGF一方面上调乳脂合成关键基因FASN、SREBP1、PPARγ表达水平,促进细胞内脂滴合成和胞外甘油三酯分泌;另一方面上调乳蛋白合成关键基因PRLR、STAT5和p-STAT5表达水平,进而显著促进β酪蛋白合成;CTGF上调β1整联蛋白表达水平,Co-IP也证实了CTGF和β1整联蛋白之间存在蛋白质相互作用。综上所述,CTGF促进体外培养的奶牛乳腺上皮细胞生长及泌乳能力;CTGF与β1整联蛋白共存于黏附复合物,可以通过影响β1整联蛋白信号途径实现其部分生物学作用。

干扰SOCS1基因表达对猪乳腺上皮细胞凋亡的调控效应

细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)是一种调节细胞内信号通路活性的负调控因子,参与调控机体细胞的多种生理功能。为探索SOCS1基因沉默对猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响,试验通过构建猪SOCS1基因shRNA干扰载体,转染猪乳腺上皮细胞,TMT定量蛋白组学筛选差异蛋白,Annexin V/PI、CCK-8和流式细胞术检测细胞周期、细胞增殖和细胞凋亡。结果显示,干扰组(shRNA-SOCS1-138)与空白组相比,共筛选到差异表达蛋白52个,其中上调蛋白26个,下调蛋白26个。GO富集发现,差异蛋白主要富集在病毒防御响应、EB病毒遗传缺陷反应后的免疫缺陷和对其他生物的免疫反应几个方面。KEGG通路富集发现,差异蛋白主要富集在坏死性凋亡、丙型肝炎和全身性红斑狼疮信号通路。干扰SOCS1后,乳腺上皮细胞450 nm的OD值在12、24、48 h和72 h的细胞量显著或极显著高于空白组;G1期和G2期细胞占比均极显著高于空白组,S期细胞百分比极显著低于空白组;干扰组与空白组之间细胞凋亡率差异达到显著水平。综合研究结果揭示,SOCS1基因沉默可促进细胞增殖和降低细胞的凋亡,引起G1/S期阻滞,并受多个信号通路的调控作用。

融合蛋白anti-EGFR-iRGD修饰的红细胞外囊泡联合siRNA靶向抑制三阴性乳腺癌恶性进程

目的:通过红细胞来源的细胞外囊泡(red blood cell-derived extracellular vesicles,RBCEVs)构建靶向递送系统以提高对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)恶性进程的抑制效率。方法:采用脂质插入法将融合蛋白anti-抗人表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)-iRGD多肽结合至RBCEVs膜表面以构建生物相容性药物递送系统。通过电穿孔方式使连环蛋白β1(Catenin Beta 1,CTNNB1)-siRNA有效装载至anti-EGFR-iRGD-RBCEVs。进一步验证anti-EGFR-iRGD-si-CTNNB1-RBCEVs对TNBC增殖、迁移的影响及对上皮间充质转化相关蛋白表达的调控。结果:anti-EGFR-iRGD-si-CTNNB1-RBCEVs在120 h内具有较高血清稳定性,并且可有效防止RNA酶对CTNNB1-siRNA的降解。另外,该复合物可显著提高si-CTNNB1对TNBC细胞中CTNNB1基因及β-catenin蛋白的抑制作用并抑制TNBC细胞的增殖、迁移能力,下调Snail、Vimentin、N-cadherin并促进E-cadherin蛋白的表达。结论:该研究通过构建融合蛋白anti-EGFR-iRGD修饰的RBCEVs联合siRNA靶向抑制TNBC恶性进程,这将为治疗整合素α_(v)β_(3)高表达的TNBC提供更有利治疗方式。

乙酸与蛋氨酸互作效应对奶牛乳腺上皮细胞内乳蛋白合成的影响

试验旨在研究乙酸与蛋氨酸(Met)互作效应对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳蛋白合成相关基因及蛋白表达的影响。采用2×6双因素完全随机试验设计,因素一为乙酸的浓度,设6个水平,分别为0、4、6、8、10和12 mmol/L;因素二为Met浓度,设2个水平,分别为0.13 mmol/L、0.52 mmol/L。将第三代BMECs随机分为12个处理组,每组6个重复,按试验要求培养48 h,测定各项指标。结果显示:Met浓度为0.13 mmol/L或0.52 mmol/L时,随乙酸浓度的增加,BMECs内CSN3、JACK2、STAT5的表达均有上调,CSN1S1明显下降。Met浓度为0.52 mmol/L时,8、10、12 mmol/L乙酸组CSN3、JACK2、STAT5、CSN1S1的表达明显提高,乙酸为8 mmol/L时,CSN3和JACK2、STAT5表达明显提高,乙酸浓度为0时,CSN1S1表达明显提高,乙酸浓度为6、8、10、12 mmol/L时,mTOR和4EBP1表达明显提高。在Met浓度为0.13 mmol/L或0.52 mmol/L时,随着乙酸浓度升高JACK2/STAT5信号通路基因表达、mTOR及其下游相关因子的磷酸化水平先提高后降低。研究表明,Met与乙酸互作效应对BMECs内乳蛋白合成具有显著影响,以Met浓度为0.52 mmol/L、乙酸浓度为6 mmol/L组合促进效果较好。

细胞角蛋白检测对儿童ALL药物性肝损伤预测价值

目的探究血清细胞角蛋白18-M30(CK18-M30)和18-M65(CK18-M65)对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)治疗后发生药物性肝损伤(DILI)的预测价值。方法2019年3月—2022年2月,新乡医学院第一附属医院收治ALL病儿66例,依据DILI分为观察组49例(发生)和对照组17例(未发生),观察组依据DILI病情分为轻度、中度和重度亚组。收集病儿相关临床资料,检测血清CK18-M30和CK18-M65活力。分析发生DILI的影响因素及血清CK18-M30和CK18-M65表达对并发DILI的预测价值。结果观察组血清CK18-M30和CK18-M65活力高于对照组(t=14.230、12.735,P<0.05)。DILI病情越严重,血清CK18-M30和CK18-M65活力越高(F=20.122、5.551,P<0.05)。ALL疾病危险程度、感染、输血、血清CK18-M30和CK18-M65活力等均为ALL病儿发生DILI的危险因素(OR=1.869~2.866,95%CI=(1.205~1.799)~(2.773~4.257),P<0.05),保肝药应用则为发生DILI的保护因素(OR=0.522,95%CI=0.395~0.670,P<0.05)。血清CK18-M30和CK18-M65预测ALL病儿发生DILI的受试者工作特征曲线下面积(AUC)分别为0.739和0.699,两者联合预测效能更高。结论ALL病儿血清CK18-M30和CK18-M65活力可作为发生DILI的预测指标。

β-谷甾醇对小鼠乳腺上皮细胞乳蛋白和乳脂肪合成的影响

为探讨β-谷甾醇对泌乳动物乳腺乳蛋白和乳脂肪合成的影响,研究首先利用MTT法筛选出对小鼠乳腺上皮细胞生长增殖不受抑制的β-谷甾醇剂量;采用qRT-PCR技术检测β-谷甾醇处理乳腺上皮细胞后乳蛋白合成相关基因和乳脂肪合成相关基因的mRNA表达水平。结果表明:较高剂量(40~120μmol/L)的β-谷甾醇明显抑制小鼠乳腺上皮细胞的活力(P<0.05),故后续试验添加5、10、20μmol/L的β-谷甾醇处理乳腺上皮细胞。β-谷甾醇明显提高酪蛋白基因CSN1S1、CSN2、CSN3及乳蛋白合成通路相关基因JAK2、STAT5、mTOR、S6K1的mRNA表达水平(P<0.05),但5、10μmol/L的β-谷甾醇对4EBP1基因的mRNA表达水平无显著影响(P>0.05)。β-谷甾醇显著上调乳脂肪合成关键调控因子SREBF1、PPARG、PPARGC1A和脂肪酸合成相关基因ACC、FAS、SCD的mRNA表达(P<0.05)。由此可见,β-谷甾醇能通过调节小鼠乳腺上皮细胞乳蛋白和乳脂肪合成相关基因的表达,进而促进乳腺细胞乳蛋白和乳脂肪的合成。

必需氨基酸调控奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成的研究进展

乳蛋白含量的高低是衡量乳品质的重要指标,奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)是乳腺合成乳蛋白的基本功能单位。必需氨基酸(EAA)作为乳成分前体物质,其不仅是乳蛋白合成的底物,而且可以作为信号分子调控乳蛋白的合成。本文综述了近年关于EAA对BMECs乳蛋白合成的影响及其潜在的信号通路机制的研究进展,为今后系统研究氨基酸对BMECs乳蛋白合成的调控及提高泌乳奶牛氨基酸转化为乳蛋白的效率提供参考。

细胞角蛋白17在胃癌细胞上皮间充质转化(EMT)中的作用及临床意义研究

研究 CK17对胃癌细胞株体外侵袭转移能力的影响,以及调控上皮间充质转化(EMT)标志性基因的表达情况,为寻找胃癌诊疗新靶点提供理论依据。方法 胃癌细胞系AGS、MGC823、MGC803、SGC7901、MKN45、人胃癌细胞(HGC-27)、胃部正常黏膜组织上皮细胞株人胃黏膜细胞(GES-1),制定与完善靶向抑制CK-17指标水平表达的特异性小干扰RNA(Small interfering RNA;siRNA),同时瞬时转染人胃癌细胞SGC7901以及AGS细胞。实时荧光定量核酸扩增检测(Real-time Quantitative PCR Detecting System,qPCR)方法检查瞬时转染96小时后SGC7901以及AGS细胞中CK17mRNA指标表达水平;并且使用MTT比色方法细胞划痕愈合发光法、TransweII小室方法检查减少CK17指标表达水平对于细胞繁殖、迁移以及侵袭等方面的影响,使用蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB )方式对细胞中上皮间充质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)有关蛋白表达水平进行检测。结果 与正常胃黏膜上皮细胞相比,六种胃癌细胞株CK17指标表达水平均处于较高水平中,靶向抑制 siRNA CK-17组SGC7901及AGS细胞中CK-17 mRNA表达下调(P<0.01),该细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到抑制,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin蛋白表达降低。结论 CK17可促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,该作用可能与EMT过程有关。