乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADR外泌体传递tTG参与MCF-7细胞耐药的研究

目的:研究乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADR通过外泌体传递tTG参与敏感细胞MCF-7耐药的过程。方法:本实验首先培养MCF-7、MCF-7/ADR细胞,然后检测MCF-7、MCF-7/ADR细胞中外泌体的含量,并将外泌体提取后备用。MCF-7/ADR细胞外泌体(EXO/ADR)与MCF-7细胞共培养建立MCF-7的外泌体耐药细胞(MCF-7+EXO/ADR)。使用Western blot法检测MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR细胞中的tTG蛋白的表达水平,使用流式细胞术分别检测敏感细胞株外泌体(EXO/S)、耐药细胞株外泌体(EXO/ADR)中tTG的表达水平。使用CCK-8法分别检测MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR细胞对阿霉素的敏感性情况。结果:实验结果显示,在EXO/S、EXO/ADR中均可以表达CD63、TSG101,但是较低表达Calnexin。经过流式细胞术检测发现,EXO/S、EXO/ADR中的tTG表达水平分别为(18.3±3.63)%、(46.07±8.31)%,二者tTG的表达有明显差异。经过Western blot检测MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR细胞中tTG的表达情况,我们发现MCF-7+EXO/ADR细胞的tTG表达水平较MCF-7细胞升高。MCF-7、MCF-7/ADR和MCF-7+EXO/ADR细胞对阿霉素的IC50分别为(1.91±0.18)μg/mL、(82.11±3.51)μg/mL、(6.16±1.15)μg/mL。结论:MCF-7/ADR细胞可能经分泌外泌体来传递tTG参与MCF-7细胞对阿霉素耐药的过程。

GSTP1通过调控STAT3信号通路促进乳腺癌细胞增殖与阿霉素耐药

目的 探讨谷胱甘肽S-转移酶P1(GSTP1)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与阿霉素耐药性的影响及其作用机制。方法 Western blotting检测野生型乳腺癌细胞MCF-7和阿霉素耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR中的GSTP1表达量,通过在MCF-7细胞中转染Flag-GSTP1质粒过表达GSTP1,在MCF-7/ADR细胞中转染GSTP1敲低慢病毒(shGSTP1)干扰GSTP1表达;平板克隆形成实验、CCK-8法和流式细胞术检测转染后乳腺癌细胞的增殖能力、阿霉素耐药性及凋亡水平的变化。Western blotting检测GSTP1表达水平的变化对STAT3通路激活的影响。结果 GSTP1在MCF-7细胞中表达量极低,且显著低于MCF-7/ADR细胞系。GSTP1过表达的MCF-7/ADR细胞克隆形成数量显著多于野生型MCF-7细胞(P<0.05)。过表达GSTP1显著提升了MCF-7细胞的增殖能力,而在MCF-7/ADR细胞系干扰GSTP1表达水平后显著抑制了细胞增殖能力(P<0.05)。CCK-8结果显示,在0.1、1、10、50μmol/ml不同浓度的阿霉素处理下,GSTP1表达水平与MCF-7细胞对阿霉素的耐药性呈正相关(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,GSTP1过表达组(Flag-GSTP1)和对照组(Flag)的凋亡率分别为(11.41±1.16)%和(21.1±1.72)%,GSTP1过表达显著抑制了阿霉素诱导的细胞凋亡(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,GSTP1的过表达激活了STAT3信号通路,同时在MCF-7/ADR细胞系中抑制STAT3显著降低了GSTP1的表达水平(P<0.05)。结论 GSTP1通过上调STAT3表达调节乳腺癌细胞MCF-7的增殖能力和对阿霉素的耐药性。

基于网络药理学技术探讨化痰散结方对阿霉素耐药乳腺癌PI3K-Akt-mTOR信号通路相关蛋白的影响

目的：基于网络药理学建立多柔比星/阿霉素耐药相关的蛋白质相互作用网络并通体外实验研究探究化痰散结方逆转耐药的相关分子学机制。方法：筛选pubmed中人类OMMIM遗传数据库的乳腺癌多柔比星/阿霉素耐药相关基因,应用STRING软件进行文本挖掘并建立蛋白质相互作用网络;将互作数据读入Cytoscape3.4.0,分别应用插件JEPETTO 1.3.1和MCODE1.4.2实现拓扑分析和聚类分析;使用Cytoscape中的插件Clusterviz进一步挖掘网络中可能包含的分子复合物;将所得复合物导入DAVID,富集其中的分子复合物通路。针采用MTT法、Western Blot法对细胞及关键通路进行体外实验研究,进而观察化痰散结方对MCF-7/ADR细胞增殖及相关信号通路表达的影响。结果：乳腺癌多柔比星/阿霉素耐药蛋白质网络是一个多基因构成的网络并且由多信号通路协同发挥调节作用,并非简单由单基因或信号通路调控;在所得相互作用网络中,PI3K-Akt-mTOR很可能作为＂关键节点＂发挥调控作用;化痰散结方含药血清能够抑制MCF-7/ADR细胞的增值,其内在分子学机制可能与抑制PI3K-Akt-mTOR通路的表达有关。结论：化痰散结方能够逆转人乳腺癌多柔比星/阿霉素耐药,其耐药相关蛋白质相互作用网络复杂,其中PI3K-Akt-mTOR很可能是其中的关键调控点,而化痰散结方抑制MCF-7/ADR细胞增殖的作用机制之一是抑制PI3K-Akt-mTOR通路的表达。

FOXM1转录激活HJURP介导有氧糖酵解促进乳腺癌细胞的阿霉素耐药性

目的本研究旨在阐明乳腺癌中有氧糖酵解调控阿霉素耐药的作用机制。方法生信分析乳腺癌组织中霍利迪连接识别蛋白(HJURP)和叉头核蛋白1(FOXM1)的表达及其相关性,并分析HJURP的富集通路;qPCR检测HJURP和FOXM1在乳腺癌细胞中的表达;及在阿霉素耐药细胞中的表达。双荧光素酶实验和ChIP实验验证FOXM1与HJURP的结合关系;CCK-8检测细胞活力和IC 50值;Western blot检测糖酵解代谢途径相关的特定基因的表达;Seahorse XP96分析不同处理组的胞外酸化率(ECAR)和耗氧率(OCR),试剂盒检测各处理组细胞中丙酮酸、乳酸和ATP水平。结果HJURP在乳腺癌中高表达,富集在糖酵解通路上。细胞功能实验发现HJURP能够通过调节有氧糖酵解促进细胞阿霉素耐药性。此外FOXM1靶向结合HJURP,并在乳腺癌中高表达,与HJURP呈正相关。回复实验发现HJURP过表达能够逆转FOXM1敲低对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的抑制作用。结论本研究结果证明转录因子FOXM1能够激活HJURP的转录调节有氧糖酵解促进乳腺癌细胞阿霉素耐药性。

细胞因子诱导的杀伤细胞降低乳腺癌耐药细胞系对阿霉素的耐受效应

目的 :探讨细胞因子诱导的杀伤细胞 (cytokine inducedkiller,CIK)与化疗药物对多药耐药 (multidrugre sistance,MDR)肿瘤细胞产生协同杀伤效应的机制。方法 :用细胞培养法加细胞因子在体外诱导并扩增CIK细胞 ,应用MTT法测定CIK细胞、阿霉素及二者联合对靶细胞的杀伤活性 ,用流式细胞术检测靶细胞上P糖蛋白 (P gp)的表达和细胞内药物积累 ,用细胞免疫组化方法检测P gp在MDR靶细胞MCF7adr内的分布。结果 :CIK细胞可使MCF7adr细胞P gp的表达活性下降 82 .5 % ,耐药靶细胞内阿霉素积累增加 3.2倍 ,使联合杀伤率比单纯加阿霉素(同等剂量 )组增加 7.8倍 ,比单纯加CIK细胞 (相同效靶比 )组增加 1.3倍。结论 :CIK细胞可明显抑制MCF7adr肿瘤细胞系的P gp表达 ,可协同阿霉素提高对MCF7adr肿瘤细胞系的杀伤活性。

中药R_3(补骨脂抽提剂)对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF_7^(adr)多药耐药的逆转

耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF7adr具多药耐药（Multidxugresistance，MDR）表型。补膏脂抽提剂R3（粉剂）的无细胞毒浓度1：90（2mg／ml）、1：60（3mg／ml）及1：30（6mg／ml），可增加MCF7adr对可霉素（Adriamycin，ADM）的敏感性10．4倍、292倍及730倍。1：90R3＋异搏定（Vera－Pamil，VPL）10μM使MCF7adr对CAM敏感性由10．4倍增至122倍。提示二者有协同作用。流式细胞技术（FCM）显示R3可明显增加MCF7adr细胞内Rh0－123含量。免疫细胞化学技术结果示R3可完全抑制卜糖蛋白（P－glycoprotein，Pgp）表达，是时间依赖性，48小时后MCF7adr细胞Pgp表达完全消失。故提示Ra可能通过抑制Pgp功能，增加ADM在MCF7adr细胞中浓度调控MCF7adr的耐药性。

本芴醇衍生物LY980503逆转人乳腺癌多药耐药细胞株MCF/DOX对多柔比星的耐药性

目的 探讨本芴醇衍生物LY980 5 0 3对肿瘤多药耐药的逆转作用及其作用机理。方法 采用噻唑蓝 (MTT)法检测细胞毒作用 ;采用流式细胞术测定细胞内多柔比星 (Dox)浓度 ;应用人乳腺癌裸鼠移植瘤模型研究LY980 5 0 3对肿瘤多药耐药的体内逆转作用。结果 LY980 5 0 3在 4 .0 μmol·L- 1(非细胞毒剂量 )能大部逆转人乳腺癌耐Dox细胞株MCF/Dox对Dox的耐药性 ;药物蓄积实验表明 ,LY980 5 0 3能显著增加MCF/Dox细胞内Dox蓄积 ;10 μmol·L- 1LY980 5 0 3作用 96h能明显抑制MCF/Dox细胞mdr 1基因表达水平。将MCF/Dox细胞接种于裸鼠皮下 ,接种后d 4 2 ,合用LY980 5 0 3(2 0 0mg·kg- 1·d- 1×3,ig)的移植瘤体积 (0 .34± 0 .19)cm3较单用Dox的移植瘤体积 (0 .90± 0 .32 )cm3显著缩小。结论LY980 5 0 3在体外及体内均能有效逆转MCF/Dox细胞对Dox的耐药性。

沉默HuR的表达增加人乳腺癌耐药MCF-7/Adr细胞对多柔比星的敏感性

目的:研究RNA干扰人抗原R(human antigen R,HuR)基因的表达对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adr对多柔比星(doxorubicin)敏感性的影响。方法:构建靶向HuR基因的shRNA表达质粒(pGenesil-siHuR),稳定转染至MCF-7/Adr细胞,real-time PCR检测细胞中MDR1 mRNA的表达,Western blotting检测MCF-7/Adr细胞中由MDR1基因编码的P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达,MTT法检测pGenesil-siHuR转染后MCF-7/Adr细胞在多柔比星作用后的存活率和IC50,流式细胞术检测MCF-7/Adr细胞的凋亡率。结果:与未转染的MCF-7/Adr细胞比较,pGenesil-siHuR质粒转染MCF-7/Adr细胞中MDR1 mRNA的表达水平明显减低[(0.184±0.029)vs(1.203±0.026),P<0.01],P-gp表达水平明显降低。pGenesil-siHuR质粒转染MCF-7/Adr细胞后,MCF-7/Adr细胞对多柔比星的IC50从未转染的(148.2±2.3)nmol/L降至(42.9±0.4)nmol/L;经多柔比星处理后,pGenesil-siHuR质粒转染组MCF-7/Adr细胞的凋亡率明显上升[(34.6±1.1)%vs(1.1±0.2)%,P<0.01]。结论:RNA干扰HuR的表达能抑制MDR1基因的表达,增加耐药乳腺癌MCF-7/Adr细胞对多柔比星的敏感性。

中药方剂R_1对耐阿霉素人乳腺癌细胞P糖蛋白表达的影响

免疫细胞化学技术和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证实ＭＣＦ７ａｄｒ细胞Ｐ－糖蛋白（ＰＧＰ）过量表达，而ＭＣＦ７细胞无ＰＧＰ表达。１：６０Ｒ１（复方Ｒ１）和１：９０Ｒ１处理细胞２小时、３小时均使ＭＣＦ２ａｄｒ细胞ＰＧＰ表达下降，并且与药物作用时间和浓度有关。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析示ＭＣＦ１ａｄｒ细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ高表达，而ＭＣＦ７细胞无表达。１：６０Ｒ１、１：９０Ｒ１处理２小时或３小时均使ＭＣＦ７ａｄｒ细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达降低，且随着时间的延长而更加明显。浓度（１：６０Ｒ１，１：９０Ｒ１）改变对耐药细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达下降的影响程度无明显差异。结果提示Ｒ１的逆转作用机理之一可能与其从蛋白质和ｍＲＮＡ水平使耐药细胞ＰＧＰ表达下降．从而增加细胞内药物聚集量和抗癌药细胞毒性有关。

miR-34a与人乳腺癌细胞系MCF-7多柔比星耐药的关系

目的探讨miR-34a对人乳腺癌细胞系MCF-7多柔比星(Adr)耐药性的影响及其潜在分子机制。方法用低浓度逐步加量诱导法,建立MCF-7的Adr耐药细胞系(MCF-7/Adr),用miRNA芯片结合RT-qPCR筛选并验证miRNA在MCF-7/Adr及MCF-7细胞中的表达差异;用生物信息学软件对miR-34a进行基因靶向预测;通过miR-34a模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)转染实验结合MTT、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)观察miR-34a的表达变化对细胞耐药性的影响,western blot检测转染后Notch1蛋白表达水平。结果成功构建MCF-7/Adr耐药亚系;与MCF-7细胞相比,MCF-7/Adr中有156个差异表达miRNA;其中miR-34a的表达水平明显降低(t=11.597,P=0.000)。与阴性对照组相比,转染miR-34a mimic后MCF-7/Adr细胞miR-34a表达水平增高(t=8.013,P=0.001),且增加了对Adr的敏感性(t=18.160,P=0.000);转染miR-34a inhibitor后MCF-7细胞miR-34a的表达水平降低(t=9.979,P=0.000),且降低了对Adr的敏感性(t=4.130,P=0.009)。靶基因预测结果显示,Notch1为miR-34a的特异性靶基因。western blot结果表明,与空白对照组和阴性对照组相比,MCF-7/Adr细胞转染miR-34a mimic后,Notch1蛋白的表达水平下降(F=64.949,P=0.000)。MCF-7细胞转染miR-34a inhibitor后,Notch1蛋白的表达水平升高(F=10.938,P=0.010)。结论 MCF-7/Adr及MCF-7细胞miRNA表达谱存在差异;miR-34a参与调节细胞对Adr的耐药过程,Notch1基因可能是调控靶基因之一。

芳香烃受体(AhR)在乳腺癌中的表达及其与阿霉素化疗耐药的相关性

目的观察芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)在乳腺癌组织中的表达,并探讨乳腺癌细胞AhR表达与阿霉素化疗耐药的关系。方法应用免疫组化染色法观察AhR在50例乳腺癌标本中的表达,其中淋巴结转移癌40例,正常乳腺组织10例。采用AhR-siRNA表达载体和脂质体法瞬时转染基因沉默AhR高表达的乳腺癌细胞株MCF-7/ADR;RT-PCR和Western bolt法检测转染后AhR mRNA及蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖活性及转染前后乳腺癌细胞对阿霉素敏感性的变化。结果 AhR在乳腺癌组织表达率为82.0%(46/50)、在乳腺癌转移淋巴结中表达率为92.5%(37/40),而在正常乳腺组织中10%(1/10)有表达。乳腺癌及乳腺癌转移淋巴结中AhR的表达均显著高于正常乳腺组织(P<0.05)。基因沉默AhR高表达的乳腺癌细胞株MCF-7/ADR后24h,PCR和免疫印迹结果均显示乳腺癌细胞株AhR基因及蛋白表达水平降低。MTT显示AhR基因沉默对乳腺癌MCF-7/ADR细胞的增殖活性有显著的抑制作用,48h细胞增殖抑制率可达52%。AhR沉默后乳腺癌细胞对阿霉素的半数有效浓度(IC50)由(18.2±0.9)μmol/L降低至(8.4±1.1)μmol/L(P<0.05)。结论 siAhR能够有效抑制AhR基因的表达,降低乳腺癌细胞的增殖能力。AhR对阿霉素耐药过程发挥作用,沉默AhR表达能一定程度上逆转阿霉素耐药现象。

MiR-186-5p通过靶向调控RAB2A在乳腺癌细胞阿霉素耐药性中的逆转作用机制

目的探讨miRNA-186-5p在乳腺癌细胞阿霉素耐药性逆转作用中的分子机制。方法采用阿霉素诱导人乳腺癌细胞系MCF-7,建立阿霉素耐药性细胞株,命名为MCF-7/ADR;采用双荧光素酶实验检测miR-186-5p与RAB2A的靶向结合情况;采用qRT-PCR和Western blot分别检测细胞中miR-186-5p、RAB2A mRNA的表达及RAB2A蛋白的表达情况;特异性上调MCF-7/ADR中的miR-186-5p,下调MCF-7中的miR-186-5p后,采用CCK-8和Western blot分别检测乳腺癌细胞增殖情况以及RAB2A蛋白的表达;采用Western blot和CCK-8分别检测共转染后,细胞增殖情况的变化及PI3K/Akt信号通路的激活情况。结果双荧光素酶实验结果显示,RAB2A是miR-186-5p的直接靶点;qRT-PCR结果显示,在MCF-7/ADR细胞中miR-186-5p mRNA表达明显下调,而RAB2A mRNA表达没有明显变化,RAB2A的蛋白表达明显上调。特异性上调MCF-7/ADR中的miR-186-5p,其增殖能力明显下降,RAB2A蛋白的表达明显下调;下调MCF-7中的miR-186-5p,其增殖能力明显增加,RAB2A蛋白的表达明显上调。Western blot和CCK-8结果显示,过表达miR-186-5p使PI3K/Akt信号通路表达明显减弱,且上调RAB2A逆转了上调miR-186-5p所致的增殖能力的减弱。结论 miR-186-5p通过靶向调控RAB2A,经PI3K/Akt信号通路调控乳腺癌细胞的阿霉素耐药和增殖。

多柔比星与槲皮素联载胶束逆转乳腺癌多药耐药研究

目的:以聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PEG-PLGA)为载体,构建多柔比星(DOX)与槲皮素(QUE)的PEG-PLGA/DOX+QUE联载胶束,并对其逆转乳腺癌多药耐药效果进行评价。方法:采用透析袋法制备载PEG-PLGA/DOX+QUE联载胶束,并对该药物递送系统的理化性质、体外释放特性、药效学以及安全性进行系统评价。结果:所制得的PEG-PLGA/DOX+QUE联载胶束平均粒径为(58. 2±5. 6) nm,联载胶束中DOX与QUE的载药量分别为(9. 12±0. 97)%和(8. 34±0. 92)%;细胞摄取实验结果表明联载胶束中的QUE可有效抑制乳腺癌耐药(MCF-7/ADR)细胞对DOX的外排作用,且PEGPLGA/DOX+QUE联载胶束对MCF-7/ADR细胞的细胞毒性显著大于游离DOX、游离DOX+QUE及PEG-PLGA/DOX胶束;体内药效学结果显示PEG-PLGA/DOX+QUE联载胶束可有效抑制荷瘤小鼠皮下瘤生长,并且显示出良好的生物相容性。结论:PEG-PLGA/DOX+QUE联载胶束可有效逆转乳腺癌多药耐药,增强对耐药肿瘤细胞的毒性作用,是一种有应用前景的抗肿瘤药物递送系统。

褪黑素逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADM对阿霉素耐药的作用机制

目的：探讨生理浓度（10^-9mol/L）和药理浓度（≥10^-5mol／L）褪黑素对耐阿霉素乳腺癌细胞系MCF-7／ADM耐药的逆转作用及其机制。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测经不同浓度的褪黑素孵育后，阿霉素对MCF-7／ADM细胞系半数抑制浓度IC50的改变。在电镜下观察单用阿霉素（20ug／ml）以及药理浓度的褪黑素（10^-5mol/l）孵育后再应用阿霉素（20ug／ml）后MCF-7／ADM细胞超微结构的变化。应用分光光度法测定MCF-7／ADM和MCF-7/s细胞内GSH水平及褪黑素孵育后MCF-7／ADM和MCF-7／s细胞内GSH水平变化。结果：褪黑素孵育前阿霉素作用于MCF-7／ADM的IC50值为24．41ug／ml。经生理浓度（10^-9mol／1）的褪黑素孵育后阿霉素IC50值为20．92ug／ml，两者经比较未见显著性差异（P=0．356）。经浓度为10^-5mol／L和10^-3mol／L的褪黑素孵育后阿霉素作用于MCF-7／ADMIC50值分别成为12．25ug／ml和10．46ug／ml，与孵育前阿霉素作用于MCF-7／ADM的IC50（24．41ug／ml）相比差异均具有显著性（P〈O．01）。在电镜下均可观察到，经药理浓度（10^-5mol／l）的褪黑素孵育后，阿霉素（20ug／ml）对细胞的损伤更为严重。经分光光度法测得MCF-7／ADM细胞内GSH水平明显高于MCF-7／s，生理浓度褪黑素并不能使MCF-7／ADM和MCF-7／s细胞内GSH水平明显降低（P=0．965），而药理浓度的褪黑素可以显著降低MCF-7／ADM和MCF-7／s细胞内GSH水平且具有一定的浓度依赖性（P〈0．01）。结论：生理浓度的褪黑素对MCF-7／ADM的耐药未见明显影响，药理浓度的褪黑素对MCF-7/的ADM耐药性具有较明显逆转作用，其逆转机制可能与褪黑素对细胞内GSH水平调控有关。

胡椒碱对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM细胞的逆转作用

目的探讨胡椒碱对人乳腺癌阿霉素(ADM)耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转作用及其机制。方法采用CCK-8法观察胡椒碱联合阿霉素(ADM)对乳腺癌耐药株MCF-7/ADM细胞生长增殖的影响;应用免疫印迹技术(Western-blot)测定胡椒碱联合ADM对MCF-7/ADM细胞表面P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。结果 60,80,100μmol/L胡椒碱试验组细胞耐药逆转倍数分别为1.62,2.08,3.78倍,差异有统计学意义(P<0.05)。胡椒碱能显著抑制MCF-7/ADM细胞膜P-gp蛋白的表达,其作用随浓度的增加而增强。结论胡椒碱与ADM共同作用于MCF-7/ADM细胞,可使细胞对ADM的敏感性增强。胡椒碱具有部分逆转MCF-7/ADM细胞耐药的作用,其逆转作用机制可能与通过下调P-gp的表达有关。

解毒胶囊干预乳腺癌阿霉素耐药PTEN-PI3K/AKT信号通路的进展及机制

该文对解毒胶囊治疗乳腺癌的机制进行了研究,主要从阿霉素耐药PTEN-PI3K/AKT信号通路进行分析探讨,综述了解毒胶囊对乳腺癌阿霉素耐药的近况以及研究进展,说明了解毒胶囊干预乳腺癌阿霉素耐药具有很好的发展前景。

龙葵碱通过抑制Med19表达增加多柔比星耐药乳腺癌细胞对多柔比星的敏感性

目的探讨龙葵碱(solanine)对乳腺癌细胞多柔比星耐药性的影响及其机制。方法选用乳腺癌细胞MCF-7细胞和对阿霉素(adriamycin,ADM)或多柔比星耐药的乳腺癌细胞MCF-7/ADR细胞,转染pcDAN-Med19过表达中介体19(mediator 19,Med19),应用CCK-8法检测细胞增殖水平,qRT-PCR和Western blot检测细胞中Med19和凋亡相关Bcl-2、Bax及Cleaved-Caspase-3表达水平,TUNEL染色和流式细胞术分析细胞凋亡水平。结果龙葵碱显著降低MCF-7/ADM细胞活力。Med19高表达于MCF-7/ADM细胞,龙葵碱显著抑制MCF-7/ADM细胞中Med19表达,龙葵碱对多柔比星处理的MCF-7/ADM细胞活力的降低、凋亡的促进、凋亡相关蛋白Bax和Cleaved-Caspase-3水平的上调及Bcl-2水平的下调可被过表达Med19明显抑制。结论龙葵碱通过抑制Med19表达而降低乳腺癌细胞MCF-7/ADM对多柔比星的耐药性。

Alopecurone B逆转人乳腺癌细胞MCF-7阿霉素耐药株活性研究

目的研究黄酮化合物Alopecurone B(APB)对人乳腺癌细胞阿霉素耐药株MCF-7/ADR多药耐药的逆转活性及逆转机制。方法人乳腺癌细胞阿霉素耐药株MCF-7/ADR维持在含有250 ng/mL阿霉素的培养基中,使用MTT法、qPCR、Western blot和流式细胞术研究APB对耐药株P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响。结果 APB能逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药,抑制P-gp的功能,下调P-gp基因和蛋白的表达。结论 APB具有强效逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药的效果,其机制涉及对P-gp的调控。

米尔贝逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药的作用

目的探寻米尔贝类化合物尼莫克汀、米尔贝β1逆转人乳腺癌多药耐药细胞株(MCF-7/adr)多药耐药(multidrug resistance,MDR)的作用及机制。方法采用MTT比色法测定细胞生长抑制率及耐药指数;高效液相色谱(HPLC)检测细胞内阿霉素(ADR)的积累变化;荧光分光光度仪检测罗丹明123(Rh123)在肿瘤细胞内的积累;通过RT-PCR与流式细胞仪检测MDR1基因与P-糖蛋白(P-gp)表达的变化。结果 5μmol·L-1的尼莫克汀、米尔贝β1可明显增强MCF-7/adr对ADR的敏感性,增加细胞内ADR及Rh123的积累,且呈剂量依赖关系,不同程度降低MDR1和P-gp的表达。结论尼莫克汀、米尔贝β1对MCF-7/adr的耐药有一定的逆转作用,且尼莫克汀效果好于米尔贝β1。

阿霉素耐药的乳腺癌MCF-7/Adm细胞系的建立及其耐药特性

建立肿瘤耐药细胞系是研究肿瘤细胞的重要手段之一,也是探讨肿瘤多药耐药机制及其逆转的基础。采用大剂量间歇诱导法诱导MCF-7细胞,建立MCF-7/Adm耐药模型;MTT法检测耐药倍数;流式细胞术检测MCF-7细胞和MCF-7/Adm细胞中阿霉素的积累量;real-time PCR检测MCF-7/Adm细胞中ABCG2、ABCC1、ABCB1基因的表达。结果显示,阿霉素抑制MCF-7和MCF-7/Adm细胞存活的IC50值分别为0.535μg/mL和173.275μg/mL,耐药倍数为324;MCF-7细胞中的阿霉素积累量较MCF-7/Adm明显高;MCF-7/Adm细胞中mRNA水平ABCB1基因表达明显上调,ABCG2和ABCC1基因表达下调。成功获得对阿霉素耐药的人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adm,为进一步研究乳腺癌多药耐药机制及其逆转提供有利工具,并且对乳腺癌化疗药物的筛选具有一定的意义。