奶山羊乳腺瞬时表达溶栓药物瑞替普酶-reteplase(rPA)的研究

从人的黑素瘤细胞提取总RNA,进行RT-PCR,克隆了组织纤维溶酶原激活剂(tPA)基因,对其缺失突变,进一步克隆了溶栓药物瑞替普酶-reteplase(rPA)基因;以羊的β-乳球蛋白基因(BLG)作为调控序列,构建了瑞替普酶的乳腺表达载体BrPA。注射BrPA到乳腺动脉,收集乳汁进行鉴定和检测,体外溶栓活性分析发现瑞替普酶在羊的乳腺中获得了表达,最高表达量为8.52 mg/L,为转基因动物乳腺表达载体构件的检测建立了合理的方法,也为下一步制备转基因奶山羊乳腺生物反应器奠定了基础;该研究提示,对于临床给药剂量小,而价格昂贵的药物,如细胞因子类,也许可以用这种乳腺瞬时表达系统进行生产。

Ser-125突变型人白细胞介素-2在山羊乳腺中的瞬时表达

用定点突变法得到Ser125突变型人白细胞介素2(Ser125hIL2)cDNA,然后与山羊β乳球蛋白(BLG)基因的上游调控序列融合,构建了pBLG—Ser125hIL2乳腺定位表达载体。表达载体经脂质体包裹后,经乳腺导管注入妊娠后期山羊乳腺内,进行瞬时表达。分别于山羊分娩后1～10d采奶,ELISA方法检测乳汁中Ser125hIL2含量。山羊乳汁中的含量为0.83～6.45μg/L。