黄芩苷对LPS诱导的家兔乳腺炎的保护作用

研究黄芩苷对LPS诱导的家兔乳腺炎性损伤的保护作用。分娩7～10 d的50只健康新西兰泌乳家兔随机分为LPS模型组（LPS,0.25 mg/kg·BW）、黄芩苷75 mg/kg·BW组、黄芩苷150 mg/kg·BW组、黄芩苷300 mg/kg·BW组和DEX组（0.5 mg/kg·BW）。通过乳头管灌注LPS,黄芩苷和DEX分别在灌注LPS前48、24、1 h和灌注后8、32、56 h耳缘静脉注射给药。灌注LPS前50 h、灌注后6、12、24、48 h和72 h测量家兔直肠温度,采集家兔耳缘静脉血;灌注LPS前50 h、灌注后12、24 h和72 h摘取乳腺组织。采集的样品进行下列检测：（1）制作病理组织学切片观察乳腺的病理组织学变化;（2）检测血清中LDH、ALP、MPO和NAG的活性变化;（3）ELISA检测血清中促炎细胞因子IL-1、IL-6和TNF-α的含量。结果显示,与LPS模型组比较,注射黄芩苷各组：（1）乳腺组织的炎性损伤减轻;（2）血清中LDH、ALP、MPO和NAG活性降低,其中黄芩苷300 mg/kg·BW组抑制血清中酶活性升高效果最好;（3）血清中促炎细胞因子IL-1、IL-6和TNF-α水平降低,其中在6 h时血清中TNF-α水平显著低于LPS模型组（P〈0.05）;72 h时,血清中IL-1水平显著低于LPS模型组（P〈0.05）。结果表明,黄芩苷能够有效减轻乳腺组织的炎性损伤,300 mg/kg·BW保护作用最好。

槐耳清膏治疗大鼠肉芽肿性小叶性乳腺炎模型的作用研究

[目的]探讨槐耳清膏通过降低炎症水平治疗肉芽肿性小叶性乳腺炎(granulomatous lobular mastitis,GLM)大鼠的作用。[方法]将雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、槐耳组[槐耳清膏4.5 g/(kg·d)]、激素组[醋酸泼尼松龙0.0018 g/(kg·d)],利用GLM病变组织与弗氏完全佐剂混合后的组织匀浆诱导GLM大鼠模型。给药14 d后,对各组大鼠进行乳腺大体观察,以大鼠乳腺炎症指数评分表进行炎症指数评分,苏木精-伊红染色后进行乳腺组织病理学观察,并通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测大鼠血清炎症细胞因子的表达水平,采用16S rRNA扩增子测序技术测定各组大鼠肠道菌群的多样性、丰度以及肠道菌群相对丰度。[结果]与正常组比较,模型组大鼠乳房皮色红,出现明显肿块,且乳腺炎症指数显著上升(P<0.05);病理学改变包括形成以乳腺小叶为中心的肉芽肿,伴大量淋巴细胞、浆细胞等炎症细胞浸润,证实成功诱导GLM大鼠模型。与模型组比较,槐耳组及激素组大鼠乳房外观红肿改善,肿块变软,炎症指数均下降(P<0.05,P<0.05),乳腺炎症程度明显改善,炎症细胞减少,血清炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平显著降低(P<0.05,P<0.05,P<0.05),乳腺组织淋巴细胞、浆细胞等炎症细胞浸润减少。模型大鼠肠道菌群发生明显变化,差异具有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠肠道菌群中乳杆菌目、放线菌门、双歧杆菌目、红蝽菌纲丰度下调,柄杆菌目和脱硫菌门丰度上调。槐耳清膏干预后,模型大鼠肠道菌群中梭菌纲丰度下调,拟杆菌门、红螺菌目丰度上调。[结论]槐耳清膏能够缓解GLM模型大鼠炎症症状,有效减轻GLM模型大鼠乳腺组织炎症细胞浸润,抑制上皮细胞增生及炎性肉芽肿的形成,降低GLM模型大鼠血清炎症细胞因子水平,同时调节大鼠肠道菌群,其作用机制可能跟增强大鼠自身免疫力、调节肠道菌群,进而有效缓解炎症反应有关。

柴胡清肝汤干预NLRP3/IL-1β通路治疗肉芽肿性小叶性乳腺炎模型大鼠的作用机制

目的:探讨柴胡清肝汤(CHQGT)治疗肉芽肿性小叶性乳腺炎(GLM)模型大鼠的作用机制。方法:将60只雌性大鼠分为正常组、模型组、醋酸泼尼松龙组(0.0018 g·kg^(-1))、柴胡清肝汤低、中、高剂量组(4.5、8.9、17.8 g·kg^(-1)),采用GLM病变组织与弗氏佐剂混合后的组织匀浆进行造模,造模成功后药物干预组均给予相应的处理因素,正常组、模型组给予等量生理盐水。14 d后肉眼观察小鼠乳腺变化;苏木素-伊红(HE)染色观察取材的乳腺组织病理学改变;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)m RNA表达;蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测NLRP3、Caspase-1、IL-1β、白细胞介素-18(IL-18)的蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠肉眼可见乳房明显红肿,且乳腺炎症指数显著升高(P<0.01),病理学改变包括形成以乳腺小叶为中心的肉芽肿,伴见大量淋巴细胞、浆细胞等炎性细胞浸润,模型组大鼠乳腺组织中的NLRP3、Caspase-1及IL-1βm RNA相对表达量显著增加(P<0.01),NLRP3、Caspase1、IL-1β和IL-18蛋白的表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠乳房红肿均有改善,柴胡清肝汤中、高剂量组及泼尼松龙组经治后炎症指数均有不同程度下降(P<0.05,P<0.01),乳腺的炎症程度明显改善,病理学方面巨噬细胞、淋巴细胞、浆细胞等炎性细胞均有不同程度减少,柴胡清肝汤高剂量组、泼尼松龙组均能够明显下调NLRP3、Caspase-1及IL-1βm RNA的表达(P<0.05,P<0.01),降低NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:柴胡清肝汤能够抑制炎症,治疗大鼠GLM,其可能机制与抑制NLRP3/IL-1β信号通路有关,这为“清消法”防治GLM提供了新的靶点。