利用代谢组学分析红汁乳菇-马尾松菌根苗根系分泌物

为探究红汁乳菇(Lactarius hatsudake)与宿主共生后菌根苗根系分泌物中促进红汁乳菇生长及菌根合成的潜在物质,利用非靶向代谢组(LC-MS/MS)分析红汁乳菇-马尾松菌根苗与马尾松非菌根苗的根系分泌物。结果表明:与马尾松非菌根苗相比,红汁乳菇-马尾松菌根苗根系分泌物在正、负离子模式下的差异代谢物共有352种,其中315种显著上调,37种显著下调;差异代谢物主要分布在代谢途径、抗生素生物合成、赖氨酸降解、次生代谢产物生物合成等28条通路中;差异代谢物2-异丙基苹果酸、磷酸、UDP-N-乙酰葡糖胺、茉莉酸、甲羟戊酸等参与多条代谢通路,可能在红汁乳菇-马尾松菌根形成中起重要作用。选取的9种差异显著代谢物中,1 mg·L^(-1)的D-天冬氨酸、DL-精氨酸、脱硫生物素、脱落酸对红汁乳菇JH5菌丝生长具有促进作用;1 mg·L^(-1)脱硫生物素、烟酸、脱落酸对红汁乳菇-马尾松菌根形成有促进作用。本研究可为红汁乳菇-马尾松菌根苗的高效培育提供参考。

基于菌株生长和菌根苗品质的红汁乳菇菌株筛选

【目的】筛选用于菌根苗接种的高质量红汁乳菇菌株,为提高红汁乳菇产量提供支持。【方法】以10个红汁乳菇菌株(JH1、JH2、JH4、JH5、JH7、JH8、JH10、JH11、JH12、JH13)为研究对象,将菌株分别在PDA和BAF培养基上培养后,测定菌株生长势指标(菌丝生长速度、菌丝生物量);将红汁乳菇液体菌种接种于马尾松幼苗根部合成菌根苗,以不接种为对照(CK),培养210 d后对菌根合成能力(菌根数量、菌根侵染率、菌根化率)和宿主植物生长量(苗高、主根长、地径、干质量)进行测定。对上述9个参数进行相关性分析,并用隶属函数法对菌株性状进行综合评价。【结果】①在PDA固体培养基上,以菌株JH1菌丝生长速度最快,达到3.17 mm/d;在BAF液体培养基上,以菌株JH5的菌丝生物量最大,为3.28 g/L。②所有菌株均能与马尾松根系形成外生菌根,但菌根形态并不相同。接种红汁乳菇菌株JH5的马尾松苗的菌根数量为45.65个/株,菌根化率为90.67%,菌根侵染率为79.60%,显著高于其他9个菌株,表现出较强的合成菌根苗能力。③接种不同红汁乳菇菌株的马尾松苗,在苗高、主根长、地径和干质量等指标上表现各异。接种菌株JH4的马尾松苗高、主根长和干质量表现最优,较对照分别提高24.45%,16.72%和53.33%;接种菌株JH5的马尾松苗地径生长量表现最优,较对照提高5.19%。④相关性分析表明,菌丝生物量与菌根化率和菌根苗干质量呈极显著正相关(P<0.01),菌根数量与菌根化率和菌根苗地径呈极显著正相关(P<0.01)。⑤基于隶属函数法的综合评价结果表明,红汁乳菇JH5为适合培育菌根苗的最佳菌株,JH4和JH7为次优菌株。【结论】筛选出1个优良红汁乳菇菌株JH5,该菌株的生长势和菌根苗品质整体表现较好。

红汁乳菇、半血红乳菇及橙色乳菇的rDNA ITS序列分析

从分子角度对红汁乳菇(Lactarius hatsudake)、半血红乳菇(Lactarius semisangui fluus)及橙色乳菇(Lactarius akahatsu)的分类地位进行了阐述。利用真菌通用引物对湖南衡阳的红汁乳菇rDNA的转录间隔区(ITS)进行扩增、测序。所得序列与GenBank中的半血红乳菇及橙色乳菇的ITS序列比较,最后得出Lactarius semisanguifluus和Lactarius hatsudake是同物异名,而Lactarius semisanguifluus和Lactarius akahatsu则不是同种的结论;试验中还发现GenBank中的AF096988 Lactarius semisanguifluus是错误的命名种,应该是乳菇属中的松乳菇。

松乳菇菌丝生长促生细菌的筛选与鉴定

[目的]从乳菇(Lactarius sp.)菌柄基部土壤分离并筛选出对松乳菇菌丝生长有促进作用的细菌(MHB),以提高松乳菇菌根苗人工合成效率。[方法]从乳菇菌柄基部土壤分离得到细菌,将纯化后的细菌液体培养离心后获得胞外代谢产物,以添加不同菌株和不同浓度胞外代谢产物的PDA培养基接种松乳菇菌丝块,并以未添加胞外代谢产物PDA平板接种松乳菇菌丝为对照,比较25℃培养30 d后松乳菇菌丝生长的直径大小和菌丝密度;另一方面,基于形态特征和16S rDNA序列鉴定对松乳菇菌丝生长有促进作用的细菌。[结果]共筛选出3株可促进松乳菇菌丝生长的芽胞杆菌属细菌,即菌株L1、L2和L3。当3株菌株的胞外代谢产物添加量为2.5%时,均能显著促进松乳菇菌丝生长,其菌落直径分别增加33.6%、55.6%和75.4%。当3株菌株胞外代谢产物以不同组合等比例混合后,在混合物添加量为5.0%时,L1-L3,L1-L2-L3两个组合显著促进松乳菇菌丝生长,松乳菇菌丝直径分别增加36.9%和42.5%。L3菌株的胞外代谢产物在添加量为2.5%、5.0%和7.5%时均能增加松乳菇菌丝密度,且添加量为7.5%时增加松乳菇菌丝密度效果最佳;L1-L3和L1-L2-L3两个组合也能增加松乳菇菌丝密度。通过对3株菌株形态特征鉴定和16S rDNA序列测定,L1菌株为高山芽孢杆菌(Bacillus altitudinis),L2菌株为蜡样芽胞杆菌(B.cereus),L3菌株为环状芽孢杆菌(B.zanthoxyli)。[结论]筛选出3株可促进松乳菇菌丝生长的芽孢杆菌,其中B.zanthoxyli促进松乳菇菌丝生长效果最好。

橙黄乳菇对马尾松和华山松幼苗生长及根系代谢物的调控

【目的】探究接种橙黄乳菇对马尾松和华山松幼苗生长、根系发育及代谢物的影响,为橙黄乳菇与2种松树菌根化苗木培育及共生栽培提供参考。【方法】以马尾松和华山松幼苗为研究对象,基于大棚盆栽试验,测定分析接种和未接种橙黄乳菇的2种松树幼苗菌根侵染情况、地上和地下生长指标、根系构型性状(根长、表面积、根体积、根尖数、分叉数)、形态性状(比根长、组织密度、比表面积)及根系代谢物差异。【结果】橙黄乳菇与2种松树幼苗均形成明显的菌根形态,并有较高的菌根侵染率和菌根依赖性。接种橙黄乳菇对2种松树幼苗生长具有一定促进作用,但存在差异,接种后马尾松幼苗株高和地上部分干质量显著增加,华山松幼苗株高和地下部分干质量显著增加,2种松树幼苗总根长、根表面积、根体积、根尖数和分叉数均明显提高,根系活力和阳离子交换量降低。接种橙黄乳菇明显影响2种松树幼苗根系代谢物含量,接种后马尾松幼苗根系总酚和总黄酮质量分数降低,总三萜、总生物碱和总甾醇质量分数升高,华山松幼苗根系代谢物变化趋势与马尾松相反。【结论】接种橙黄乳菇可改善2种松树幼苗根系形态、提高生物量、影响根系主要代谢物含量,在松树菌根化苗木培育即外生菌根真菌共生栽培方面具有可行性。

4种乳菇属真菌的形态学与rDNA-ITS鉴定

为明确内蒙古赤峰地区常见有毒乳菇种类,准确、快速地识别有毒乳菇,将采集的4个乳菇属Lactarius真菌标本采用传统形态学分类方法进行鉴定,同时提取子实体DNA,使用真菌通用引物ITS1/ITS4进行PCR扩增,用Blast对扩增产物纯化测序所得的序列进行比对,采用MEGA5.1软件构建系统发育树确定属和种。结果表明,2种方法鉴定结果一致,标本CFSZ10167为毛头乳菇[Lactarius torminosus(Schaeff.)Pers.],标本CFSZ10216为绒边乳菇[Lactarius pubescens(Fr.ex Kronbh.)Fr.],标本CFSZ13021为灰褐乳菇[Lactarius pyrogalus(Bull.)Fr.],3种均为胃肠炎型毒菌,CFSZ10044为皱乳菇(Lactarius ruginosus Romagn),为中国新记录种,主要特点是菌盖棕褐色、浅褐色,有绒质感,盖缘呈齿状,孢子球形具小刺,食毒不明。对4个种的形态学特征进行了详细描述,并附有生境图片和显微图像,研究结果为乳菇属物种鉴定和资源分布提供了重要补充,并为常见毒菌识别提供了理论依据。

野生松乳菇和野生红汁乳菇蛋白多糖的研究

选用合适的溶剂、方法、条件从野生松乳菇和野生红汁乳菇中提取蛋白多糖。粗多糖经Sevage法脱游离蛋白、DEAE-纤维素柱、SephadexG100柱层析分离、纯化,纯化的蛋白多糖进行紫外及红外光谱分析并测定蛋白质、多糖的含量及抗氧化能力。结果表明,松乳菇蛋白多糖中蛋白质和多糖含量分别为24.53%和68.83%;红汁乳菇中分别为15.53%和66.52%,两蛋白多糖均具有体外抗氧化的能力。经鉴定松乳菇蛋白多糖中单糖组成主要是葡萄糖、果糖和甘露糖,红汁乳菇蛋白多糖中单糖组成主要是葡萄糖、果糖和半乳糖。

松乳菇外生菌根对马尾松幼苗生长的影响分析

为研究松乳菇外生菌根对马尾松幼苗生长的影响。以半年生马尾松幼苗为研究对象,对接种松乳菇菌根的马尾松幼苗的苗高、地径、冠幅、菌根依存度、根系活力、生物量、氮磷钾含量等方面进行分析。结果表明,马尾松对菌根依赖性较强,接种组马尾松幼苗的生长及根系活力均得到了提高,同时,马尾松幼苗根干重、茎干重、叶干重及生物量干重都有显著增加(P<0.05)。对于马尾松幼苗营养吸收方面的影响,氮素含量影响较小,磷素含量和钾素含量显著提高(P>0.05)。因此,松乳菇外生菌根可促进马尾松幼苗生长,具有推广价值。

鲜艳乳菇母种培养基的改良与优化

以恩施土家族苗族自治州农业科学院分离保存的鲜艳乳菇(Lactarius hysginus)菌株LWL-1为试材,从维生素、生物因子、氮源种类及其添加量3个方面对报道的培养基配方进行改良与优化,以期使菌丝快速健壮生长。试验结果表明,氮源相同时,4种维生素和生物因子的改变不会使菌丝生长速率产生显著差异。改变氮源添加量,菌丝生长速率随氮源添加量的增加而逐渐降低;氮源添加量相同时,以大豆蛋白胨为氮源的菌丝生长速率快于蛋白胨,且菌丝也较为健壮。因此,选择以大豆蛋白胨添加量为2 g/L的培养基较为适合。

红汁乳菇和多汁乳菇的化学成分及其开发利用前景

报道了红汁乳菇和多汁乳菇的主要化学成分及其在营养、药用、橡胶生产和营林中的应用价值 。

松乳菇Lactarius deliciosus与红汁乳菇L. hatsudake子实体内可培养细菌多样性的研究

分离松乳菇Lactarius deliciosus与红汁乳菇L.hatsudake子实体内可培养的细菌,进行分类鉴定,为后期细菌与乳菇的相互作用研究奠定基础。利用传统平板法分离培养乳菇子实体内的细菌,进行16S r DNA片段的扩增和测序及系统发育树的构建和物种多样性分析。从松乳菇中获得66株细菌,红汁乳菇中获得48株细菌。松乳菇子实体内细菌隶属于3个门6个属10个种,其中变形菌门的γ-变型菌纲为优势类群,占细菌总数的77.28%,β-变形菌纲的Pandoraea和拟杆菌门的金黄杆菌属Chryseobacterium分别占细菌总数的12.12%和10.6%。红汁乳菇子实体内共分离、鉴定出细菌3个门7个属7个种,其中变形菌门中的γ-变型菌纲为优势类群,占细菌总数的77.09%,厚壁菌门的芽胞杆菌属Bacillus和拟杆菌门的金黄杆菌属Chryseobacterium分别占细菌总数的14.58%和8.33%。松乳菇与红汁乳菇子实体内存在一定种类和数量的细菌,其中荧光假单胞菌Psedomonas fluorescens和美洲爱文氏菌Ewingella americana为优势细菌。

云南乳菇属贸易种的分类学研究

报道了云南省农贸市场上乳菇属的 13个贸易种 ,其中包含 1个存疑种和 1个中国新记录种绒毛乳菇 (新拟 )L echinatusThiers ;按照Singer系统 ( 1962 )对这 13个种进行了分组并进行了必要的描述和讨论 ;同时对国内文献记载的色奶乳菇组 (Sect.Dapetes)的

松乳菇多糖提取与含量分析

用多种提取方法从两种野生松乳菇中提取多糖。实验结果表明,松乳菇与红松菌的多糖常规提取率分别为10.9518％、8.7948％,微波提取率分别为11.1728％、9.5959％,超声提取率分别为11.6935％、9.3802％,方差分析显示3种提取方法对两种野生松乳菇多糖的提取率影响不显著,两菌多糖含量差异不明显。

松乳菇子实体人工诱导方法研究

设计了三种松乳菇菌丝扩繁培养基,其中一种半固体培养基最适合,该菌丝扩繁培养基配方为:蔗糖5g、淀粉15g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾0.02g、硫酸镁0.01g、氯化钠0.5g、VB10.001g,总体积1000ml;优化的子实体诱导培养基为:杂树叶70%、棉籽壳20%、玉米粉3%、豆粕5%、蔗糖1.5%、碳酸钙0.5%,自然pH,并且在培养基的四周填充杂树叶;在子实体出现后,采用补料方法,可以有效促进子实体的生长。本试验表明松乳菇在完全脱离松树的条件下,可以在实验室中诱导出子实体,为松乳菇的人工栽培迈进了一步。

松乳菇营养成分分析及松乳菇多糖的提取分离

以野生鲜松乳菇子实体、发酵所得菌丝体为材料,对其粗蛋白、氨基酸、脂类总量、多糖、灰分及微量元素的含量进行测定,并以正交法确定了松乳菇多糖提取的最佳工艺条件,以层析法定性分析了多糖的组成。

松乳菇、红汁乳菇人工栽培技术研究获得突破

松乳菇、红汁乳菇是世界著名的美味野生食用菌。我国南方各省及东北地区均有一定的野生产量，食用历史悠久。湖南各地俗称寒菌、枞菌、松菌、重阳菌、雁鹅菌等，因其特殊的菌根特性，人工栽培技术难度较大。

松乳菇多糖刺激免疫细胞增殖及诱导肿瘤细胞凋亡的研究

为研究松乳菇多糖(Lactarius deliciosus Gray polysaccharide,LDG-A)对特异性免疫细胞的增殖效应活性及对肿瘤细胞凋亡的影响,在LDG-A作用下检测T淋巴细胞、B淋巴细胞的增殖效应,并观察T淋巴细胞、B淋巴细胞的细胞形态,检测T淋巴细胞、B淋巴细胞在LDG-A的作用下处于细胞周期各个时期的细胞数量及B淋巴细胞分泌抗体的情况,观察LDG-A作用于肺癌细胞A549的凋亡和细胞骨架情况。结果表明:随着LDG-A质量浓度的增加,能够促进T淋巴细胞、B淋巴细胞的增殖,并呈现出一定的剂量依赖关系;同时LDG-A能够减少T淋巴细胞、B淋巴细胞在G0/G^1期的细胞数量百分比,促进细胞进入G^2/M期,具有促进B淋巴细胞分泌抗体免疫球蛋白M、免疫球蛋白D和免疫球蛋白E的作用。在12.5~50.0μg/m L范围内,LDG-A能够诱导肺癌细胞A549凋亡,并呈现出一定的剂量依赖关系;在细胞凋亡时F-肌动蛋白丝断裂,蛋白纤维网络结构被破坏。综上所述,在体外实验中,LDG-A对特异性免疫细胞具有促增殖效应活性,能够促进肿瘤细胞的凋亡。

松乳菇组织分离菌株的rDNA ITS序列分子鉴定

对松乳菇子实体和组织分离菌株rDNA ITS区域进行测序分析,通过和GenBank中已知的乳菇属的种进行序列比对,构建系统发育树,通过树图分析,鉴定出分离菌株就是松乳菇的纯菌种。

野生多汁乳菇的抗辐射作用

目的观察贵州野生多汁乳菇对小鼠的抗辐射作用。方法设3个多汁乳菇剂量组[2.3,4.5,9.0g/(kg.bw)]、阴性对照组和辐射模型对照组,辐射剂量为5 Gy。观察小鼠白细胞计数、测定骨髓DNA含量、骨髓微核率3个指标。结果辐照后5 d各剂量组小鼠的白细胞总数明显高于辐射对照组(P<0.01);辐照后4,15 d,多汁乳菇各剂量组小鼠DNA损伤随剂量的增加,损伤程度逐渐降低,呈剂量-反应关系(P<0.05);多汁乳菇9.0 g/(kg.bw)组在辐照4 d后骨髓微核率较辐射对照组有明显降低(P<0.01)。结论在本实验条件下,多汁乳菇对辐射导致的小鼠白细胞损伤、DNA损伤有一定的保护作用,在剂量为9.0 g/(kg.bw)时,对染色体受损有良好的保护作用。

不同碳氮源对红汁乳菇菌丝生长的影响

【目的】探讨不同碳、氮源对红汁乳菇菌丝生长的影响,为红汁乳菇的开发利用提供依据。【方法】以红汁乳菇LH-1菌株为供试材料,以菌落直径、菌丝生长速率和菌丝生长指数为测定指标,研究了13种碳源、22种氮源对红汁乳菇菌丝生长的影响。【结果】红汁乳菇具有较广的碳源及氮源谱,在13种碳源中,以果糖为碳源时,红汁乳菇菌落长势最好,其菌落直径、菌丝生长速率和菌丝生长指数分别为48.31mm、8.37mm/d和41.87;在22种氮源中,以酵母膏为氮源时红汁乳菇菌落长势最好,其菌落直径、菌丝生长速率和菌丝生长指数分别为50.82mm、7.84mm/d和39.18;红汁乳菇对氨基酸及铵盐类物质利用较差。【结论】红汁乳菇菌丝生长的最佳碳源、氮源分别为果糖和酵母膏。