乳酸乳球菌乳脂亚种IMAU60064增殖培养基的优化

以分离自西藏那曲县罗玛镇传统发酵酸牦牛奶中的乳酸乳球菌乳脂亚种（Lactococcus lactis subsp．Cremoris）IMAU60064为试验菌株，研究其最佳的培养条件。对碳源、氮源、缓冲盐等培养基成分及培养条件进行优化，并采用响应面法对优选的碳源、氮源和缓冲盐类的组成含量进行优化，得到IMAU60064的增殖培养基为：葡萄糖23g／L、大豆蛋白胨11g／L、牛肉膏11g／L、胰蛋白胨5g／L、NaAC1．8g／L、K2HP041．2g／L、柠檬酸钠1．2g／L、MgSO4·7H200．4g／L、MnSO4·5H2O54mg／L、L-半胱氨酸盐酸盐0．5g/L、吐温80为1g／L。Lactococcus lactis subsp．cremorisIMAU60064在此增殖培养基中经30℃，14h培养活菌数可达到3．26×10^8cFu／mL，比在MRS中（6．54×10^7CFU／mL）提高近5倍。

乳酸乳球菌乳脂亚种冷冻干燥保护剂优化及其贮藏稳定性

采用单因素试验、Plackett-Burman试验设计和Box-Behnken响应面法,筛选和优化乳酸乳球菌乳脂亚种KLDS4.0326真空冷冻干燥保护剂工艺,并分析冻干菌粉在不同温度下的贮藏稳定性。结果表明:脱脂乳粉、海藻糖和甘油含量是影响菌体细胞存活率的关键因素;以菌体细胞存活率为响应值,对3个因素进行优化分析,保护剂最佳配比为:脱脂乳粉10.77?g/100?mL、海藻糖7.81?g/100?mL、甘油3.31g/100mL,此条件下菌体细胞存活率为(87.43±1.62)%,与理论预测值接近。在4℃和25℃条件下保藏12个月后,菌体细胞存活率分别为40.63%和8.67%,冻干菌粉在4℃条件下具有更高贮藏稳定性。

乳酸乳球菌乳脂亚种高产丁二酮的条件优化

分别研究了10种不同因素对乳酸乳球菌乳脂亚种产生丁二酮质量分数的影响。结果表明,各因素产生丁二酮最高量的条件:培养温度为37℃;凝乳后3 h;后熟12 h;培养基pH值调至为5.6;培养基中添加柠檬酸氢二铵的质量浓度为0.15%;培养基中添加Vc的质量浓度为0.3%。培养基中添加金属离子的质量浓度分别为:Mg2+为0.05%,Cu2+为0.04%,Mn2+为0.001%;培养基中添加甘氨酸的质量浓度为1.7%(均为质量分数);培养基中添加碳水化合物的质量浓度分别为:葡萄糖为1%,蔗糖为1.5%(均为质量分数);随着基质浓度增加丁二酮产量也随之增加。

乳酸乳球菌乳脂亚种BTQY-112增殖培养基的优化

对乳酸乳球菌乳脂亚种BTQY-112增殖培养基进行优化研究。经试验确定乳酸乳球菌乳脂亚种BTQY-112最适培养基为:葡萄糖为5 g/L,乳糖为5 g/L,酪蛋白胨3.3 g/L,大豆蛋白胨3.3 g/L,鱼蛋白胨3.3 g/L,β-甘油磷酸二钠28.5 g/L,Tween-80 0.5 g/L,七水硫酸镁0.25 g/L,乙酸钠1.55 g/L,K2HPO40.83 g/L,柠檬酸钠0.62 g/L,抗坏血酸钠1.5 g/L。在此增殖培养基中经30℃,14 h培养活菌数提高了4.3倍。

乳酸乳球菌乳脂亚种MG1363中盐诱导启动子的克隆

为了从乳酸菌中筛选和克隆启动子,实验利用缺失T7启动子的质粒载体PRSET/LacZ直接在大肠杆菌(E.coli)DH5α中分离乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)MG1363的基因启动子片段,获得了10多个具有抗氨苄和盐诱导出蓝斑的重组子。反复筛选并对其中一个抗性最高的重组子PRSET-osm进行序列测定和同源性分析发现,所克隆的基因启动子片段来自乳酸乳球菌乳脂亚种MG1363的基因组,并具有原核启动子的保守序列(Pribnow框和Sextama框)。对启动子osm进行进一步序列分析和鉴定发现,其在大肠杆菌BL21中启动LacZ基因的表达,确定osm为盐诱导启动子。

乳球菌L529的生长条件试验

研究乳球菌 L5 2 9(乳酸乳球菌乳脂亚种 L5 2 9)的最佳生长条件 ,取得该菌生长的 C/ N最佳值为 4 .5～ 5 .0 ,及其所需维生素的量 .同时 ,提出合理的生长培养基配方 .经发酵中试 ,该菌在 p H为 7.0 ,温度为 36℃的条件下 ,活菌数提高 5倍 。

乳酸球菌胞外多糖合成条件的优化

从东北传统发酵制品辣酱中分离出产胞外多糖菌株乳酸球菌乳酸乳球菌乳亚种LJ35和乳酸乳球菌乳脂亚种LJ51，其在M17培养基中的胞外多糖产量分别为62．19mg／L和74．24mg／L。对两菌株的培养基组成和培养条件进行优化分析，确定其最适的胞外多糖合成条件。有利于菌株LJ35合成胞外多糖的条件为：在M17基础培养基中添加麦芽糖30叽、酪蛋白胨20g／L，调节培养基初始pH值为6．5，于20℃培养14h；有利于菌株LJ51合成胞外多糖的条件为：在M17基础培养基中添加葡萄糖30gm、大豆蛋白胨30g／L，调节培养基初始pH值为7．5，于25℃培养14h。优化后两菌株的胞外多糖含量分别为214mg／L和231mg／L，为优化前产量的3～4倍。

16S rRNA和recA、groEL基因分类鉴定乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种的比较

【目的】比较16S rRNA和recA、groEL基因部分序列用于乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种分类鉴定的效果。【方法】对已鉴定的8株分离自传统发酵乳的乳酸乳球菌,选取recA和groEL基因片段,通过PCR扩增、测序,将测序得到的序列比对后构建系统发育树,并与16S rRNA基因序列分析技术进行比较。【结果】比较分析不同菌株16S rRNA和recA、groEL基因的亲缘关系,recA、groEL基因可以准确地完成乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种的区分和鉴定。【结论】recA和groEL基因序列分析可以实现乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种的区分,因其具有快速、准确、稳定的特点,可适合于乳酸乳球菌乳酸亚种和乳脂亚种间的快速分类鉴定。

优良乳酸菌菌株在凝固型酸奶中的生产应用

从肃南牧区传统发酵牦牛乳中筛选出的乳酸乳球菌乳脂亚种是一株优良的自然发酵剂,有较好的产香能力,乙醛产量为16.12ug/mL,双乙酰产量为0.95ug/mL,抗后酸化能力较强,冷藏期间活菌数稳定保持在108cfu/mL。将其用在凝固型酸奶的实际生产中,并对产品进行了感官、理化、微生物等质量指标的检测,结果表明各项指标均符合GB5408.2-1999、GB2746-1999、QB/T21732-2008标准。