半胱氨酰白三烯受体在乳腺癌组织中的表达及意义

目的:通过临床病例的研究,检测CysLT1R和CysLT2R在乳腺癌中的表达情况,并分析C2ysLT1R和CysLT2R与乳腺癌患者病理特征及预后的关系。方法:采用实时荧光定量PCR方法,从mRNA水平上检测90例原发乳腺癌组织和30例匹配的癌旁组织中CysLT1R和CysLT2R基因的表达量,分析二者与临床病理学参数之间的关系,以及与乳腺癌患者预后的关系。结果:乳腺癌组织CysLT1R基因的表达明显高于癌旁组织,乳腺癌组织CysLT2R基因的表达明显低于癌旁组织,两者差异具有统计学意义(P<0.01)。乳腺癌组织中CysLT1R的表达程度与肿瘤大小、组织学类型、淋巴结转移、TNM分期的表达呈正相关(P<0.05),CysLT2R的表达程度与肿瘤大小、组织学类型、淋巴结转移的表达呈负相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,CysLT1R mRNA高表达者的总的5年生存率显著低于低表达水平者(P=0.035),CysLT2R mRNA高表达者的总的5年生存率显著高于低表达水平者(P=0.025)。结论:CysLT1R和CysLT2R可作为乳腺癌判断预后的分子标志物。

新型半胱氨酰白三烯受体GPR17的多克隆抗体制备及其鉴定

目的:制备新型半胱氨酰白三烯受体GPR17的多克隆抗体(pAb),并鉴定其免疫学特性。方法:以KLH偶联的GPR17多肽免疫家兔制备其pAb,用间接ELISA法测定抗体效价,阻断ELISA测定抗体敏感性及特异性,同时以新制备的抗体做Western blot,检测GPR17的组织表达。结果:通过免疫家兔获得的抗GPR17 pAb,ELISA测定显示其抗体效价最高可达到1/16 364,并对CysLT1受体和CysLT2受体基本无交叉反应,具有较好的特异性。Western blot结果显示,GPR17在大鼠脑和心脏组织中有较高的表达,其分子量在43 kD左右。结论:制备的GPR17 pAb具有较高的效价和较好的特异性,能满足Western blot检测GPR17的要求。

鱼藤酮诱导BV2小胶质细胞半胱氨酰白三烯受体1表达变化

目的:制备和鉴定半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)抗体,以此观察鱼藤酮诱导BV2小胶质细胞损伤过程中CysLT1受体表达变化。方法:以KLH偶联的CysLT1受体多肽(小鼠)免疫家兔制备多克隆抗体,用ELISA法测定抗体效价,以抗原阻断法测定抗体敏感性及特异性。用新制备的抗体以Western blotting检测鱼藤酮(0.01～1μmol/L,作用24 h)损伤BV2细胞过程中,BV2细胞上CysLT1受体的表达变化,并以RT-PCR检测验证CysLT1受体mRNA表达水平,同时以免疫组化观察CysLT1受体的亚细胞分布变化。结果:ELISA测定显示,制备的兔抗小鼠CysLT1受体抗体的效价大于1/32728,对CysLT1受体的特异性强,对CysLT2受体和GPR17基本无交叉反应。Western blotting和RT-PCR显示,鱼藤酮作用BV2细胞24 h剂量依赖性诱导CysLT1受体mRNA及蛋白水平表达升高;免疫组化显示在鱼藤酮诱导BV2细胞损伤过程中,随鱼藤酮剂量增加,CysLT1受体发生核移位。结论:制备的CysLT1受体多克隆抗体具有高效价和高特异性,能满足Western blotting和免疫组化检测的要求;CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的BV2细胞损伤。

半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂普鲁司特调节SK-N-SH细胞分化

目的:观察半胱氨酰白三烯受体激动剂LTD4以及受体1(CysLT1)拮抗剂普鲁司特对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞分化的影响。方法:以维A酸为阳性对照,观察LTD4、普鲁司特、LTD4+普鲁司特诱导SK-N-SH细胞形态学变化;用免疫印迹法观察SK-N-SH细胞CysLT1和CysLT2受体的表达;用免疫荧光法观察神经元分化标记物微管相关蛋白(MAP-2)的表达。结果:免疫印迹显示,SK-N-SH表达CysLT1受体和CysLT2受体,CysLT2受体表达较多。形态学结果显示,维A酸、普鲁司特、LTD4+普鲁司特诱导SK-N-SH细胞发生形态学改变,表现为胞体变小,有明显的突起生长;而LTD4无明显作用。免疫荧光结果显示,在对照组和普鲁司特组MAP-2主要分布于胞体;在维甲酸组MAP-2除了分布于胞体外,还分布于突起。普鲁司特增加MAP-2阳性细胞数。结论:CysLT1受体拮抗剂普鲁司特参与SK-N-SH细胞分化的调节。

柴芍承气汤对大鼠肠缺血再灌注肠组织半胱氨酰白三烯受体1表达和病理的影响

目的:研究中药柴芍承气汤对大鼠肠缺血再灌注(I/R)保护作用和机理。方法:30只大鼠分为3组,假手术对照组、I/R模型组和中药治疗组各10只。通过免疫组织化学染色方法和RT-PCR法检测大鼠肠组织CysLTR1蛋白和mRNA表达水平,并应用光学显微镜观察小肠病理改变。结果:1与对照组比较,中药治疗组大鼠肠道组织的病理改变均明显减轻。2肠I/R时肠组织CysLTR1蛋白和mRNA表达水平升高;应用中药后,肠组织CysLTR1蛋白和mRNA表达水平均减低。结论:柴芍承气汤能减轻肠I/R肠道组织的病理损害,并能抑制大鼠肠黏膜抑制肠组织CysLTR1的表达,CysLTR1的表达可能是柴芍承气汤保护肠黏膜损伤的靶点。

半胱氨酰白三烯受体1参与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的调节

目的:观察半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的关系。方法:鱼藤酮及CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特处理PC12细胞后,以MTT方法检测PC12细胞活性变化;以Western blotting检测鱼藤酮处理前后,PC12细胞CysLT1受体的表达变化;不同浓度鱼藤酮处理24 h及3μmol/L鱼藤酮处理不同时间,以免疫细胞化学方法观察CysLT1受体分布变化。结果:鱼藤酮(0.3～30μmol/L)可诱导PC12细胞损伤,孟鲁司特(1、5μmol/L)可显著减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤。1～10μmol/L鱼藤酮作用PC12细胞24 h及3μmol/L鱼藤酮处理3 h和24 h,均可诱导CysLT1受体蛋白水平表达升高。鱼藤酮能浓度和时间依赖性引起CysLT1受体从细胞核移位到细胞浆。结论:CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤。

半胱氨酰白三烯受体-1在大鼠肠缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨半胱氨酰白三烯受体1(cysteinyl leukotrienes receptor,CysLTsR1)在肠缺血再灌注(intestinal ischemia-reperfusion,I/R)损伤中的可能作用.方法:以I/R大鼠肠I/R损伤模型为研究对象,并运用不同剂量CysLTsR1拮抗剂孟鲁司特(0.2、2和20 mg/kg)加以干预,通过免疫组织化学染色方法和RT-PCR法检测大鼠肠组织CysLTsR1蛋白和mRNA表达水平,并应用光学显微镜观察小肠病理改变、检测小肠质量变化、确定CysLTsR1拮抗剂孟鲁司特对小肠的炎症程度的影响.结果:肠I/R可造成肠组织损伤,小肠含水量增加(模型组78.13 g±1.35 g vs正常组78.13 g±1.35 g,P<0.05),肠I/R时肠组织CysLTsR1蛋白和mRNA表达水平升高(P<0.05);应用孟鲁司特后,小肠含水量降低(低、中、高剂量组分别为76.47 g±1.48 g、72.67 g±5.35 g及75.39 g±3.66 g),肠组织损伤减轻,肠组织CysLTsR1蛋白表达和mRNA表达水平均减低(P<0.05).结论:CysLTsR1参与了肠I/R损伤的形成,孟鲁司特可以减轻肠I/R对肠组织的损伤,CysLTsR1是保护肠I/R损伤的新的作用靶点.

柴芍承气汤对大鼠肠缺血再灌注后肠组织半胱氨酰白三烯受体1的表达和肠黏膜细胞凋亡的影响

目的研究中药柴芍承气汤对大鼠肠缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及其机制。方法 30只大鼠分为3组,对照组、模型组和中药组各10只。通过免疫组织化学染色方法、Western blot和RT-PCR法检测大鼠肠组织半胱胺酰白三烯受体1(cysteinyl leukotriene receptor 1,CysLTR1)蛋白和mRNA表达水平,并用光学显微镜观察小肠病理改变,检测小肠重量变化,TUNEL-方法检测小肠黏膜细胞凋亡。结果 (1)与对照组比较,中药组大鼠肠组织的病理改变均明显减轻(均P<0.05);与对照组比较,模型组小肠含水量明显增加(P<0.05),而中药组小肠含水量显著降低(P<0.01);(2)肠I/R时肠组织CysL.TR1蛋白和mRNA表达水平升高;应用中药后,肠组织CysLTR1蛋白和mRNA表达水平均减低(均P<0.05);(3)与模型组比较,中药组小肠黏膜细胞凋亡显著减少(P<0.01);(4)小肠黏膜中CysLTR1蛋白表达分别与细胞凋亡、黏膜病理损伤、小肠含水量呈正相关(r=0.8463、0.8783、0.7708,均P<0.05)。结论柴芍承气汤能减轻肠I/R肠组织的病理损害和降低小肠黏膜细胞凋亡,并能抑制肠黏膜组织CysLTR1的表达,CysLTR1的表达可能是柴芍承气汤保护肠黏膜损伤的靶点。

半胱氨酰白三烯受体1与支气管哮喘关系研究进展

支气管哮喘是由多种炎性细胞和多种细胞因子共同参与的慢性气道炎性反应,其中研究已证实半胱氨酰白三烯（cysteinyl leukotrienes,CysLTs）在哮喘整个病理生理过程中起重要作用,其参与哮喘多为特异性受体-半胱氨酰白三烯受体（cysteinyl leukotrienes receptor,CysLTR）介导。

半胱氨酰白三烯受体CysLT1R在大肠癌组织中的表达及临床意义

目的研究半胱氨酰白三烯受体(CysLT1R)在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌临床病理特征之间的关系。方法选取46例大肠癌、32例癌旁组织、15例腺瘤性息肉手术切除标本,采用免疫组织化学法检测各组织中CysLT1R的表达水平。结果 CysLT1R在大肠癌组织、癌旁组织及腺瘤性息肉中的阳性表达率分别为67.39%,40.62%,40.0%,癌组织中CysLT1R的阳性表达率高于癌旁组织、腺瘤性息肉组织(P<0.05)。大肠癌组织中CysLT1R的表达程度与肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移及临床分期有关(均P<0.05)。结论 CysLT1R表达与大肠癌分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移及临床分期有关。CysLT1R可能参与大肠癌发生发展。

温肺合剂对闭塞性细支气管炎模型大鼠肺组织纤维化和半胱氨酰白三烯受体1表达的影响

目的:探讨温肺合剂对闭塞性细支气管炎(BO)模型大鼠肺组织纤维化和半胱氨酰白三烯受体1(CysLTR-1)表达的影响。方法:将200只大鼠随机分为正常组、模型制备组,BO造模结束后将模型制备组大鼠随机分为模型组、温肺合剂低、中、高剂量组和地塞米松+孟鲁司特钠组。正常组、模型组按大鼠处死时间点分为第7天、第14天、第21天、第28天,药物干预组按处死时间点分为第14天、第21天、第28天,每个亚组10只大鼠。比较各组大鼠肺系数变化情况判断肺纤维化情况;采用HE染色观察大鼠肺组织炎症及纤维损伤结果;采用蛋白质免疫印迹法观察肺组织CysLTR-1表达水平。结果:温肺合剂中、高剂量组和地塞米松+孟鲁司特钠组肺系数显著低于模型组(P<0.01)。HE染色观察肺组织病理发现,药物干预各组实验前期病理表现与模型组类似,后期温肺合剂中、高剂量组纤维化程度小于温肺合剂低剂量组和地塞米松+孟鲁司特钠组。模型组CysLTR-1表达水平显著高于正常组(P<0.01)。温肺合剂高剂量组和地塞米松+孟鲁司特钠组各时间点CysLTR-1表达水平均显著低于模型组(P<0.01),且两者之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:温肺合剂可抑制闭塞性细支气管炎模型大鼠肺组织CysLTR-1的表达,阻断CysLTs介导的炎症及纤维化。

半胱氨酰白三烯受体1对血管内皮细胞的增殖和迁移的调节

目的：半胱氨酰白三烯（包括LTC4，LTD4 and LTE4）是花生四烯酸经5-脂氧合酶（5-LOX）途径代谢产物，半胱氨酰白三烯受体1（CysLT1）是得到克隆和鉴定的受体之一。已有试验表明CysLT1受体与血管再生相关，但尚不清楚其对血管再生中内皮细胞的功能调节。内皮细胞的增殖和迁移是血管再生的重要步骤，本试验目的是观察CysLT1受体对血管内皮细胞的增殖、迁移的影响，并探讨其作用机制。

柴芍承气汤对大鼠肠缺血再灌注后肝组织半胱氨酰白三烯受体1的表达和肝细胞凋亡的影响

目的:研究中药柴芍承气汤对大鼠肠缺血再灌注(I/R)继发肝损伤的保护作用及其机制。方法:30只大鼠分为3组,对照组、模型组和中药组各10只。通过免疫组织化学染色方法、Western blot和RT-PCR法检测大鼠肝组织半胱胺酰白三烯受体1(cysteinyl leukotriene receptor 1,Cys LTR1)蛋白和mRNA表达水平,并用光学显微镜观察肝脏病理改变,TUNEL方法检测肝细胞凋亡。结果:(1)与对照组比较,模型组有大鼠肝脏病理损伤,中药组大鼠组肝脏组织的病理改变明显减轻(均P<0.05);(2)肠I/R时肝组织Cys LTR1蛋白和mRNA表达水平升高;应用中药后,肝组织Cys LTR1蛋白和mRNA表达水平均减低(均P<0.05);(3)与对照组比较,模型组肝细胞凋亡指数升高;与模型组比较,中药组肝细胞凋亡显著减少(P<0.01);(4)肝组织中Cys LTR1蛋白表达分别与细胞凋亡、肝脏组织病理损伤正相关(r=0.8463、0.8783、0.7708,均P<0.05)。结论:柴芍承气汤能减轻肠I/R继发肝脏损伤的病理损害和降低肝细胞凋亡,并能抑制肝脏组织中Cys LTR1的表达,柴芍承气汤可能通过抑制肝脏组织中Cys LTR1的表达和抑制肝细胞凋亡减轻肠I/R继发肝损伤。

支气管肺发育不良早产儿外周血清5-脂氧合酶激活蛋白、白三烯C4合成酶及半胱氨酰白三烯受体1的表达研究

目的:探讨新生儿呼吸窘迫综合征(neonatal respiratory distress syndrome,NRDS)及支气管肺发育不良(bronchopul-monary dysplasia,BPD)患儿血清中5-脂氧合酶激活蛋白(5-lipoxygenase activating protein,FLAP)、白三烯C4合成酶(leukotriene C4 synthase,LTC4S)及半胱氨酰白三烯受体1(cysteinyl leukotriene receptor 1,CysLTR1)水平变化的意义,旨在寻找BPD早期敏感的生物学指标。方法:收集2015年8月—2017年12月在南京医科大学第一附属医院儿科收治入院的胎龄<37周、出生体重<2 500 g的新生儿病例。待其出院后根据患儿完整住院信息将病例整理为无肺部疾病的早产儿65例(对照组),不合并BPD的NRDS早产儿60例(NRDS组),BPD早产儿49例(BPD组)。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测新生儿生后3、7、14 d血清中FLAP、LTC4S、CysLTR1水平。比较3组各时间点各指标的浓度水平,采用方差分析、t检验及卡方检验等进行统计学分析。结果:生后3 d BPD组血清FLAP、CysLTR1水平均高于对照组和NRDS组(P均<0.05)。生后7 d BPD组血清FLAP、LTC4S、CysLTR1水平均高于对照组(P均<0.05),BPD组血清FLAP和CysLTR1水平分别高于NRDS组(P <0.05)。生后14 d BPD组仅血清LTC4S水平高于对照组(P <0.05)。结论:生后3 d血清PLAP、CysLTR1水平,生后7 d血清FLAP、LTC4S和CysLTR1水平,生后14 d血清LTC4S水平可作为BPD早期诊断的生物学指标。

半胱氨酰白三烯受体与脑损伤关系的研究进展

近年来发现,半胱氨酰白三烯CysLT1和CysLT2受体参与整体水平脑缺血和脑外伤后神经损伤。CysLT1受体调节脑缺血后血脑屏障通透性增高、血管性脑水肿,介导星形胶质细胞增殖及炎症反应;CysLT2受体调节脑缺血后AQP4表达增加、细胞性脑水肿,介导星形胶质细胞损伤;新发现的GPR 17也与脑缺血损伤有密切关系。加深CysLT受体在脑损伤及神经保护中作用的认识,将为CysLT受体作为药物靶点筛选和开发防治脑损伤的药物提供新的途径。

半胱氨酰白三烯受体2多克隆抗体制备及其鉴定

目的:制备半胱氨酰白三烯受体2(CysLT2)多克隆抗体,并鉴定其免疫学特性及应用。方法:以KLH偶联的CysLT2受体多肽免疫家兔制备抗体,用间接ELISA法测定抗体效价,以抗原阻断法测定抗体敏感性及特异性;同时,以新制备的抗体进行Western blot和免疫组化,检测CysLT2受体的组织表达。结果:ELISA测定显示,获得的家兔抗CysLT2受体抗体的效价大于1/1 047 296,对CysLT2受体的特异性强,对CysLT1受体和GPR17基本无交叉反应。Western blot结果显示,CysLT2受体在大鼠、小鼠肾、脑和肺中有较高的表达,其分子量在40 kD左右。免疫组化结果表明,CysLT2受体主要表达在大鼠神经元,也表达在部分星形胶质细胞。结论:制备的CysLT2受体多克隆抗体具有高效价和高特异性,能满足Western blot和免疫组化检测的要求。

N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘大鼠CXCL8-CXCR1/2及TRPV1神经元敏感性的影响

目的探究N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘大鼠CXC趋化因子配体(CXCL)8-CXC趋化因子受体(CXCR)1/2及瞬时受体电位通道蛋白(TRP)V1神经元敏感性的影响。方法选取80只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(NO)组、模型(MO)组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、急支糖浆(ES)组,每组20只,对MO组、NAC组、ES组进行支气管哮喘建模,建模成功后,NAC组、ES组每天分别于腹腔内注射2 ml N-乙酰半胱氨酸注射液、急支糖浆灌胃10 g/kg剂量,NO组、MO组同期灌胃同体积生理盐水,通过苏木素-伊红(HE)染色法检测肺组织病理形态、酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹检测血清及肺组织中CXCL8、CXCR1、CXCR2、TRPV1含量、mRNA及蛋白表达,并分析N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘大鼠CXCL8-CXCR1/2及TRPV1神经元敏感性。结果与NO组相比,MO组咳嗽次数明显增加(P<0.05),而NAC组、ES组与MO组相比,其咳嗽次数明显降低(P<0.05),且NAC组比ES组降低明显(P<0.05);与NO组相比,MO组细支气管管腔、肺泡腔内可见渗出液、脱落的上皮细胞等,远端肺泡可见局部肺不张及周围肺大泡,且肺间质明显增厚,炎性细胞浸润明显,而与MO组比较,ES组、NAC组症状明显减少,部分肺间质的组织结构趋向正常,部分肺泡轻度扩张,且NAC组比ES组明显降低(P<0.05);与NO组对比,MO组CXCL8、CXCR1、CXCR2、TRPV1含量、mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.05),NAC组、ES组与MO组相比均显著降低(P<0.05),且NAC组比ES组明显降低(P<0.05)。结论N-乙酰半胱氨酸可以显著降低咳嗽次数,减少支气管哮喘症状,可使CXCL8-CXCR1/2及TRPV1神经元敏感性显著降低。

肺炎支原体感染对BALB/c小鼠肺组织半胱氨酰白三烯及其受体表达的影响

目的探讨肺炎支原体(MP)感染对BALB/c小鼠肺组织半胱氨酰白三烯(CysLTs)及其受体(CysLTs-R)表达的影响。方法100只BALB/c小鼠随机分成肺炎支原体感染组(MP组)和PBS对照组(N组),每组50只,分别于接种后3 d、7 d、14 d、21 d和30 d从各组中取5只小鼠,取其肺组织,收集肺泡灌流液(BALF),用ELISA试剂盒检测CysLTs的含量;同时将肺脏固定于中性甲醛中,制作病理切片,HE染色观察病理组织学变化;免疫组织化学技术检测CysLTs-R的表达情况;用Western blot实验检测肺组织中CysLTs-R的表达变化。结果病理组织学观察结果显示,MP感染BALB/c小鼠3 d后,即出现间质性炎症改变,7 d后炎症明显,14 d后炎症逐渐减轻并于30 d时基本消退;ELISA检测结果表明,与N组比较,MP组BALF中CysLTs含量明显增高(P<0.05),于感染后7 d和14 d达到高峰,而后呈下降趋势;免疫组化结果显示,在MP感染后,CysLTs-R蛋白在气管上皮细胞表面的表达增强;Western blot结果显示MP组小鼠于感染后3 d、7 d、14 d、21 d和30 d,肺组织中CysLTs-R蛋白的表达量均高于N组。结论 MP感染可以显著增加正常BALB/c小鼠中CysLTs及CysLTs-R的表达水平。

半胱氨酰白三烯受体拮抗剂pranlukast对小鼠局灶性脑缺血的治疗作用

目的观察半胱氨酰白三烯受体拮抗剂pranlukast(ONO 1078)在小鼠局灶性脑缺血后的治疗作用。方法采用大脑中动脉阻塞造成小鼠持续性局灶性脑缺血,缺血后1、6、24h分别给小鼠腹腔注射pranlukast或依达拉奉,观察药物对缺血24、48h后的神经功能缺损症状,48h后的脑梗死体积、两侧大脑半球比值、神经元密度的影响。结果Pranlukast 01、02mg·kg-1及依达拉奉3、10mg·kg-1均能减轻神经症状、减小脑梗死体积、降低缺血侧/非缺血侧大脑半球比值、减轻海马CA1区、皮层和纹状体的神经元密度降低。结论Pranlukast脑缺血后给药对脑损伤有治疗作用,提示有治疗缺血性脑卒中的临床前景。

5-脂氧酶/半胱氨酰白三烯受体及组胺/组胺受体与脑疾病

脑疾病的神经生物学基础研究,对于疾病防治和脑功能认识都有积极意义。脑疾病涉及面极广,其中,相关的神经调质及其受体近年来受到关注。例如,在脑缺血与外伤等损伤性病变中,脑内5-脂氧酶/半胱氨酰白三烯受体系统有明显变化;癫痫、痴呆等病变中,脑内组胺系统发挥重要的调节作用。深入研究这些变化特点,有助于认识脑疾病发生机制,并研制出新的治疗药物。