依据乳蛋白基因序列构建反刍动物种系发生树的研究

依据牛的4种乳蛋白（α-乳清蛋白、β-乳球蛋白、和к-酪蛋白）基因已知序列设计引物，用PCR的方法扩增并克隆测定了牦牛α-乳清蛋白全序列（2999bp），水牛的α-乳清蛋白基因全序列（2784bp），东北马鹿的α-乳清蛋白基因部分序列（1582bp），β-酪蛋白基因的5’侧翼序列（987bp）和第4～第9外显子区序列（1090bp）、β-乳球蛋白5’侧翼序列（2167bp），3’端侧翼序列（1096bp）、к-酪蛋白第4外显子序列（780bp）。依据。酷蛋白第4外显子363bp的片段构建了1个包含20个物种（或亚种）的反刍动物种系发生树，该种系发生树中牛科动物具有典型的单源发生关系。据此种系发生树对牦牛及糜鹿的分类与起源进行初步探讨。依据其他几种奶蛋白基因不同区段所构建的种系发生树表明，这些区段至少适于亚科间种系发生分析。

水牛α-乳清蛋白基因部分序列的测定与分析

根据奶牛α-乳清蛋白基因序列设计引物,用PCR方法扩增并克隆了包含水牛(Bubalusbubalis)α-乳清蛋白基因的5′侧翼序列(709bp)和第1外显子(160)、第1内含子(337bp)和部分第2外显子(73bp)的序列。将该序列与牛的相应序列进行比较表明,尽管具有非常高的同源性(97.6%),但仍然存在一些碱基差异,这些碱基差异导致了一些转录调控因子识别序列的产生或消失以及转录调控因子识别位点之间的距离的变化,这可能是导致这两个物种中该基因表达存在明显表达差异的原因之一。

绵羊β-乳球蛋白基因5′端及上游调控序列的PCR扩增的方法学研究

本文对绵羊 β-乳球蛋白基因 5′端及上游调控序列的 PCR方法扩增进行了研究 .经比较分析 ,将从羊血中提取的绵羊基因组 DNA的模板用量定为 4μl( 0 .4μg/μl) ,Taq DNA聚合酶用量为 0 .83μl( 3u/μl) ,变性为 94℃ 1 min,退火为 64℃ 1 m in,72℃延伸 2 min,循环次数为32次 ,获得的 PCR产物经电泳检测 ,条带明亮 ,特异性高 ,大小为 898bp.经序列分析发现 ,与已知基因组序列一致性达 99%以上 ,可用于指导外源基因在转基因动物乳腺中表达 .