乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白(breast cancer anti-estrogen resistance 1,BCAR1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达以及临床意义。方法采用组织芯片(tissue microarray,TMA)和免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)检测2006年2月至2007年2月本中心70例NSCLC和癌旁正常肺组织,以及28例肺良性肿瘤(错构瘤12例,炎性假瘤8例,纤维瘤8例)中BCAR1的表达情况。结果 NSCLC中BCAR1蛋白阳性率为98.6%(69/70),癌旁正常肺组织中仅有3例弱阳性,阳性率为4.2%(3/70),肺良性肿瘤中无阳性表达,NSCLC与两者比较差异有显著性(χ2=143.93,P=0.000)。BCAR1表达在不同年龄、性别、淋巴结转移、TNM分期和病理类型表达差异无统计学意义(P>0.05),而与肿瘤分化程度呈负相关(χ2=13.639,P=0.001)。用Kaplan-Meier生存曲线经Log-rank检验发现,BCAR1高表达组预后比低表达组生存时间短(P=0.014)。结论在NSCLC中BCAR1蛋白表达显著高于正常组织和肺良性肿瘤,并与NSCLC的分化程度和预后呈负相关。BCAR1蛋白可以作为NSCLC诊断和判断预后一个重要的新指标。

人乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1基因siRNA慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建人乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1(Breast cancer anti-estrogen resistance 1,BCAR1)基因siRNA慢病毒载体,并进行鉴定。方法针对人BCAR1基因靶序列设计并合成4条siRNA序列(PLVT350、PLVT351、PLVT352、PLVT353)及1条阴性对照序列(PLVT4),分别退火后,插入经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切的慢病毒载体pMagic 4.1中,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,经PCR和DNA测序筛选阳性克隆,提取重组干扰质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞,进行慢病毒包装,浓缩后,采用梯度稀释法测定病毒滴度。将重组慢病毒感染A549细胞,荧光显微镜下观察感染效率,实时荧光定量PCR检测干扰效率,筛选干扰效果最好的重组慢病毒感染肺癌A549细胞,Western blot检测BCAR1蛋白的表达水平。结果成功构建了4种人BCAR1基因慢病毒干扰质粒,PLVT350、PLVT351、PLVT352和PLVT353的病毒滴度分别为3.45×108、2.13×108、3.01×108和2.47×108TU/ml;慢病毒感染3 d后,A549细胞的感染效率均达90%以上;除PLVT350外,其他3个均为有效靶点,PLVT351、PLVT352和PLVT353的沉默率分别为82%、73%和82%,BCAR1基因的表达量显著低于未转染和PLVT4组A549细胞(P<0.001);PLVT351感染的A549细胞中BCAR1蛋白的表达水平明显低于未感染和PLVT4组A549细胞(P<0.01)。结论成功构建了人BCAR1基因siRNA慢病毒载体,并建立了稳定表达的A549细胞株,为进一步探索BCAR1基因在肺癌中的相关功能及其分子机制奠定了基础。

乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1在食管鳞癌血清和组织中的表达及临床意义

目的探讨乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1（BCAR1）在食管鳞癌血清和组织中的表达及临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测2010年2月至2011年1月间46例食管鳞癌患者和25例正常人血清BCAR1水平；应用组织芯片和免疫组织化学方法检测2004年2月至2006年7月问106例食管鳞癌和癌旁正常组织中BCARl表达。结果食管鳞癌组BCAR1血清水平显著高于正常对照组（P〈0．01）；晚期食管鳞癌BCARl血清水平显著高于早期食管鳞癌组和正常对照组（P〈0．01）；切除肿瘤后，血清BCARl水平有逐渐下降趋势。BCAR1蛋白在食管鳞癌组织中阳性率为97％（103／106），癌旁正常食管组织中有16例弱阳性，阳性率为15％（16／106），两者差异有统计学意义（P〈0．01）；BCAR1阳性表达与食管鳞癌的分化明显相关（P〈0．05），与年龄、性别、淋巴结转移、浸润深度和TNM分期明显无关（P〉0．05）。生存分析提示BCARl高表达组生存时间少于低表达组（P〈0．01）；经COX模型多因素生存分析，显示BCARl表达和淋巴结转移为独立预后因素。结论食管鳞癌血清和组织中BCARl水平显著高于正常对照组，并与疾病进展、治疗效果、分化程度和预后相关，可作为食管鳞癌诊断和判断预后重要新的肿瘤分子标记。

乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白基因在子宫内膜样腺癌中的表达及意义

目的探讨乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白基因（BCAR1）在子宫内膜样腺癌中的表达及其意义。方法应用免疫组织化学方法检测50例子宫内膜样腺癌和30例子宫内膜单纯性增生组织中BCAR1的表达，并检测雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）在子宫内膜样腺癌的表达。分析BCAR1的表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征以及ER、PR的相关性。结果BCAR1在子宫内膜样腺癌组织中的表达[64．0％（32／50）]高于子宫内膜单纯性增生组织中的表达[40．0％（12／30）]，差异有统计学意义（x2=4．364，P=0．037）；在子宫内膜样腺癌中，BCAR1的高表达与患者高龄、肿瘤细胞低分化和ER的阳性表达相关（X2值分别为6．272、5．640、4．217，r值分别为0．354、0．366、0．290；P均〈0．05）。结论BCAR1促进子宫内膜样腺癌的发生，并与肿瘤细胞低分化和ER表达状态呈正相关。

乳腺癌组织中耐药相关蛋白的表达与雌激素、孕激素及原癌基因和预后关系探讨

目的探讨乳腺癌组织中P-糖蛋白(P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、肺耐药蛋白(LRP)的表达与病理特征、雌激素(ER)、孕激素(PR)、原癌基因C-erbB2及预后的关系。方法采用免疫组化法检测126例乳腺癌组织及42例相应癌旁组织中P-gp、BCRP、LRP蛋白的表达,与乳腺癌临床病理因素的关系采用Spearman等级相关分析,应用Kaplan-Meier法计算生存曲线。结果①乳腺癌组织中P-gp、BCRP及LRP阳性表达率分别为41.26%、38.89%和65.87%,明显高于癌旁组织中的表达(14.28%1,6.67%和19.05%),差异有统计学意义(P<0.05);LRP阳性表达高于P-gp和BCRP阳性表达率(χ2分别为21.3和28.6,P均<0.01);②P-gp阳性表达率与临床分期及腋窝淋巴结呈正相关(r=0.298、0.283,均P<0.01),BCRP阳性表达率与腋窝淋巴结转移正相关(r=0.369,P<0.01);LRP阳性表达率与临床分期有关(r=0.264,P<0.01);③P-gp、BCRP和LRP阳性表达率与C-erbB-2表达呈正相关(r=0.2825、.9422、.42,P<0.01或P<0.05);BCRP阳性表达率与ER和PR呈明显负相关(r=-0.354、-0.252,P<0.01)。④P-gp和BCRP阴性表达者5年总生存率分别为89.74%及48.98%,明显高于阳性表达者35.14%及29.63%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 P-gp、BCRP、LRP这3种耐药蛋白均参与了乳腺癌多药耐药的形成,P-gp和BCRP的表达可预测乳腺癌的预后,LRP不能作为评估乳腺癌生物学行为的指标。

雌激素受体、肺耐药蛋白和胸苷酸合成酶在乳腺癌的表达及临床意义

目的探讨人雌激素受体(ER)、肺耐药蛋白(LRP)和胸苷酸合成酶(TS)在乳腺癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组化技术检测130例临床病理资料完整的乳腺癌患者乳腺组织中ER、LRP和TS的表达情况。结果在乳腺腺瘤中ER、LRP和TS阳性表达率分别为41.67%(20/48)、25.00%(12/48)和43.75(21/48);乳腺癌中ER、LRP和TS阳性表达率分别为51.54%(67/130)、63.08%(82/130)和58.46%(76/130);其中LRP和TS在腺瘤中的阳性表达低于乳腺癌(P<0.05)。LRP、TS的表达与乳腺癌的组织学类型相关(P<0.05),TS、LRP表达与淋巴结转移相关(P<0.05),ER、LRP、TS表达与乳腺癌患者年龄及部位无关(P>0.05)。结论 ER、LRP和TS的表达与乳腺癌的发生发展有关,乳腺癌中LRP、TS的表达提示患者预后不良,联合检测它们是判断乳腺癌预后的有效指标,并可作为临床选择内分泌治疗或基因靶向治疗的指南。

抗肿瘤候选药物SPH0396与乳腺癌耐药蛋白的关系研究

目的 :评价SPH0396与乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的关系,从而推测其在临床上与其底物或抑制剂合用时发生药物-药物相互作用的可能性,为临床研究提供参考。方法 :采用Caco-2细胞模型,测定SPH0396(1μmol/L)的校正外排比(corrected efflux ratio,CER),并且以E3S为底物时1μmol/L和5μmol/L的SPH0396对BCRP的抑制率。结果 :SPH0396的校正外排比为1.33,对BCRP的抑制率不到阳性抑制剂KO143的50%。结论 :SPH0396不是BCRP潜在底物和抑制剂,因此SPH0396与BCRP的底物和抑制剂发生药物-药物相互作用的可能性很低。

乳腺癌3种耐药基因、p53蛋白、雌和孕激素受体的表达及相关性研究

目的研究多药耐药基因P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶π(GST-π)和DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、p53蛋白、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)在乳腺癌的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学SABC法,检测119例乳腺癌标本P-gp、GST-π、TopoⅡ、p53、ER和PR的表达。结果P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达率分别为52.1%、66.4%和66.4%,p53、ER、PR的表达率分别为56.3%、42.0%和41.2%;乳腺癌中有淋巴结转移组的p53表达率高于无淋巴结转移组(P<0.05),淋巴结转移组的GST-π、ER表达率低于无淋巴结转移组(P<0.05);GST-π、TopoⅡ与p53间表达呈正相关(P<0.05);P-gp、GST-π与ER间表达呈负相关(P<0.05)。结论p53基因与GST-π、TopoⅡ存在协同表达的关系,GST-π、ER阴性是某些乳腺癌对化疗药物不敏感,导致内分泌治疗失败及影响预后的因素。

从血脑屏障药物转运机制探究平痫冲剂的抗痫作用

目的观察平痫冲剂的抗痫作用,并探讨其作用机制。方法将62只3周龄Wistar大鼠随机分为空白组12只,造模组50只,采用戊四唑(pentetrazol,PTZ)腹腔注射制备癫痫模型;模型制备成功后,随机分成模型组、西药组及平痫冲剂组,每组各12只,西药组给予丙戊酸钠灌胃,平痫冲剂组给予平痫冲剂灌胃。干预7 d后,观察癫痫大鼠运动皮质区的组织形态结构;免疫组化、RT-qPCR以及Western blot检测大脑运动皮质区组织L型氨基酸转运体(L-type amino acid transporter,LAT)1、P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)的表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠大脑运动皮质区神经元数量减少(P<0.01),LAT1蛋白及mRNA表达下降(P<0.05),P-gp、BCRP及其mRNA表达升高(P<0.05)。与模型组比较,平痫冲剂组大鼠大脑运动皮质区神经元数量增多(P<0.05),神经元病理形态有所改善,LAT1及其mRNA表达升高(P<0.01),P-gp、BCRP及其mRNA表达下降(P<0.01)。结论平痫冲剂可能通过调控血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)药物转运体P-gp、BCRP、LAT1的表达,从而发挥抗痫作用。

中药方剂R_1对耐阿霉素人乳腺癌细胞P糖蛋白表达的影响

免疫细胞化学技术和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证实ＭＣＦ７ａｄｒ细胞Ｐ－糖蛋白（ＰＧＰ）过量表达，而ＭＣＦ７细胞无ＰＧＰ表达。１：６０Ｒ１（复方Ｒ１）和１：９０Ｒ１处理细胞２小时、３小时均使ＭＣＦ２ａｄｒ细胞ＰＧＰ表达下降，并且与药物作用时间和浓度有关。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析示ＭＣＦ１ａｄｒ细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ高表达，而ＭＣＦ７细胞无表达。１：６０Ｒ１、１：９０Ｒ１处理２小时或３小时均使ＭＣＦ７ａｄｒ细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达降低，且随着时间的延长而更加明显。浓度（１：６０Ｒ１，１：９０Ｒ１）改变对耐药细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达下降的影响程度无明显差异。结果提示Ｒ１的逆转作用机理之一可能与其从蛋白质和ｍＲＮＡ水平使耐药细胞ＰＧＰ表达下降．从而增加细胞内药物聚集量和抗癌药细胞毒性有关。

乳腺癌耐药相关蛋白在乳腺癌的表达及与临床病理参数相关性

目的探讨原发性乳腺癌中乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)表达与临床指标及病理参数的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测BCRP及雌激素受体α(ERα)、孕激素受体(PR)、HER-2、P53等病理参数的表达,应用Kruskal-Wallis秩和检验和Spearman相关性检验分析BCRP与临床指标及病理参数的相关性。结果原发性乳腺癌中BCRP表达阳性率64.39%,癌旁组织中BCRP表达阳性率33.33%,两者相比有显著性差异(X^2=9.323,P=0.002);BCRP表达水平与患者年龄、病理类型、临床分级及淋巴结转移无关,而与患者是否绝经有关,未绝经患者乳腺癌组织中BCRP表达水平显著高于已绝经患者(X^2=6.928,P=0.008);BCRP表达水平与ERα(r=0.204,P=0.019)和HER-2表达水平呈正相关(r=0.246,P=0.004),与PR、P53表达水平不具有相关性。结论乳腺癌中BCRP蛋白表达水平明显高于癌旁正常组织,其表达强度与与患者体内雌激素水平及ERα及HER-2强度正相关。

17β-雌二醇逆转乳腺癌耐药蛋白介导的多药耐药机制

目的探讨17β-雌二醇逆转乳腺癌耐药蛋白(BCRP)介导的非典型多药耐药的机制。方法分别通过药物诱导和转基因的方法建立由BCRP和巨细胞病毒(CMV)启动子启动表达BCRP的两种耐药细胞系MCF-7/MX20和MCF-7/BCRP,将耐药细胞培养在含有17β-雌二醇的培养基中,通过细胞毒性实验,外排实验以及定量PCR观察对不同耐药细胞系的逆转作用。结果培养基中加入17β-雌二醇48h后,MCF-7/BCRP细胞中的米托蒽醌的强度明显低于MCF-7/MX20,MCF-7/BCRP细胞中BCRP mRNA的含量明显高于MCF-7/MX20。17β-雌二醇可以抑制细胞中BCRP的表达和功能,但是不能抑制MCF-7/BCRP细胞中BCRP的表达和功能。结论17β-雌二醇不是作为BCRP的底物而抑制BCRP功能的,而可能是通过调控BCRP基因的启动子发挥作用。

乳腺癌耐药蛋白基因在乳腺癌中的表达及其与化疗疗效的关系

【目的】探讨乳腺癌患者的乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因表达及其与化疗疗效的关系。【方法】采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测60例行新辅助化疗CEF方案的女性乳腺癌患者乳腺癌组织的BCRP基因,根据化疗前BCRP基因表达情况,将60例患者分为阳性组及阴性组,比较2组间的疗效,观察BCRP基因表达与化疗疗效的关系。【结果】60例乳腺癌患者中BCRP基因阳性表达17例,阳性表达率为28.3%(17/60)。BCRP基因阳性组患者总缓解11例,缓解率(64.7%)明显低于阴性组(93.0%),两组比较差异有显著性意义(P<0.05)。【结论】BCRP基因高表达患者采用CEF方案化疗效果较差,BCRP基因的表达水平可以作为预测化疗效果的一个重要参考指标。

乳腺癌耐药蛋白的研究现状

乳腺癌耐药蛋白是一种新发现的耐药蛋白,其介导的多药耐药与P-糖蛋白(P-gp)不同,在肿瘤组织中的表达情况差异较大。笔者就乳腺癌耐药蛋白的结构特性及其介导的多药耐药及在肿瘤中的表达情况等研究现状作一综述。

关于乳腺癌耐药蛋白BCRP/ABCG2的研究进展

乳腺癌耐药蛋白是体内重要的跨膜半转运蛋白,是一种依赖ATP酶的半结合转运体,主要负责将内、外源性物质排至细胞外。乳腺癌耐药蛋白在体内分布广泛,胎盘、干细胞、血脑屏障、小肠及肾小管等重要组织中均有表达,是介导肿瘤细胞耐药的重要蛋白,是影响肿瘤药物临床用药个体差异的重要因素之一。本文就乳腺癌耐药蛋白的生理结构、组织分布及对体内药物代谢过程的影响等方面的研究进展作一综述。

通过抑制乳腺癌耐药蛋白的活性来研究果汁成分与达沙替尼的相互作用:一种饮料与药物相互作用的新机理

小分子的酪氨酸激酶抑制剂(TKI)是一组非常新颖且具有靶向性的抗癌药物。最近,研究发现大多数的TKI是受磷糖蛋白(P-gp)和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)调节的。然而,几乎没有证据表明受P-gp或BCRP调节的TKI与药物、食品或饮料有相互协同的作用。本研究的目的是评估西柚汁、橙汁、苹果汁和绿茶的主要营养成分,对P-gp和BCRP介导的达沙替尼药代作用的影响。通过对14种成分进行筛选,发现只有适量的橘皮素、川陈皮素对P-gp介导的达沙替尼的代谢作用有影响。相反,西柚汁中的四种成分(即,佛手柑素、6′,7′-二羟佛手甘油素(DHB)、槲皮素、山奈酚),橙汁中的两种成分(橘皮素、川陈皮素)和苹果汁中的一种成分(即橙皮素),在浓度为50μM(P<0.001)时,对BCRP-介导的达沙替尼失效有极大的抑制作用。通过进一步的浓度梯度研究表明,佛手柑素、DHB、橘皮素和川陈皮素是BCRP有效的抑制剂,半抑制浓度(IC 50值)分别为3.19、5.2、1.19、和1.04μM。并且在机体内果汁与TKI的相互作用的进一步研究也证实了这一点。现有的文献仅报道果汁、绿茶对CYP 3、P-gp和OATP有调节作用。本研究新发现的果汁成分对BCRP的强抑制作用,可能揭示了一种新的饮料与药物相互作用的机理。

乳腺癌耐药蛋白及其介导的多药耐药研究进展

最近发现的乳腺癌耐药蛋白(BCRP)是一种不同于P-糖蛋白等的新型多药耐药蛋白,属于ATP结合盒转运子蛋白亚家族成员,为半转运子,以二聚体形式形成活性转运复合体。药敏细胞中转染或过度表达BCRP可导致该细胞耐药,可预示白血病患者的化疗敏感性及预后。

耐药标志物金属硫蛋白在乳腺癌中的表达

目的 :探讨金属硫蛋白 (MT)在乳腺癌中表达的状况。方法 :采用免疫组化S -P方法。检测 5 7例乳腺癌中MT表达的情况。结果 :MT在乳腺癌组织中的总阳性率为 5 9.6 5 %。浸润性导管癌、单纯癌和髓样癌中MT的阳性率分别是 6 9.0 5 %、80 .0 0 %、10 .0 0 % ,髓样癌和其他组有显著性差异 (P <0 .0 1)。MT的表达与淋巴是否转移相关性不明显。结论

丹参酮ⅡA对人ER阴性乳腺癌细胞的生长抑制和多耐药逆转作用

目的研究丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA)对雌激素受体(ER)阴性人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)的生长抑制和多耐药逆转作用,并探讨其作用机制。方法用细胞增殖试验(MTT法)、克隆形成试验检测丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;Brdu掺入试验、流式细胞术检测丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞DNA合成、凋亡和细胞周期的影响;RT-PCR检测丹参酮ⅡA作用后腺苷二磷酸核糖聚合酶1(ADPRTL1)、细胞色素P450家族(CYP1A1)及乳腺癌耐药蛋白(BCRP/ABCG2)基因的表达水平,研究丹参酮ⅡA抑制MDA-MB-231细胞生长的作用机制及多耐药逆转作用。结果丹参酮ⅡA处理后,肿瘤细胞增殖活性降低(P<0.05),半效抑制浓度(IC50)为80ng/mL,且呈时间-剂量-效应关系;克隆形成下降(P<0.05),亦呈时间-剂量-效应关系;Brdu标记指数降低(P<0.05);细胞周期分布改变,凋亡指数升高(P<0.01),G0/G1期细胞数增加(P<0.01),S期和G2/M期细胞数减少(P<0.01);RT-PCR检测ADPRTL1、CYP1A1 mRNA表达上调(P<0.05),分别为对照组(未用丹参酮ⅡA处理)的2.44倍和1.58倍,BCRP/ABCG2 mRNA表达下调(P<0.05),仅为对照组的0.44倍。结论丹参酮ⅡA对人ER阴性乳腺癌细胞具有生长抑制、凋亡诱导和多耐药逆转作用,其作用机理可能与抑制DNA合成、细胞周期阻滞、上调凋亡相关基因ADPRTL1、CYP1A1及下调多耐药相关基因BCRP/ABCG2表达有关。

脑胶质瘤体外化疗药物敏感性试验与耐药基因蛋白表达的相关性研究

目的研究脑胶质瘤耐药相关基因蛋白的表达情况,分析其与化疗药物体外敏感性之间的相关性。方法采用组织培养药敏检测法测定50例脑胶质瘤标本对五种不同类型化疗药物:顺铂(cisplatin,DDP)、长春新碱(vincristine,VCR)、替尼泊甙(teniposide,VM26)、尼莫司汀(nimustine,ACNU)和替莫唑胺(temozolomide,TMZ)的体外敏感性(通过计算体外抑制率);同时在组织芯片平台上,运用免疫组织化学法检测耐药相关蛋白O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)、P-170、TopoⅡ、谷胱苷肽-S-转移酶π(GST-π)的表达,并用免疫组织化学法和原位杂交法检测P53蛋白及p53基因的表达。结果①ACNU体外抑制率与GST-π表达水平之间呈显著性负相关(r=-0.318,P<0.05)。②耐药相关蛋白GST-π与P-170、TopoⅡ表达水平之间呈显著性相关(r分别为0.317和-0.298,P<0.05)。③突变型P53蛋白与野生型p53mRNA之间呈显著性负相关(r=-0.806,P<0.001)。④突变型P53蛋白与TopoⅡ表达水平之间呈显著性相关(r=0.401,P<0.01)。结论肿瘤体外药敏试验结合耐药相关基因蛋白的检测,对于胶质瘤个体化化疗方案的制定及临床化疗疗效的预测等具有重要意义。