麦洼牦牛和九龙牦牛乳酸脱氢酶H亚基的遗传变异体

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法 ,对 1 0 9头麦洼牦牛和 1 0 0头九龙牦牛乳中的乳酸脱氢酶 (LDH)同工酶进行检测。结果表明 :两品种牦牛乳中 LDH在凝胶上仅显示出由 4个 H亚基组成的 LDH1 1条区带。试验共检测到 4种 LDH1 的遗传变异体 ,按迁移率由大到小依次为 A、B、C、D,其中 D型仅存在于九龙牦牛中 ,C型在两品种牦牛中均占明显优势。麦洼牦牛和九龙牦牛 LDH1

下调乳酸脱氢酶-A诱导胃癌细胞凋亡及ROS产生的实验研究

目的:探讨下调乳酸脱氢酶-A(lactate dehydrogenase-A,LDHA)对胃癌细胞凋亡及细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生的影响。方法:将体外培养的胃癌SGC7901细胞随机分为对照组(未转染)、siN C组(转染control-siRNA)和siL DHA组(转染LDHA-siRNA),脂质体转染48 h后,采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)法检测转染效果,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达,激光扫描共聚焦显微镜法检测ROS水平,比色法分析细胞内氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)含量。结果:与对照组相比,siL DHA组细胞的凋亡率、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达、ROS水平和GSSG含量均显著升高,而LDHA mRNA表达和LDHA、Bcl-2蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义(P <0. 05);而siN C组与对照组相比,凋亡率、Cleaved Caspase-3、LDHA、Bcl-2和Bax蛋白表达、LDHA mRNA表达、ROS水平和GSSG差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论:下调LDHA可诱导胃癌SGC7901细胞凋亡,其作用机制可能与细胞内ROS水平升高有关。

乳酸脱氢酶-A抑制剂草氨酸钠对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的了解糖酵解关键酶乳酸脱氢酶-A（LDH-A）抑制剂草氨酸钠对肝癌细胞的抗增殖、化疗增敏和促凋亡作用。方法使用不同浓度的草氨酸钠干预体外培养人肝癌HepG2细胞。中性红染色法观察细胞增殖活性改变;中位效应法观察联合阿霉素对HepG2细胞增殖抑制的相互作用;流式细胞术双染法观察凋亡诱导作用。结果草氨酸钠可抑制HepG2细胞的增殖,并呈剂量和时间的依赖性;草氨酸钠干预HepG2细胞24 h和48 h的半数抑制浓度分别是39.7 mmol和18.7 mmol。一定浓度范围的草氨酸钠（10~60 mmol）和阿霉素（0.1~0.6μmol）联合干预HepG2细胞的联合指数小于1,产生协同的增殖抑制效应;20 mmol及更高浓度的草氨酸钠可诱导HepG2细胞发生早期凋亡（P〈0.05）。结论草氨酸钠可抑制HepG2细胞增殖,并诱导早期凋亡,增加化疗药物敏感性。草氨酸钠对体外培养肝癌细胞具有重要的治疗干预作用,乳酸脱氢酶-A有望成为肝癌治疗新靶点。

膀胱移行细胞癌组织中乳酸脱氢酶B亚基蛋白表达变化及意义

目的观察膀胱移行上皮细胞癌(BTCC)中乳酸脱氢酶B亚基(LDHB)蛋白的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测100例BTCC组织(BTCC组)及100例正常膀胱组织(对照组)中的LDHB蛋白,并分析LDHB蛋白表达与BTCC临床病理参数的关系。结果 BTCC组与对照组LDHB蛋白表达阳性分别为42、71例,两组相比,P<0.05。LDHB蛋白表达与BTCC临床分期和分化程度有关(P均<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤直径无关(P均>0.05)。结论 LDHB蛋白在BTCC组织中的表达低于正常膀胱组织,其可能参与了BTCC的发病。

小鼠乳酸脱氢酶C亚基在大肠埃希菌中的表达与鉴定

目的 :构建小鼠特异性乳酸脱氢酶 (LDH)C亚基的原核重组载体并进行表达和鉴定。 方法 :提取小鼠睾丸总RNA ,逆转录合成cDNA ,自行设计引物 ,PCR扩增小鼠LDH C亚基编码序列 ,PCR产物经BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ 双酶切后 ,克隆至谷胱甘肽S转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 2T中 ,在E .coliBL2 1中诱导GST融合蛋白的表达。 结果 :在异丙基 β 硫代半乳糖苷 (IPTG)的诱导下 ,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为6 0 0 0 0的产物。对重组质粒的序列分析表明 ,插入片段的序列与GenBank登录的编码序列完全一致。 结论 :小鼠LDH C亚基的全长编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX 2T ,并在E .coliBL2

敲低膀胱癌细胞热休克蛋白60(HSP60)通过上调乳酸脱氢酶A(LDHA)表达抑制人NKL细胞杀伤

目的探索热休克蛋白60(HSP60)蛋白表达变化影响膀胱癌细胞逃避自然杀伤(NK)细胞免疫监视的作用及机制。方法免疫组织化学染色法检测HSP60在膀胱癌组织及癌旁组织中的表达,统计学分析HSP60在膀胱癌及癌旁组织的表达差异及HSP60表达水平与膀胱癌患者预后的相关性。利用腺病毒载体构建HSP60稳定干涉及过表达的膀胱癌细胞系并与NKL细胞共培养,ELISA及LDH释放实验检测NK细胞活化及杀伤能力的变化。Western blot法检测膀胱癌细胞乳酸脱氢酶A(LDHA)表达,试剂盒检测乳酸分泌。在HSP60稳定干涉及过表达的膀胱癌细胞系,利用小干涉RNA(siRNA)敲低或利用质粒过表达膀胱癌细胞中的LDHA,检测对NKL细胞杀伤能力的影响。利用线粒体活性氧探针MitoSOX检测线粒体活性氧(ROS)水平,Western blot法检测膀胱癌细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的蛋白表达,利用靶向线粒体抗氧化剂MitoEMPO及siRNA降低HSP60稳定干涉膀胱癌细胞中线粒体ROS及HIF-1α水平,探索HSP60表达降低促进LDHA表达的具体机制。结果膀胱癌组织HSP60蛋白的表达水平较癌旁组织显著降低,且HSP60表达越低的膀胱癌患者其预后越差;敲低HSP60蛋白表达可显著上调膀胱癌细胞LDHA的表达及乳酸的分泌,反之,过表达HSP60可显著抑制膀胱癌细胞LDHA的表达及乳酸的分泌;siRNA LDHA可显著增强HSP60敲低导致NKL细胞的杀伤抑制,同时过表达LDHA可显著抑制HSP60过表达导致NKL杀伤增强。此外,敲低膀胱癌细胞HSP60表达可通过激活ROS/HIF-1α通路促进LDHA的表达。结论敲低膀胱癌细胞HSP60表达通过激活ROS/HIF-1α通路促进LDHA的表达,抑制NK细胞的杀伤作用。

乳酸脱氢酶同工酶酶谱异常谱型解析

本文总结了乳酸脱氢酶同工酶电泳中遗传性变异和非遗传性变异的异常酶谱形状，出现的原因及解析方法。

转牛LDHA基因酿酒酵母构建及产乳酸能力分析

【目的】探究转牛乳酸脱氢酶A基因(LDHA)酿酒酵母发酵制备食品级乳酸的可行性,为采用转基因商业酿酒酵母规模化制备乳酸提供技术支撑。【方法】从NCBI网站检索牛LDHA基因编码序列,并将编码序列中的同义密码子替换为酿酒酵母偏好密码子,经人工合成后导入酿酒酵母表达载体pAUR123,再将重组表达载体p AUR123-LDHA导入商业化酿酒酵母EC1118株,采用Aureobasidin A筛选转基因酿酒酵母。将转基因及非转基因酿酒酵母EC1118株分别接种于含200 g/L葡萄糖的YPD液体培养基中连续培养5 d,期间检测2组酿酒酵母的LDHA活性及其发酵产乳酸能力,以评估转牛LDHA基因酿酒酵母发酵制备乳酸的可行性。【结果】牛LDHA基因编码序列长1170 bp,共编码389个氨基酸残基;以酿酒酵母偏好密码子替换牛LDHA基因编码序列中的同义密码子,其替换率高达58.35%。牛LDHA在酿酒酵母中的预计半衰期>20 h,其二级结构富含α-螺旋和无规则卷曲。替换后的牛LDHA基因编码序列由表达载体pAUR123携带导入酿酒酵母中,经Aureobasidin A筛选获得1株转基因酿酒酵母菌株,命名为EC1118-LDHA。转基因酿酒酵母EC1118-LDHA株以200 g/L葡萄糖为碳源,发酵24 h后的LDHA活性达4.7±1.2 mU/mg,发酵2~3 d后约制备出30 g/L乳酸,同时产生约70 g/L乙醇,乳酸产出率约为0.15 g/g葡萄糖。【结论】将替换酿酒酵母偏好密码子后的牛LDHA基因编码序列导入酿酒酵母中能成功构建转牛LDHA基因酿酒酵母,牛LDHA基因的导入不会影响商业化酿酒酵母的发酵能力,且赋予了酿酒酵母以200 g/L葡萄糖为碳源约制备出30 g/L乳酸的能力。因此,采用转牛LDHA基因酿酒酵母制备食品级乳酸完全可行。

不同海拔牦牛骨骼肌中乳酸脱氢酶三种亚基基因表达的比较

为了阐明高原低氧对牦牛(Bos mutus)骨骼肌中乳酸脱氢酶(LDH)三种亚基基因(LDHA、LDHB和LDHC)表达的影响,本实验分别选取高海拔(4 200 m)、中海拔(3 200 m)和低海拔(1 900 m)三个海拔位置养殖的临床健康成年雄性牦牛各5头,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测牦牛骨骼肌中LDH三种亚基基因的m RNA表达和蛋白表达水平。结果表明,随海拔的升高,牦牛骨骼肌中LDHA m RNA的表达逐渐下降;LDHB m RNA先降低后升高,在高海拔组牦牛中表达最高,相对表达量为2.82±0.12,与低海拔组(1.01±0.07)、中海拔组(0.73±0.06)牦牛LDHB mRNA表达量差异显著(P <0.05);LDHC mRNA的表达量随海拔的升高呈下降趋势,且低海拔组(1.10±0.16)、中海拔组(0.86±0.16)、高海拔组(0.69±0.12)组间两两相比均差异显著(P <0.05)。LDHA和LDHC蛋白表达量随海拔的升高呈下降趋势,且LDHA蛋白表达量在低海拔组(1.00±0.00)、中海拔组(0.88±0.02)、高海拔组(0.75±0.02)组间两两相比均差异显著(P<0.05),LDHC蛋白表达量在低海拔组(1.00±0.00)、中海拔组(0.89±0.02)、高海拔组(0.74±0.02)组间两两相比差异显著(P <0.05);LDHB蛋白表达量随海拔的升高先降低再升高,高海拔组牦牛骨骼肌中LDHB蛋白的表达量(1.37±0.02)显著高于低海拔组(1.00±0.00)(P <0.05)和中海拔组牦牛(0.95±0.01)(P <0.05)。LDH是催化丙酮酸和乳酸转化的关键酶,其含量和活性受到基因的调控。本研究不同海拔间牦牛骨骼肌内LDH的m RNA表达和蛋白表达量均具有差异,推测高原牦牛骨骼肌为适应不同的氧分压环境,其丙酮酸和乳酸代谢发生了相应变化,无氧氧化代谢能力发生了适应性改变。

多聚酶链反应单链构象多态技术检测LDH-B亚基变异基因

应用多聚酶链反应 单链构象多态技术 (PCR SSCP)对一长期低血清乳酸脱氢酶 (LDH)活力患者进行基因分析 ,结果显示LDH B基因外显子 4的单链DNA出现异常的迁移率 ,提示遗传性变异是引起该患者血清低酶活力的原因。临床上不明原因的低酶活力往往是由于基因水平上发生变异所致 ,临床实验室中使用PCR SSCP技术可快速检出多外显子的临床酶发生的基因变异。

结肠癌组织中乳酸脱氢酶B亚基蛋白表达变化及临床意义

目的:观察结肠癌(colon cancer)中乳酸脱氢酶B亚基(LDHB)蛋白的表达变化,并探讨其意义。方法:采用免疫组化SP法检测72例结肠癌组织(CC组)及72例结肠组织(对照组)中的LDHB蛋白,并分析LDHB蛋白表达与CC临床病理参数的关系。结果:CC组和对照组LDHB蛋白表达阳性的分别为27、61例,两组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。LDHB蛋白表达与CC临床分期和分化程度有关(均P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤直径无关(均P>0.05)。结论:LDHB蛋白在结肠癌细胞癌组织中的表达低于非癌性结肠组织,其表达可能与结肠癌的发生有关。

胶质瘤LDHA和突变型p53蛋白联合表达的临床病理学意义

目的探讨LDHA/p53联合表达在胶质瘤临床病理学中的意义。方法按照2016年WHO中枢神经系统肿瘤新分类,分析68例胶质瘤LDHA和突变型p53蛋白的表达特点及其与临床病理特征的关系。结果 68例胶质瘤中,LDHA单独高表达多为高级别胶质瘤,占48.5%;突变型p53高表达则多为胶质母细胞瘤,占26.5%。LDHA/p53联合表达在胶质母细胞瘤中显著增高,占22.1%(P=0.005)。高级别胶质瘤中LDHA/p53联合表达增多,占27.9%(P=0.002)。结论 LDHA/p53联合表达有助于高级别胶质瘤的诊断,对胶质母细胞瘤的诊断也具有提示作用。

缺氧诱导因子1α、葡萄糖转运蛋白1和乳酸脱氢酶5在结直肠癌的表达及其意义

目的探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、葡萄糖转运蛋白1（GLUT-1）及乳酸脱氢酶5（LDH-5）在结直肠癌中的表达及其临床病理意义。方法采用免疫组织化学sP法检测142例结直肠癌组织及其癌旁组织中HIF-1α、GLUT-1及LDH-5蛋白的表达。结果HIF-1α、GLUT-1及LDH．5在结直肠癌组织的表达率分别为78．2％（111／142）、75．4％（107／142）及68．3％（97／142），与癌旁组织的表达率（14．8％，21／142；11．3％，16／142；7．O％，10／142）比较，其差异均具有统计学意义（P〈0．01）。结直肠癌组织中HIF-1α、GLUT-1及LDH-5的阳性表达率与淋巴结转移、肿瘤分化程度和病理分期有相关性（均P〈0．05）；结直肠癌中HIF-1α、GLUT-1和LDH-5的表达两两之间具有关联性，并且表达呈正相关（P〈0．05）。结论联合检测HIF-1α、GLUT-1及LDH-5在结直肠癌的表达，可作为评估结直肠癌的发展、转移及预后重要指标。

特发性肺间质性纤维化患者血清肺泡表面蛋白-A、-D的水平及临床意义

目的研究肺泡表面蛋白(SP)-A、SP-D在特发性肺间质性纤维化(IPF)患者血清的水平及临床意义。方法 58例IPF患者为观察组,58例健康者为对照组,检测血清SP-A、SP-D及乳酸脱氢酶(LDH)水平,对其中44例急性加重期患者SP-A、SP-D浓度变化及CO弥散量(Dlco)进行检测,3年后对18例生存和40例死亡患者SP-A、SP-D进行测定。结果对照组外周血清SP-A,SP-D和LDH水平与观察组差异显著(P<0.05)。44例急性加重期前后SP-A、SP-D及Dlco水平差异显著(P<0.05)。IPF患者中,存活与死亡组SP-A水平差异显著(t=4.83,P<0.05);SP-D浓度初诊与存活组相比差异显著(t=3.29,P<0.05)。结论 SP-A、SP-D、LDH在IPF患者血清中高表达,急性加重期IPF患者中SP-A、SP-D显著增高,Dlco显著降低,在死亡患者中SP-A、SP-D较高水平。

血清 LDH 亚基比值测定的临床意义

目的：观察血清中 Ｌ Ｄ Ｈ 亚基比值 Ｈ／ Ｍ 在各种疾病中的变化。方法：在典范电泳仪上用涤纶膜做载体测定正常人和病人的 Ｌ Ｄ Ｈ 同工酶，并计算出两个亚基的比值（ Ｈ／ Ｍ）。结果：心肌梗塞病人的 Ｈ／ Ｍ 比值显著上升，皮肤病、烧伤及肺癌等病人组的 Ｈ／ Ｍ 比值显著下降（ Ｐ＜ ０．００１）。结论： Ｌ Ｄ Ｈ 亚基比值对心肌梗塞、皮肤疾病、烧伤及肺癌等病症的诊断、疗效观察及预后判断上有一定的作用。

人LDH-M亚基遗传变异的多态性

本文综述了ＬＤＨ－Ｍ亚基基因变异的不同类型以及对酶蛋白结构和功能的影响。

人源LDHA基因启动子质粒的构建及在肺癌细胞中Nrf2对其转录表达调控和功能分析

为探索核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)调节肿瘤代谢进而影响肿瘤细胞迁移的分子机制,着重研究了Nrf2对乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)表达的调控。首先成功构建了人源LDHA基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因质粒LDHA-luc。将质粒LDHA-luc与Nrf2表达载体共同转染A549细胞,转染后经双荧光素酶报告基因系统检测,显示共转Nrf2质粒时LDHA-luc活性明显要比对照组高;同时,转染Nrf2质粒时LDHA的蛋白质表达水平明显高于对照组,表明在A549细胞中Nrf2促进LDHA的转录和表达。而LDHA的上调会促进酸性肿瘤微环境的形成,促进细胞迁移。因此,成功构建的人源LDHA基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因质粒LDHA-luc及探索出的Nrf2对LDHA基因表达的调控,为进一步研究Nrf2通过LDHA影响细胞代谢进而促进细胞迁移奠定了基础。

LDH同功酶的乙酸纤维薄膜电泳测定法

ＬＤＨ同功酶的乙酸纤维薄膜电泳测定法张国忠，陈敏，陈冀闽，李维珍关键词：乳酸脱氢酶同功酶，乙酸纤维薄膜电泳，急性心肌梗塞，扫描定量乳酸脱氢酶同功酶系（ＬＤＨ１～５）是指能催化同一反应（乳酸→丙酮酸）而结构不同的一组酶类。其形成是由于乳酸脱氢酶四聚体分...

羟喜树碱对前列腺癌PC-3细胞能量代谢的影响

目的研究羟喜树碱对人前列腺癌PC-3细胞增殖抑制作用及能量代谢和关键酶的影响。方法选取PC-3细胞,采用MTT法测定1.0、2.0及5.0μmol/L的羟喜树碱处理该细胞24 h后细胞的增殖抑制能力。采用分光光度法测定葡萄糖摄取量及乳酸生成量及ATP生成相关能量代谢参数。采用Western blot法测定乳酸脱氢酶A(LDHA)和AMP活化蛋白激酶(AMPK)表达。结果 1.0、2.0及5.0μmol/L的羟喜树碱可抑制PC-3细胞的增殖并呈剂量依赖性(P<0.05,P<0.01),IC_(50)值为3.24μmol/L。与对照组相比,不同浓度的羟喜树碱可降低葡萄糖摄取,抑制乳酸生成及ATP生成,且均呈剂量依赖性(P<0.05,P<0.01);Western blot结果显示,不同浓度的羟喜树碱可使PC-3细胞中LDHA及AMPK表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论羟喜树碱通过可降低PC-3细胞中LDHA及AMPK表达,抑制肿瘤的有氧酵解并抑制细胞增殖。

大鼠肾组织的LDH_4亚带

乳酸脱氢酶（LDH）广泛存在于各种组织中,它是由4个亚基构成的四聚体。由两个独立基因位点所决定的两种亚基—肌肉型（A或M型）与心型（B或H型）可产生5种同工酶;LDH1（B4）、LDH2（AB3）、LDH3（A2B2）、LDH4（A3B）、LDH5（B4）。据报道还有第三个基因位点—LDHc,其产物仅在睾丸和精子中有活性。从睾丸和精液LDH分析中可以看到第六种同工酶—X带（baux）,常用LDHx表示。这种同工酶被认为是C4,即为第三种亚基的四聚体。LDHx在发育中的变化大概和性成熟有关,其变化很可能受激素控制。 1986年9月作者在测定雌性大鼠不同组织LDH同工酶组分分布时发现,10只雌鼠中有3只妊娠鼠肾组织中LDH4出现了亚带,与LDHx带十分相似,这引起了我们的兴趣,此带是否与妊娠有关呢?