Prefoldin 1对乳腺癌BT474细胞上皮-间充质转化的影响

目的探讨Prefoldin 1(PFDN1)对乳腺癌BT474细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法将PFND1基因RNA干扰真核表达载体和空白对照基因表达载体导入BT474细胞,构建转染组及空白转染组,另设未转染组。通过Transwell侵袭实验和迁移实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用real-timePCR和western blot检测EMT标志分子E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达水平。结果转染组PFND1mRNA和蛋白表达显著低于其他两组(P <0.05)。转染组细胞侵袭和迁移能力低于其他两组(P <0.05)。转染组E-cadherin表达明显强于其他两组(P <0.05),N-cadherin、Vimentin表达明显低于其他两组(P <0.05)。结论 PFDN1能够促进乳腺癌BT474细胞EMT转化。

过表达Bmi-1基因对乳腺癌细胞株BT474侵袭转移能力的影响

目的建立过表达Bmi-1的乳腺癌稳定细胞株,检测过表达Bmi-1对该肿瘤细胞株侵袭转移能力的影响,探讨Bmi-1与乳腺癌转移的相关性。方法根据GenBank中人源Bmi-1的mRNA序列,设计引物,构建Bmi-1真核表达载体GV144-Bmi-1,将其转染乳腺癌细胞株BT474,G418筛选建立过表达Bmi-1的稳定细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot检测Bmi-1的mRNA和蛋白表达水平,Matrigel和Transwell侵袭小室模型检测转染和未转染BT474细胞体外侵袭和转移能力的变化,荧光定量PCR和Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的变化。结果成功构建人源Bmi-1真核表达载体GV144-Bmi-1,转染BT474细胞后,获得稳定转染细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,与空载体组相比,实验组Bmi-1的mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。Bmi-1过表达后,迁移能力明显增强、穿膜细胞数明显增多,MMP-2、MM-9 mRNA和蛋白表达水平显著增强(P<0.05)。结论过表达Bmi-1稳定细胞株构建成功,Bmi-1表达上调可显著提高乳腺癌细胞的体外侵袭转移能力。

白藜芦醇对乳腺癌BT474细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的探讨白藜芦醇对乳腺癌BT474细胞增殖、凋亡的影响及相关作用机制。方法将不同浓度白藜芦醇作用于BT474细胞,CCK-8法观察白藜芦醇对BT474细胞生长增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染法观察白藜芦醇对BT474细胞凋亡的影响,qRT-PCR检测BT474细胞中GABARAPL1表达改变。结果以白藜芦醇处理后的BT474细胞增殖被抑制并且凋亡增加,呈时间—剂量依赖性,且可抑制GABARAPL1的表达。结论白藜芦醇可通过下调GABARAPL1抑制BT474细胞增殖并诱导其凋亡。

调控FOXM1基因对乳腺癌BT474细胞赫赛汀药物敏感性的影响

目的探究调控叉头框转录因子M1(FOXM1)基因对乳腺癌BT474细胞赫赛汀药物敏感性的影响。方法将FOXM1过表达及特异性靶向FOXM1基因的小干扰RNA(FOXM1-siRNA)转染至乳腺癌BT474细胞,将细胞分为上调FOXM1基因组、下调FOXM1基因组和对照组。Western blot检测FOXM1蛋白以及PI3K/AKT信号通路蛋白的表达。MTT法检测不同浓度赫赛汀药物对BT474细胞增殖能力的影响。Transwell实验检测不同浓度赫赛汀药物对BT474细胞迁移、侵袭能力的影响。结果下调FOXM1基因后,FOXM1蛋白的相对表达量明显减少(P<0.05)。上调FOXM1基因组BT474细胞的增殖率、迁移数量、侵袭数量显著高于对照组,且随着赫赛汀浓度的增加其增殖率、迁移数量、侵袭数量逐渐增加,上调FOXM1基因可增强BT474细胞对赫赛汀的耐药性,促进增殖、迁移及侵袭。下调FOXM1基因组BT474细胞的增殖率、迁移数量、侵袭数量显著低于对照组,低浓度的赫赛汀对BT474细胞的增殖、迁移及侵袭能力的抑制程度较弱,高浓度的赫赛汀对BT474细胞的增殖、迁移及侵袭能力的抑制过度,而中浓度的赫赛汀抑制能力介于低、高浓度之间,能够有效抑制BT474细胞增殖、迁移及侵袭,但无抑制过度的表现。不同赫赛汀浓度下下调FOXM1基因组细胞的增殖率、迁移数量、侵袭数量显著低于上调FOXM1基因组。下调FOXM1基因组PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白相对表达量均低于对照组和上调FOXM1基因组(P<0.05)。结论上调FOXM1基因可增强乳腺癌BT474细胞对赫赛汀的耐药性,下调FOXM1基因在中浓度赫赛汀的干预下,可通过作用于PI3K/AKT信号通路,抑制乳腺癌BT474细胞的增殖、迁移及侵袭,从而抑制乳腺癌的发展。

KU004抑制人源乳腺癌BT474裸鼠异种移植模型肿瘤生长的作用

目的探讨KU004对人源乳腺癌BT474裸鼠异种移植模型肿瘤的抑制作用。方法对60只雌性BALB/c裸鼠接种人源乳腺癌BT474细胞,将肿瘤生长至100～160 mm^3的40只裸鼠随机分为模型组(0.5%羟丙基甲基纤维素溶液灌胃)、拉帕替尼组(80 mg/kg拉帕替尼灌胃)、KU004高剂量组(120 mg/kg KU004灌胃)、KU004中剂量组(80 mg/kg KU004灌胃)、KU004低剂量组(40 mg/kg KU004灌胃),每组8只,每天灌胃1次,连续灌胃21 d。分别于给药前以及给药后1 d、4 d、7 d、11 d、14 d、17 d、21 d测量各组裸鼠体重及肿瘤体积,计算相对肿瘤增殖率(T/C)和肿瘤抑制率(inhibition rate,IR)。结果成功建立人源乳腺癌BT474裸鼠异种移植模型。拉帕替尼组、KU004高剂量组、KU004中剂量组、KU004低剂量组裸鼠体重随给药时间延长变化不大,与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。给药期间各给药组TV、RTV均低于与模型组(P<0.01),其中拉帕替尼组与KU004中剂量组TV、RTV比较差异无统计学意义(P>0.05)。拉帕替尼组、KU004高剂量组、KU004中剂量组和KU004低剂量组T/C随给药时间延长逐渐降低,至给药后21 d T/C分别为15.6%、6.9%、11.4%和32.7%,IR分别为85.0%、95.0%、91.0%和67.0%。结论不同剂量KU004均可对人源乳腺癌BT474裸鼠异种移植模型肿瘤生长产生抑制作用,且裸鼠耐受性良好。

下调晚期糖基化终末产物受体对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响

目的 :研究下调晚期糖基化终末产物受体(RAGE)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响。方法 :培养乳腺癌BT474细胞,分为对照组(不做任何处理的乳腺癌BT474细胞)、上调组(乳腺癌BT474细胞+RAGE阴性对照)、下调组(乳腺癌BT474细胞+RAGE siRNA)。用四甲基偶氮唑盐法检测乳腺癌细胞增殖、凋亡水平;用Transwell法检测乳腺癌细胞迁移、侵袭水平;用免疫印迹法检测细胞PI3K/Akt信号通路蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、caspase3、Bcl-2、Bax表达量。结果 :下调组细胞不同时间点增殖率均显著低于上调组、对照组。下调组细胞不同时间点凋亡率均显著高于上调组、对照组。下调组细胞迁移、侵袭数均显著低于上调组、对照组。下调组p-PI3K、PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白表达量低于上调组、对照组,caspase 3、Bax蛋白表达量高于上调组、对照组。结论 :经下调RAGE作用于PI3K/Akt信号通路,其可抑制p-PI3K、PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2表达,促进caspase 3、Bax表达,致乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移。

帕瑞昔布钠对BT474乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

目的 探讨帕瑞昔布钠对BT474乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,及其作用机制。方法 体外培养BT474乳腺癌细胞,分为对照组和低、中、高剂量实验组。对照组在正常培养基中培养24 h;低、中、高剂量实验组分别置于含100,300和500μmol·L^(-1)帕瑞昔布钠的RPMI-1640培养基中培养24 h。用细胞计数法-8(CCK-8)实验检测细胞的增殖能力,用划痕实验检测BT474细胞的迁移能力,用Transwell实验检测细胞的侵袭能力,用Western blot法检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)和胱天蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)的表达情况。结果 处理24 h后,低、高剂量实验组和对照组的细胞增殖抑制率分别为(20.28±1.33)%,(67.91±2.35)%和(100.00±0)%,细胞迁移率分别为(20.84±2.15)%,(5.77±0.72)%和(26.03±2.09)%,细胞侵袭数分别为(1.72×10~4±397.00),(0.83×10~4±532.00)和(2.04×10~4±925.00)个,Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.92±0.04,0.17±0.04和1.79±0.11,Bax蛋白相对表达量分别为0.51±0.05,1.21±0.11和0.38±0.02,Caspase-3蛋白相对表达量分别为0.82±0.08,1.98±0.17和0.33±0.06;低、高剂量实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 帕瑞昔布钠可抑制BT474乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的能力,其机制可能与调控细胞凋亡信号通路有关。

下调晚期糖基化终末产物受体对乳腺癌细胞增殖 凋亡 侵袭及迁移能力的影响

目的 探讨下调晚期糖基化终末产物受体(RAGE)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力产生影响。方法 对乳腺癌BT474细胞进行培养,分为3组。对照组:不进行任何处理;上调组:乳腺癌BT474细胞+RAGE阴性对照;下调组:乳腺癌BT474细胞+RAGE siRNA干扰;检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路蛋白表达量。结果 在不同时间点,下调组的细胞增殖速度[24 h(25.36±2.49)%、48 h(20.18±2.17)%、72 h(15.24±1.62)%]明显低于上调组[24 h(55.68±8.25)%、48 h(62.28±11.14)%、72 h(75.46±13.58)%]和对照组[24 h(30.34±3.48)%、48 h(29.68±3.48)%、72 h(30.16±4.12)%],差异均有统计学意义(F=5.520、10.988及15.986,均P<0.05);而下调组细胞凋亡率[24 h(75.68±7.68)%、48 h(82.46±8.52)%、72 h(88.69±10.68)%]在各时间点较上调组[24 h(51.24±6.35)%、48 h(36.25±3.45)%、72h(22.17±3.29)%]和对照组[24 h(62.34±6.12)%、48 h(63.15±6.58)%、72h(62.19±5.46)%]明显增多,差异均有统计学意义(F=6.444、8.509及10.480,均P<0.05)。下调组[迁移(102.35±10.02)个、侵袭(99.65±9.57)个]与上调组[迁移(388.69±36.17)个、侵袭(421.26±46.38)个]和对照组[迁移(216.35±12.05)个、侵袭(238.59+15.49)个]相比,其迁移和侵袭能力明显下降,差异均有统计学意义(F=34.505、36.196,均P<0.05)。下调组[p-PI3K(0.65±0.16)、PI3K(0.72±0.10)]与上调组[p-PI3K(1.68±0.29)、PI3K(1.52±0.16)]和对照组[p-PI3K(1.22±0.14)、PI3K(1.05±0.19)]相比,p-PI3K、PI3K等蛋白表达量明显降低,差异均有统计学意义(F=12.717、7.290,均P<0.05)。而下调组Caspase3(1.55±0.21)和Bax(1.49±0.21)的表达则明显高于上调组[Caspase3(0.53±0.12)、Bax(0.65±0.11)]和对照组[Caspase3(1.08±0.19)、Bax(1.06±0.19)],差异均有统计学意义(F=7.872、7.202,均P<0.05)。结论 RAGE的下调能够在PI3K/Akt信号通路中进行,进而对p-PI3K、PI3K、Akt、p-Akt及Bcl-2表达具有抑制作用,促进Caspase3和Bax表达量可以对乳腺癌细胞凋亡起到促进作用,从而抑制乳腺癌细胞进行增殖、侵袭及迁移。

猪苓酮A通过调节Bcl-2/Bax信号通路诱导雌激素受体阴性的乳腺癌细胞凋亡研究

目的研究猪苓酮A对雌激素受体(ER)阳性或阴性人乳腺癌细胞的凋亡作用及其可能的作用机制。方法选择2株ER阳性人乳腺癌细胞(MCF-7细胞、BT474细胞)和1株ER阴性人乳腺癌细胞(MDA-MB-453细胞),用不同浓度的猪苓酮A分别处理24 h,或以50μmol/L的猪苓酮A分别处理6、12、24、48 h后,分别采用噻唑蓝(MTT)法测定3株乳腺癌细胞的增殖情况;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;采用Western blottig法检测与细胞凋亡密切相关的Bcl-2家族蛋白表达情况。结果猪苓酮A可以时间和剂量依赖性地抑制ER阴性MDA-MB-453细胞的增殖;而对于ER阳性MCF-7、BT474细胞增殖均无明显影响;细胞周期检测显示猪苓酮A可以使MDA-MB-453细胞的生长阻滞在G1或G2/M期;50μmol/L猪苓酮A作用于MDA-MB-453细胞24 h后,细胞出现明显凋亡,而MCF-7、BT474细胞则没有出现明显凋亡;Western blotting检测发现50μmol/L猪苓酮A处理组ER阴性MDA-MB-453细胞中促凋亡蛋白Bax、Bad表达量升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w表达量降低。结论猪苓酮A能抑制ER阴性乳腺癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制与调控Bcl-2家族蛋白的表达量有关。