人乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1基因siRNA慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建人乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1(Breast cancer anti-estrogen resistance 1,BCAR1)基因siRNA慢病毒载体,并进行鉴定。方法针对人BCAR1基因靶序列设计并合成4条siRNA序列(PLVT350、PLVT351、PLVT352、PLVT353)及1条阴性对照序列(PLVT4),分别退火后,插入经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切的慢病毒载体pMagic 4.1中,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,经PCR和DNA测序筛选阳性克隆,提取重组干扰质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞,进行慢病毒包装,浓缩后,采用梯度稀释法测定病毒滴度。将重组慢病毒感染A549细胞,荧光显微镜下观察感染效率,实时荧光定量PCR检测干扰效率,筛选干扰效果最好的重组慢病毒感染肺癌A549细胞,Western blot检测BCAR1蛋白的表达水平。结果成功构建了4种人BCAR1基因慢病毒干扰质粒,PLVT350、PLVT351、PLVT352和PLVT353的病毒滴度分别为3.45×108、2.13×108、3.01×108和2.47×108TU/ml;慢病毒感染3 d后,A549细胞的感染效率均达90%以上;除PLVT350外,其他3个均为有效靶点,PLVT351、PLVT352和PLVT353的沉默率分别为82%、73%和82%,BCAR1基因的表达量显著低于未转染和PLVT4组A549细胞(P<0.001);PLVT351感染的A549细胞中BCAR1蛋白的表达水平明显低于未感染和PLVT4组A549细胞(P<0.01)。结论成功构建了人BCAR1基因siRNA慢病毒载体,并建立了稳定表达的A549细胞株,为进一步探索BCAR1基因在肺癌中的相关功能及其分子机制奠定了基础。

乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1在食管鳞癌血清和组织中的表达及临床意义

目的探讨乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1（BCAR1）在食管鳞癌血清和组织中的表达及临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测2010年2月至2011年1月间46例食管鳞癌患者和25例正常人血清BCAR1水平；应用组织芯片和免疫组织化学方法检测2004年2月至2006年7月问106例食管鳞癌和癌旁正常组织中BCARl表达。结果食管鳞癌组BCAR1血清水平显著高于正常对照组（P〈0．01）；晚期食管鳞癌BCARl血清水平显著高于早期食管鳞癌组和正常对照组（P〈0．01）；切除肿瘤后，血清BCARl水平有逐渐下降趋势。BCAR1蛋白在食管鳞癌组织中阳性率为97％（103／106），癌旁正常食管组织中有16例弱阳性，阳性率为15％（16／106），两者差异有统计学意义（P〈0．01）；BCAR1阳性表达与食管鳞癌的分化明显相关（P〈0．05），与年龄、性别、淋巴结转移、浸润深度和TNM分期明显无关（P〉0．05）。生存分析提示BCARl高表达组生存时间少于低表达组（P〈0．01）；经COX模型多因素生存分析，显示BCARl表达和淋巴结转移为独立预后因素。结论食管鳞癌血清和组织中BCARl水平显著高于正常对照组，并与疾病进展、治疗效果、分化程度和预后相关，可作为食管鳞癌诊断和判断预后重要新的肿瘤分子标记。

乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白(breast cancer anti-estrogen resistance 1,BCAR1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达以及临床意义。方法采用组织芯片(tissue microarray,TMA)和免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)检测2006年2月至2007年2月本中心70例NSCLC和癌旁正常肺组织,以及28例肺良性肿瘤(错构瘤12例,炎性假瘤8例,纤维瘤8例)中BCAR1的表达情况。结果 NSCLC中BCAR1蛋白阳性率为98.6%(69/70),癌旁正常肺组织中仅有3例弱阳性,阳性率为4.2%(3/70),肺良性肿瘤中无阳性表达,NSCLC与两者比较差异有显著性(χ2=143.93,P=0.000)。BCAR1表达在不同年龄、性别、淋巴结转移、TNM分期和病理类型表达差异无统计学意义(P>0.05),而与肿瘤分化程度呈负相关(χ2=13.639,P=0.001)。用Kaplan-Meier生存曲线经Log-rank检验发现,BCAR1高表达组预后比低表达组生存时间短(P=0.014)。结论在NSCLC中BCAR1蛋白表达显著高于正常组织和肺良性肿瘤,并与NSCLC的分化程度和预后呈负相关。BCAR1蛋白可以作为NSCLC诊断和判断预后一个重要的新指标。

中药方剂R_1对耐阿霉素人乳腺癌细胞P糖蛋白表达的影响

免疫细胞化学技术和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证实ＭＣＦ７ａｄｒ细胞Ｐ－糖蛋白（ＰＧＰ）过量表达，而ＭＣＦ７细胞无ＰＧＰ表达。１：６０Ｒ１（复方Ｒ１）和１：９０Ｒ１处理细胞２小时、３小时均使ＭＣＦ２ａｄｒ细胞ＰＧＰ表达下降，并且与药物作用时间和浓度有关。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析示ＭＣＦ１ａｄｒ细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ高表达，而ＭＣＦ７细胞无表达。１：６０Ｒ１、１：９０Ｒ１处理２小时或３小时均使ＭＣＦ７ａｄｒ细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达降低，且随着时间的延长而更加明显。浓度（１：６０Ｒ１，１：９０Ｒ１）改变对耐药细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达下降的影响程度无明显差异。结果提示Ｒ１的逆转作用机理之一可能与其从蛋白质和ｍＲＮＡ水平使耐药细胞ＰＧＰ表达下降．从而增加细胞内药物聚集量和抗癌药细胞毒性有关。

乳腺癌组织中BCAR1 p130Cas蛋白的表达及其临床意义

目的：探讨BCAR1／p130Cas蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌内分泌治疗耐药及预后的关系。方法：选择ER阳性且经过规范化内分泌治疗和随访5年资料完整的乳腺癌患者67例，应用免疫组化方法检测其BCAR1／p130Cas蛋白表达情况，回顾性分析BCAR1／p130Cas蛋白表达与乳腺癌的临床生物学特征及预后的关系。结果：在发生局部复发或远位转移的29例患者中，25例呈现BCAR1／p130Cas蛋白高表达，占86．2％，无复发转移的38例中，BCAR1／p130Cas蛋白高表达仅为21．1％，两组差异显著（χ^2=27．935，P=0．000）；乳腺癌组织中BCAR1／p130Cas蛋白表达与高组织学分级（r=0．270，P=0．027）、C—erbB-2蛋白高表达（r=0．492，P=0．000）以及绝经状况（χ^2=13．77．P=0．003）呈现正相关；与肿瘤大小（P=0．548）、病理类型（P=0．177）、淋巴结状况（P=0．720）、TNM分期（P=0．524）无统计学差异（P〉0．05）。结论：BCAR1／p130Cas蛋白的表达水平与肿瘤的侵袭性显著相关，BCAR1／p130Cas蛋白的表达水平越高肿瘤的恶性程度越高，所以BCAR1／p130Cas蛋白高表达患者的复发、转移风险增加；BCAR1／p130CaS蛋白高表达与三苯氧胺治疗耐药密切相关；芳香化酶抑制剂是绝经后ER阳性乳腺癌患者内分泌治疗的最佳选择。BCAR1／p130Cas蛋白的表达水平和腋淋巴结转移状况、肿瘤大小、病理类型、TNM分期无关。因此认为，BCAR1／p130Cas蛋白可以作为独立判定乳腺癌预后的一个重要参数，为监测乳腺癌的转移提供了一个有价值的指标，有助于乳腺癌复发转移的诊断及治疗。

BCAR1/p130Cas蛋白与乳腺癌抗雌激素药物耐药的相关研究

研究表明，雌激素在诱导乳腺癌发生和细胞增殖方面起到重要的作用。雌激素及其受体组成的蛋白复合体作用于乳腺细胞，促进多种基因的转录调节。临床上，大约2／3的乳腺癌雌激素受体（ER）阳性，且具备生物活性功能，能促进和维持乳腺肿瘤细胞的生长。因此，临床上通过检查乳腺癌细胞是否含有ER，和ER对雌激素的应答性来决定是否应用抗雌激素药物。

乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白基因在子宫内膜样腺癌中的表达及意义

目的探讨乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白基因（BCAR1）在子宫内膜样腺癌中的表达及其意义。方法应用免疫组织化学方法检测50例子宫内膜样腺癌和30例子宫内膜单纯性增生组织中BCAR1的表达，并检测雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）在子宫内膜样腺癌的表达。分析BCAR1的表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征以及ER、PR的相关性。结果BCAR1在子宫内膜样腺癌组织中的表达[64．0％（32／50）]高于子宫内膜单纯性增生组织中的表达[40．0％（12／30）]，差异有统计学意义（x2=4．364，P=0．037）；在子宫内膜样腺癌中，BCAR1的高表达与患者高龄、肿瘤细胞低分化和ER的阳性表达相关（X2值分别为6．272、5．640、4．217，r值分别为0．354、0．366、0．290；P均〈0．05）。结论BCAR1促进子宫内膜样腺癌的发生，并与肿瘤细胞低分化和ER表达状态呈正相关。

BCAR1和Smad3蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及临床病理意义

目的探讨乳腺癌抗雌激素耐药蛋白(BCAR1)和Smad3蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展中的作用。方法收集NSCLC患者术后肿瘤标本150例及正常肺组织标本60例,应用免疫组化法检测BCAR1和Smad3蛋白的表达状况,分析二者的相关性以及与临床病理特征和预后的关系。结果 BCAR1蛋白在NSCLC中表达的阳性率(86.0%)高于正常肺组织(13.3%)、Smad3蛋白在NSCLC中表达的阳性率(17.3%)低于正常肺组织(68.3%)(P<0.0001)。BCAR1蛋白高表达与NSCLC低分化、高临床分期以及预后差相关(P=0.004,P=0.008,P=0.022);Smad3蛋白低表达与NSCLC胸膜侵犯、高临床分期以及预后差相关(P=0.02,P=0.008,P=0.002)。BCAR1和Smad3蛋白的表达呈负相关(r=-0.830,P<0.000 1)。结论 BCAR1和Smad3参与NSCLC发生发展过程,联合检测BCAR1和Smad3蛋白可能有助于NSCLC的诊断和预后评估。

BCAR1促进肺腺癌细胞增殖、生长及其互作蛋白网络的研究

目的本研究旨在探索乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1(breast cancer anti-estrogen resistance 1,BCAR1,p130cas)在肺癌发生发展中的生物功能与互作蛋白网络。方法(1)免疫印迹实验(western blot)研究15对肺癌及癌旁组织中BCAR1表达情况,免疫组化(immunohistochemistry,IHC)分析54例早期肺腺癌组织芯片中BCAR1与预后的关系,并通过TCGA数据库进一步验证。(2)通过CRISPR/Cas9分别构建人肺腺癌H1975,H1299 BCAR1敲除(knock out,KO)细胞株,通过调取cDNA文库构建A549过表达(overexpression,OE)细胞株,四唑盐比色实验(MTT)检测细胞增殖能力、平板克隆形成实验检测细胞存活能力。(3)免疫共沉淀质谱分析(immunoprecipitation mass spectrometry,IP-MS)联合生信分析找出工具细胞即293T细胞中BCAR1的互作蛋白网络及可能的关键节点。(4)western blot验证细胞系BCAR1-KO或BCAR1-OE后关键节点基因的表达变化,并在肺癌组织芯片中予以验证基因表达的相关性。结果(1)western blot:BCAR1在肺腺癌组织较癌旁组织显著高表达(P<0.05);IHC:BCAR1高表达的早期肺癌患者预后差(HR=5.026,P=0.001),TCGA:BCAR1高表达肺腺癌患者预后差(HR=1.5,P=0.0087)。(2)成功构建BCAR1-KO与BCAR1-OE稳定细胞株,细胞增殖能力及细胞克隆形成率均随BCAR1敲除降低,过表达后升高。(3)IP-MS联合生信分析:哺乳动物酵母同源致命因子Sec13蛋白8(MLST8)可能作为BCAR1的关键互作蛋白;(4)相比癌旁组织,MLST8在癌组织中高表达(P<0.05),并与BCAR1表达显著正相关(R=0.4221,P=0.0015)。细胞系中MLST8的表达在BCAR1敲除后降低,过表达后升高。结论BCAR1在肺癌中发挥重要的促瘤效应。MLST8表达与BCAR1显著相关,可能是BCAR1的关键下游蛋白。

外周血CK19、MMP-9和MDR1水平评定体外药敏的价值

目的检测乳腺癌患者外周血中细胞角蛋白19(CK19)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和多药耐药基因1(MDR1)的表达量,评定参照体外药敏选择化疗方案的价值。方法采用荧光定量RT-PCR技术,检测117例乳腺癌患者化疗前后外周血中CK19mRNA、MMP-9mRNA和MDR1mRNA的表达量。结果实验组较对照组外周血中CK19、MMP-9和MDR1mRNA的表达量ΔCt值变化有显著差异,平均差值分别为-5.2105/-3.9938、-5.3312/-2.6930和0.6750/3.6140。结论实验组较对照组,外周血中CK19、MMP-9mRNA的表达量显著下降,而对照组MDR1表达量的增高较实验组更显著,提示在现行的循证医学基础上增加体外药敏实验结果这一参考因素,有可能选择更敏感的化疗药物,提高个体化治疗的效果。

TAMOXIFEN的药理作用和耐药机理的研究现状

ＴＡＭＯＸＩＦＥＮ的药理作用和耐药机理的研究现状尹科祥，苏宁（南京铁道医学院病理解剖教研室，南京２１０００９）ＴＡＭＯＸＩＦＥＮ（以下简称ＴＡＭ）是一种非甾体类三苯乙烯衍生物，其最大的特点是副作用少、药效强、服用方便，是目前广泛应用于乳腺癌治疗中的抗...

δEF1与雌激素受体-α和他莫昔芬耐药关系的研究

乳腺癌是常见的女性恶性肿瘤,抗雌激素耐药是成功治疗的一大障碍,雌激素受体(ER)-α的减少或消失是产生抗药性的首要机制.δ晶体蛋白增强因子1(δ-crystallin enhancer factor1,δEF1)是锌指同源结构域转录因子家族中的一员,在乳腺癌等诸多肿瘤中均证实有δEF1的异常表达.采用RT-PCR、Western blotting和细胞免疫荧光技术,分析了在δ晶体蛋白增强因子1(δEF1)功能缺失情况下雌激素受体阳性乳腺癌细胞中雌激素受体(ER)-α表达的变化及组蛋白乙酰化对ER-α的影响.同时采用细胞活力实验证实δEF1通过调控ER-α的表达影响乳腺癌细胞对抗雌激素药物他莫西芬(tamoxifen,TAM)的敏感性.结果表明:δEF1被抑制后,乳腺癌细胞中ER-α的表达水平明显升高(p<0.01),细胞对他莫西芬(TAM)的反应增强,存活率降低(p<0.01);而组蛋白乙酰化可以显著恢复细胞中ER-α的表达(p<0.01).

从血脑屏障药物转运机制探究平痫冲剂的抗痫作用

目的观察平痫冲剂的抗痫作用,并探讨其作用机制。方法将62只3周龄Wistar大鼠随机分为空白组12只,造模组50只,采用戊四唑(pentetrazol,PTZ)腹腔注射制备癫痫模型;模型制备成功后,随机分成模型组、西药组及平痫冲剂组,每组各12只,西药组给予丙戊酸钠灌胃,平痫冲剂组给予平痫冲剂灌胃。干预7 d后,观察癫痫大鼠运动皮质区的组织形态结构;免疫组化、RT-qPCR以及Western blot检测大脑运动皮质区组织L型氨基酸转运体(L-type amino acid transporter,LAT)1、P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)的表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠大脑运动皮质区神经元数量减少(P<0.01),LAT1蛋白及mRNA表达下降(P<0.05),P-gp、BCRP及其mRNA表达升高(P<0.05)。与模型组比较,平痫冲剂组大鼠大脑运动皮质区神经元数量增多(P<0.05),神经元病理形态有所改善,LAT1及其mRNA表达升高(P<0.01),P-gp、BCRP及其mRNA表达下降(P<0.01)。结论平痫冲剂可能通过调控血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)药物转运体P-gp、BCRP、LAT1的表达,从而发挥抗痫作用。

胸腔积液中BCAR1检测的临床意义研究

目的探讨BCAR1表达对癌性和结核性胸腔积液鉴别诊断价值。方法收集结核性胸水患者40例和肺癌胸腔积液患者40例,另取我院中心健康体检者30例作为对照。BCAR1表达的测定采用ELISA法。结果肺癌患者胸腔积液中BCAR1表达水平为(71.52±22.61)μg/L,显著高于肺结核胸腔积液中BCAR1的[(13.67±5.24)μg/L](P<0.01)。对照组、肺结核组和肺癌组血液中BCAR1的表达水平分别为(12.52±4.18)、(14.21±6.55)和(84.63±30.27)μg/L,统计学分析显示:肺癌组血液中BCAR1的表达水平显著高于肺结核患者和健康对照人群(P<0.01),而肺结核组与对照组比较则无显著性差异(P>0.05)。相关性分析显示胸腔积液中BCAR1的表达与血液中BCAR1的表达呈显著正相关(γ=0.637,P<0.01)。结论肺癌患者胸水中存在BCAR1蛋白的异常表达,BCAR1蛋白的高表达有可能作为胸水良恶性鉴别的一个有效的分子标记。

BCRP及MDR1在非霍奇金淋巴瘤接受化疗患者的表达及临床意义

目的探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者乳腺癌耐药蛋白(BCRP)及多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达及临床意义。方法采用RT-PCR法检测66例NHL患者新鲜淋巴组织标本BCRP及MDR1的表达。结果66例NHL患者BCRP阳性率45.5%,MDR1阳性率59.1%,BCRP+MDR1+、BCRP+MDR1-、BCRP-MDR1+、BCRP-MDR1-四组化疗效果差异有统计学意义(<0.05)。结论BCRP及MDR1表达率高,是化疗敏感性差的重要原因。

脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7表达变化及其临床意义

目的探讨脑胶质瘤组织长链非编码RNA(lncRNA)乳腺癌抗雌激素耐药基因4(BCAR4)、基质金属蛋白酶7(MMP-7)表达变化及其与临床病理特征和预后的关系。方法选择脑胶质瘤患者98例,取术中切除的脑胶质瘤组织及其瘤旁正常组织,采用RT-qPCR法检测lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达。比较脑胶质瘤组织与瘤旁正常组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达,分析脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达的关系及二者表达与临床病理特征和预后的关系。采用多因素Cox回归模型分析脑胶质瘤患者死亡的危险因素。结果脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA相对表达量均高于瘤旁正常组织(P均<0.01)。Pearson相关分析显示,脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4相对表达量与MMP-7 mRNA相对表达量呈正相关关系(r=0.810,P<0.05)。脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达与组织分化程度和WHO分级有关(P均<0.05),而与性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤最大径无关(P均>0.05)。以脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA相对表达量的均值为临界值,将患者分为lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA高表达者与低表达者。lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA高表达者平均生存时间均低于其低表达者(P均<0.01)。多因素Cox回归分析显示,组织分化程度低分化和WHO分级Ⅲ、Ⅳ级以及lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达升高为脑胶质瘤患者死亡的独立危险因素(P均<0.05)。结论脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达显著升高,二者表达变化与组织分化程度、WHO分级和预后密切相关。

监测BCAR1阳性循环肿瘤细胞在早期肺腺癌术后随访中的应用

目的探索在早期肺腺癌患者中监测BCARI阳性循环肿瘤细胞BCAR1(+)-CTCs的临床意义。方法2015年11月至2018年1月,共纳入48例I期肺腺癌患者,采用CanPatrolTM技术及RNA原位杂交检测患者外周血中CTCs及BCAR1基因表达情况。结果41例检测出CTCs,检出率85.4%,30例检出BCARI(+)-CTCs,检出率62.5%0BCAR1(+)-CTCs和CTCs总数量显著正相关。BCAR1(+)更易出现在发生过上皮间质转化的CTCs,即M-CTCS及E&M-CTCS中。复发3例术后BCARI(+)-CTCs显著增高。45例病情稳定的患者中,19例术后持续监测CTCs,其中12例总CTCs及BCAR1(+)-CTCs均显著降低或保持稳定;7例总CTCs升高,其中2例BCARI(+)-CTCs保持稳定,1例降低,4例BCAR1(+)-CTCs增高者继续密切随访。结论动态监测BCAR1(+)-CTCs有助于预测早期肺腺癌复发或转移。

CTCs、BCAR1及β-Tubulin Ⅲ基因表达评估早期肺癌手术患者预后疗效的价值观察

目的:探讨循环肿瘤细胞(CTCs)、乳腺癌抗雌激素耐药蛋白1(BCAR1)及β-微管蛋白-Ⅲ(β-Tubulin Ⅲ)基因表达评估早期肺癌手术患者预后疗效的价值观察。方法:选取2016年1月至2018年1月期间在我院接受手术切除肺癌组织患者85例作为研究对象,另取在本院同期健康体检者37例作为对照组。采用免疫荧光原位杂交技术鉴定患者外周血CTCs计数;采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测患者BCAR1、β-Tubulin Ⅲ基因表达;采用单因素生存分析Kaplan-Meier绘制生存曲线,COX风险比例回归分析影响患者预后的因素;经Pearson相关性分析外周血CTCs与BCAR1、β-Tubulin Ⅲ之间的相关性。结果:肺癌患者术后外周血CTCs、BCAR1及β-Tubulin Ⅲ mRNA表达水平显著高于对照组;经生存分析显示,肺癌患者外周血中CTCs低表达、BCAR1低表达、β-Tubulin Ⅲ低表达3年总生存率显著高于CTCs高表达、BCAR1高表达、β-Tubulin Ⅲ高表达患者;复发患者CTCs、BCAR1及β-Tubulin Ⅲ mRNA表达水平显著高于未复发患者;经pearson相关性分析显示,肺癌患者外周血中CTCs与BCAR1及β-Tubulin Ⅲ mRNA表达水平均呈正相关。结论:早期肺癌患者术后外周血中CTCs、BCAR1及β-Tubulin Ⅲ基因表达上调,且低表达患者的3年生存率较高,临床可根据其术后水平变化评估患者预后。