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兔抗人乳酸脱氢酶C4(LDHC4)多克隆抗体制备与应用
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作者 黄阿秀 邓彩云 +1 位作者 杨思雨 张庆莲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1118-1124,共7页
目的 制备兔抗人乳酸脱氢酶C4(LDHC4)的多克隆抗体。方法 采用PCR点突变LDHC基因,并将该基因构建到pET-28a载体上,形成pET-28a-LDHC重组表达载体、将重组载体转化至大肠杆菌表达宿主BL21(DE3),诱导表达获得重组人LDHC4蛋白,将重组蛋白... 目的 制备兔抗人乳酸脱氢酶C4(LDHC4)的多克隆抗体。方法 采用PCR点突变LDHC基因,并将该基因构建到pET-28a载体上,形成pET-28a-LDHC重组表达载体、将重组载体转化至大肠杆菌表达宿主BL21(DE3),诱导表达获得重组人LDHC4蛋白,将重组蛋白作为抗原免疫新西兰兔,3次加强免疫后得到抗血清,采用ELISA检测抗血清效价,采用Western blot法检测抗血清的特异性,采用免疫组织化学法检测人三阴性乳腺癌组织中LDHC4的表达。结果 获得了特异性的兔抗人LDHC4多克隆抗体,抗体效价达1∶51 200,该抗体可用于Western blot法和免疫组织化学法。结论 成功制备了特异性兔抗人LDHC4多克隆抗体。 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶c4(LDHc4) 重组蛋白 多克隆抗体
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乳酸脱氢酶C与哺乳动物精子能量代谢 被引量:9
2
作者 贺庆华 林亚秋 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第3期1076-1077,共2页
哺乳动物精子能量代谢的相关研究对畜牧业与生殖医学领域的发展影响重大,因此,相关的研究一直是热点,其中乳酸脱氢酶C(LDH-C)和精子能量代谢的关系也一直被研究,大部分研究者认为,LDH-C和哺乳动物精子能量代谢相关,但多数实验证据是间... 哺乳动物精子能量代谢的相关研究对畜牧业与生殖医学领域的发展影响重大,因此,相关的研究一直是热点,其中乳酸脱氢酶C(LDH-C)和精子能量代谢的关系也一直被研究,大部分研究者认为,LDH-C和哺乳动物精子能量代谢相关,但多数实验证据是间接的而且比较分散。综述了对哺乳动物精子能量代谢和LDH-C两个方面的研究,提出LDH-C在精子的能量代谢中扮演着多重角色,不仅直接参与精子的能量代谢,还可能参与哺乳动物精子获能的信号途径,LDH-C和哺乳动物精子的能量代谢密切相关。 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶c 能量代谢 精子
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川西高原黑唇鼠兔乳酸脱氢酶C基因的原核表达
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作者 张庆莲 刘浩浩 +3 位作者 贺庆华 刘东奇 李蒙 梁正旭 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第14期8622-8623,8626,共3页
[目的]研究黑唇鼠兔乳酸脱氢酶C(LDH-C)基因的原核表达及重组蛋白的纯化。[方法]采用RT-PCR方法克隆鼠兔LDH-C基因,并将其连接到表达载体pET-32a上,构建鼠兔LDH-C基因的大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,通过IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE进... [目的]研究黑唇鼠兔乳酸脱氢酶C(LDH-C)基因的原核表达及重组蛋白的纯化。[方法]采用RT-PCR方法克隆鼠兔LDH-C基因,并将其连接到表达载体pET-32a上,构建鼠兔LDH-C基因的大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,通过IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE进行分析,使用亲和层析方法进行蛋白纯化。[结果]RT-PCR扩增出1条约1.0 kbp的条带,与预期结果相符;重组表达载体经PCR和双酶切鉴定,产生1个约1.0 kbp的目的片段,表明表达载体构建成功;表达产物经SDS-PAGE分析,得到了分子量略大于45.0kDa以包涵体形式存在的融合蛋白;通过镍亲和层析柱进行纯化,得到了较纯的融合蛋白。[结论]黑唇鼠兔LDH-C基因被成功克隆和表达。 展开更多
关键词 黑唇鼠兔 乳酸脱氢酶c 原核表达 蛋白纯化
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精液乳酸脱氢酶C4同功酶的底物选择性测定法
4
作者 陈复 罗比 王萍 《四川医学》 CAS 2001年第11期1065-1066,共2页
目的 建立一种简便、准确测定精浆、精子中的 L DH- C4同功酶的检测方法。方法 采用特异底物的酶动力学分光光度法测定人精子、精浆中 L DH- C4同功酶活性。其结果与常规的丙稀酰胺凝胶电泳分离 ,活性染色 ,光密度扫描法进行比较。结... 目的 建立一种简便、准确测定精浆、精子中的 L DH- C4同功酶的检测方法。方法 采用特异底物的酶动力学分光光度法测定人精子、精浆中 L DH- C4同功酶活性。其结果与常规的丙稀酰胺凝胶电泳分离 ,活性染色 ,光密度扫描法进行比较。结果 两种方法间存在较好的相关 ( r=0 .93 2 ,n=12 8)。以 5 .0 mmol/ L的α-酮己酸底物浓度可以选择性的检测出精液样品的 L DH- C4活性。结论 本方法具有微量、快速的优点 ,适于在临床检验中推广应用。 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶c4同功 精子 精浆 动力学测定 精液 底物选择性测定法
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乳酸脱氢酶C4的精子免疫荧光定位特性 被引量:3
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作者 封树林 贲昆龙 +1 位作者 王云美 梁志国 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 1995年第1期62-72,共11页
用14个抗小鼠LDH-C4的单克隆抗体对小鼠、树鼯和人精子的LDH-C4进行了间接免疫荧光定 位。结果显示:不同的单抗可以结合到小鼠精子表面不同的位置,其中PA1(K021)在尾部,PA2 (K022)、PA4和PA5... 用14个抗小鼠LDH-C4的单克隆抗体对小鼠、树鼯和人精子的LDH-C4进行了间接免疫荧光定 位。结果显示:不同的单抗可以结合到小鼠精子表面不同的位置,其中PA1(K021)在尾部,PA2 (K022)、PA4和PA5(K023)在中段和尾部, SM1、 SM2和PG2在中段, SM3和SM4在顶体, SM5 在顶体和赤道板。人和树鼯精子表面的LDH-C4也呈现类似的情况。这些研究表明精子表面的 LDH-C4呈现多位点分区分布,精子的不同部位暴露的LDH-C4的抗原决定簇不同。在被检动物中, LDH-C4显示明显的同源性。 展开更多
关键词 精子 单克隆抗体 免疫荧光定位 乳酸脱氢酶c4
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乳酸脱氢酶C4与恶性肿瘤的研究进展 被引量:3
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作者 林颖烽 周峰 +1 位作者 陈燕 崔兆磊 《中国癌症防治杂志》 CAS 2019年第6期528-531,共4页
乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)依赖性激酶,属于乳酸脱氢酶家族的同工酶,特异性存在于哺乳动物精子等生殖细胞中。研究表明,LDH-C4在肺癌、乳腺癌和肾... 乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)依赖性激酶,属于乳酸脱氢酶家族的同工酶,特异性存在于哺乳动物精子等生殖细胞中。研究表明,LDH-C4在肺癌、乳腺癌和肾细胞癌等肿瘤组织中呈高表达,且可能通过糖酵解以及肿瘤免疫途径参与肿瘤发生发展,有望成为肿瘤早期诊断和预后评估的一种新型标志物。本文就LDH-C4与恶性肿瘤关系的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 肿瘤 乳酸脱氢酶c4 糖酵解 标志物 诊断
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小鼠乳酸脱氢酶C亚基在大肠埃希菌中的表达与鉴定
7
作者 熊永忠 郑德柱 +2 位作者 谢飞 涂向东 兰风华 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期9-11,共3页
目的 :构建小鼠特异性乳酸脱氢酶 (LDH)C亚基的原核重组载体并进行表达和鉴定。 方法 :提取小鼠睾丸总RNA ,逆转录合成cDNA ,自行设计引物 ,PCR扩增小鼠LDH C亚基编码序列 ,PCR产物经BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ 双酶切后 ,克隆至谷胱甘肽S转移酶 ... 目的 :构建小鼠特异性乳酸脱氢酶 (LDH)C亚基的原核重组载体并进行表达和鉴定。 方法 :提取小鼠睾丸总RNA ,逆转录合成cDNA ,自行设计引物 ,PCR扩增小鼠LDH C亚基编码序列 ,PCR产物经BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ 双酶切后 ,克隆至谷胱甘肽S转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 2T中 ,在E .coliBL2 1中诱导GST融合蛋白的表达。 结果 :在异丙基 β 硫代半乳糖苷 (IPTG)的诱导下 ,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为6 0 0 0 0的产物。对重组质粒的序列分析表明 ,插入片段的序列与GenBank登录的编码序列完全一致。 结论 :小鼠LDH C亚基的全长编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX 2T ,并在E .coliBL2 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶c亚基 精子 克隆 基因表达 小鼠 PcR LDH同工 避孕疫苗
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东方对虾精子中的乳酸脱氢酶C 被引量:3
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作者 陈明 周念辉 +2 位作者 李爱媛 徐科 孙海宝 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1994年第24期2272-2274,共3页
乳酸脱氢酶(LDH,EC 1.1.1.27)可逆地催化乳酸和丙酮酸的相互转变,广泛地分布于动物的不同组织中.在鸟类和哺乳动物中,它是由A-亚基和B-亚基所组成的四聚体.由于分子中的A-亚基和B-亚基的相对含量不同而形成5种同工酶(LDH 1—5).在骨骼肌... 乳酸脱氢酶(LDH,EC 1.1.1.27)可逆地催化乳酸和丙酮酸的相互转变,广泛地分布于动物的不同组织中.在鸟类和哺乳动物中,它是由A-亚基和B-亚基所组成的四聚体.由于分子中的A-亚基和B-亚基的相对含量不同而形成5种同工酶(LDH 1—5).在骨骼肌中,以A-亚基为主;而在心肌中,则B-亚基占优势.1963年。 展开更多
关键词 对虾 精子 乳酸脱氢酶c
原文传递
三硝基甲苯对小鼠精子乳酸脱氢酶同工酶C_4的影响
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作者 李建秀 刘惠民 王俊红 《职业与健康》 CAS 2003年第8期39-40,共2页
关键词 三硝基甲苯 小鼠 精子 乳酸同工c4
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不明原因男性不育人群中睾丸特异性乳酸脱氢酶基因突变的发现及其意义 被引量:5
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作者 李博 张朵 +5 位作者 曾健 富显果 柯龙凤 颜水堤 严爱贞 兰风华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第4期445-450,共6页
为了研究睾丸特异性乳酸脱氢酶,即乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)基因突变在男性不育发病中的作用,利用LDH-C4特异性底物对100名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C4进行活性显色,用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C4活性低下的患者进行LDHC基... 为了研究睾丸特异性乳酸脱氢酶,即乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)基因突变在男性不育发病中的作用,利用LDH-C4特异性底物对100名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C4进行活性显色,用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C4活性低下的患者进行LDHC基因PCR产物的突变筛查,对DHPLC峰形异常的PCR产物进行序列测定.筛选到一组精子LDH-C4活性明显下降的患者,其中1名患者的LDHC基因PCR产物在DHPLC中呈异常洗脱峰.对这一PCR产物进行序列测定,发现患者LDHC基因第5外显子的115位碱基发生了T→A的杂合改变(GenBank登录号GU479375),该突变使LDHC基因的178位密码子由原来的TTG(编码亮氨酸)变为TAG(终止密码子),形成截短的C亚基.T克隆-测序进一步证实了该无义突变的杂合状态.这是在人类LDHC基因上发现的第一个突变,提示LDHC基因突变可能是男性不育发病的原因之一. 展开更多
关键词 不育症 睾丸特异性乳酸 乳酸脱氢酶c4 DHPLc 基因突变
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构建睾丸特异性乳酸脱氢酶真核表达载体稳定转染HeLa细胞并成功表达
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作者 崔兆磊 郑德柱 +5 位作者 刘耀华 陈良远 张朵 曾章新 林天寿 兰风华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1322-1325,共4页
睾丸(精子)特异性乳酸脱氢酶(testis-specific lactate dehydrogenase),是上世纪60年代发现的乳酸脱氢酶同工酶之一,早期称乳酸脱氢酶-X,现称乳酸脱氢酶C4(lactatedehydrogenase C4,LDHC4)。LDHC4的合成受LDHC基因的控制,该基因... 睾丸(精子)特异性乳酸脱氢酶(testis-specific lactate dehydrogenase),是上世纪60年代发现的乳酸脱氢酶同工酶之一,早期称乳酸脱氢酶-X,现称乳酸脱氢酶C4(lactatedehydrogenase C4,LDHC4)。LDHC4的合成受LDHC基因的控制,该基因开放读码框为999 bp, 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶c4 LDHc 真核表达 HELA细胞 稳定转染
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人精子特异性乳酸脱氢酶结构和功能的计算生物学分析
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作者 汤莹 颜水堤 +3 位作者 郑德柱 张朵 林宇翔 兰风华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1088-1096,共9页
精子特异性乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH),又称乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4),特异性地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸组织中,与精子的生成、代谢、获能等有密切关系.根据GenBank数据库中人LDH-C4氨基酸序列(P... 精子特异性乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH),又称乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4),特异性地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸组织中,与精子的生成、代谢、获能等有密切关系.根据GenBank数据库中人LDH-C4氨基酸序列(P07864),利用PROSITE数据库预测人LDH-C4的功能基序;利用Clustalw2、TreeView1.6.6进行LDH-C4进化树的构建;利用I-TASSER软件预测人LDH-C4的二、三、四级结构以及功能位点.结果表明:在190!196位有1个LDH活性位点,该位点为脊椎动物各亚型乳酸脱氢酶共有的催化位点,为进化中的1个保守序列;从进化树来看,LDHC和LDHB的亲缘关系比较近;人LDH-C4与小鼠LDH-C4的二级、三级结构具有很高的相似性;LDH-C4属乳酸脱氢酶-苹果酸脱氢酶(LDH-MDH)超家族中的LDH-1(cd05293)家族的成员,属于NAD依赖性酶,拥有LDH-1家族具备的基本结构特点.以上结果为研究LDH-C4基因突变对其功能的影响打下基础. 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶c4 精子特异性乳酸 计算生物学
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人血清IgG类抗LDH-C4抗体的ELISA检测及其意义 被引量:2
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作者 陈平 兰风华 +3 位作者 辛娜 张朵 陈勇 苏东辉 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第9期1399-1401,共3页
目的建立检测人血清IgG类抗精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)抗体的ELISA法,探讨人血清抗LDH-C4抗体与免疫性不育的关系。方法以重组人LDH-C4(rhLDH-C4)作为包被抗原,建立人血清IgG类抗LDH-C4抗体检测的间接ELISA方法。应用该方法检测74例... 目的建立检测人血清IgG类抗精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)抗体的ELISA法,探讨人血清抗LDH-C4抗体与免疫性不育的关系。方法以重组人LDH-C4(rhLDH-C4)作为包被抗原,建立人血清IgG类抗LDH-C4抗体检测的间接ELISA方法。应用该方法检测74例健康人群(正常生育组)和177例不育人群(不育组)血清IgG类抗LDH-C4抗体。结果初步建立了检测人血清IgG类抗LDH-C4抗体的间接ELISA方法。不育组血清IgG类抗LDH-C4抗体阳性率(30.51%)显著高于正常生育组(9.46%)(P<0.01),女性不育组阳性率(31.46%)与男性不育组(29.55%)差异不显著(P>0.05)。结论人血清中存在着IgG类抗LDH-C4抗体,此类抗体可能与免疫性不育有密切关系。 展开更多
关键词 抗精子抗体 乳酸脱氢酶c4 免疫性不育 联免疫吸附测定法
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鼠兔睾丸特异乳酸脱氢酶抑制物的筛选 被引量:2
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作者 龚静 黄林 贺庆华 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期573-578,共6页
乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4)被认为是研发节育药物的一个很好的靶蛋白。本研究进行了对鼠兔LDH-C4蛋白有抑制作用的小分子化合物的虚拟筛选和体外酶动力学筛选。筛选出了4个IC_(50)小于100μm的小分子化合物,其ZINC... 乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4)被认为是研发节育药物的一个很好的靶蛋白。本研究进行了对鼠兔LDH-C4蛋白有抑制作用的小分子化合物的虚拟筛选和体外酶动力学筛选。筛选出了4个IC_(50)小于100μm的小分子化合物,其ZINC数据库编号分别为ZINC05328871(5μm)、ZINC01699287(36μm)、ZINC17995347(53μm)、ZINC05390471(87μm)。这4个化合物和已报道的LDH-C4抑制物的结构均不相同,属于新的结构支架,可以作为靶向鼠兔LDH-C4的节育药物先导化合物进行进一步的研究。 展开更多
关键词 鼠害 抑制物 乳酸脱氢酶c4 鼠兔 筛选
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Activty of Lactate Dehydrogenase Isoenzyme C4 in Spermatozoa and Seminal Plasma from Infertile Men 被引量:1
15
作者 罗比 王平 +1 位作者 兰君 彭宪生 《Journal of Reproduction and Contraception》 CAS 1990年第2期34-39,共6页
A study on the activity of lactate dehydrogenase isoenzyme C4(LDH-C4) in spermatozoa and seminal plasma was performed in the following subjects: normal males were recruited as control, infertile men with or without no... A study on the activity of lactate dehydrogenase isoenzyme C4(LDH-C4) in spermatozoa and seminal plasma was performed in the following subjects: normal males were recruited as control, infertile men with or without normal semen quality were recruited as groups Inf. I and Inf. H, oligospermic patients were recruited as the 4th group. The ratios of LDH-C4 in seminal plasma to that in spermatozoa were 0.528(Pso) in the control, 0.88, 2.85 and 4.01 in Inf, I, H and oligospermic groups respectivel.v. All differences between the normal and the other groups were significant(P <0.005). The activity of LDH-C4 in spermatozoa might become an important biochemical index for estimation of semen quality and male fertility. A good correlation between LDH-C4 in spermatozoa was found (r = 0.9593). 展开更多
关键词 乳酸同工c4 作用机制 男性不育症 血浆 精子
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Enzymatic Activity of Escherichia Coil Lactate Dehydrogenase and Cytochrome c Oxidase
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作者 Yury Shamis Alex Taube +2 位作者 Rodney Croft Russell J. Crawford Elena P. Ivanova 《Journal of Physical Science and Application》 2012年第6期143-151,共9页
The catalytic activity of two common bacterial enzymes, lactate dehydrogenase (LDH) and cytochrome c oxidase (COX) from Escherichia coli was examined following bacterial exposure to microwave (MW) radiation unde... The catalytic activity of two common bacterial enzymes, lactate dehydrogenase (LDH) and cytochrome c oxidase (COX) from Escherichia coli was examined following bacterial exposure to microwave (MW) radiation under well-defined experimental conditions. The experiments were conducted in a specialized microwave processing apparatus, with an exposure frequency of 18 GHz, and a temperature profile that was restricted to below 40℃ to avoid thermal degradation of the bacteria. The absorbed power was calculated to be 1,500 kW/m3 and the electric field was determined to be 300 Wm. Both values were theoretically confirmed using Computer Simulation Technology (CST) Microwave Studio 3D Electromagnetic Stimulation Software. Results showed that the activity of both enzymes was increased following MW radiation compared to negative controls and thermally treated samples subjected to similar temperature profiles. It is suggested that the increase in COX and LDH enzyme activity could not be explained by conventional heating alone, but was rather a result of micro-thermal effects that incorporated 'undetectable' thermal mechanisms. 展开更多
关键词 NON-THERMAL microwave radiation specific microwave effects enzyme kinetics cytochrome c oxidase LAcTATEDEHYDROGENASE instantaneous temperature.
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