乳腺癌组织中乳腺癌扩增序列2与β-连环蛋白的表达及其相关性研究

目的探讨乳腺癌组织中乳腺癌扩增序列2(BCAS2)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达及其临床意义。方法用免疫组织化学法检测乳腺癌组织芯片中BCAS2和β-catenin的蛋白表达,并分析两者表达的相关性以及两者的表达率与乳腺癌患者临床病理特征的关系。用双荧光素酶报告基因实验验证BCAS2对β-catenin的调控作用。结果乳腺癌组织和癌旁组织中BCAS2的阳性表达率为75.7%和37.5%,β-catenin的阳性表达率为68.1%和27.1%,差异均有统计学意义(均P<0.001),且二者表达呈正相关(r=0.584,P<0.001)。BCAS2和β-catenin蛋白在淋巴结转移及临床分期为Ⅲ~Ⅳ级的患者中表达率明显增高,敲低BCAS2可显著抑制β-catenin的荧光素酶活性。结论 BCAS2及β-catenin在乳腺癌的发生发展中有作用,且二者表达呈正相关。

沉默乳腺癌扩增序列2基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的研究沉默乳腺癌扩增序列2(BCAS2)基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响。方法将细胞分3组:空白组、对照组和实验组。空白组细胞不做任何处理,对照组细胞转染空载体(3×10^(8)TU·mL^(-1),10μL),实验组细胞转染慢病毒载体pGLV3-GFP-shBCAS2(3×10^(8)TU·mL^(-1),10μL)。用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;用试剂盒法检检测Caspase-3活性(光密度值);蛋白质印迹法检测caspase-3蛋白表达(灰度值)。结果空白组、对照组和实验组的细胞凋亡率分别为(12.33±1.08)%,(12.56±0.77)%和(44.93±3.22)%;这3组的Caspase-3活性分别为1.00±0.06,1.02±0.07和3.91±0.70;这3组的caspase-3蛋白相对表达量分别为0.21±0.02,0.19±0.03和0.42±0.04。实验组与空白组和对照组相比,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论沉默BCAS2基因可诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其机制可能与caspase-3激活有关。

乳腺癌扩增序列2基因RNA干扰慢病毒载体的构建及对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响

目的构建乳腺癌扩增序列2(BCAS2)基因RNA干扰(RNAi)的细胞模型,研究BCAS2对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。方法将人乳腺癌MDA-MB-231细胞分为5组:空白组、对照组、3个干扰组。空白组细胞不做任何处理,对照组细胞转染对照慢病毒载体,干扰组细胞转染慢病毒载体pGLV3-GFP-shBCAS2(shBCAS2-1,2,3)。用实时荧光定量-PCR法和蛋白质印迹法分别检测转染后MDA-MB-231细胞中BCAS2基因及其蛋白表达水平,MTT法检测shBCAS2对MDA-MB-231细胞增殖能力(光密度值)的影响。结果空白组、对照组和3个干扰组的BCAS2基因表达量分别为1.00±0.07,0.99±0.08,0.21±0.06,0.48±0.13和0.37±0.12;这5组的蛋白相对表达量分别为1.32±0.04,1.33±0.04,0.23±0.06,0.54±0.09和0.77±0.07;干扰组与对照组相比,BCAS2基因与蛋白表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。第3天,干扰shBCAS2-1组和对照组的细胞增殖能力分别为0.70±0.04和0.84±0.02,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 shRNA干扰BCAS2可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖。