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兔抗人乳酸脱氢酶C4(LDHC4)多克隆抗体制备与应用
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作者 黄阿秀 邓彩云 +1 位作者 杨思雨 张庆莲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1118-1124,共7页
目的 制备兔抗人乳酸脱氢酶C4(LDHC4)的多克隆抗体。方法 采用PCR点突变LDHC基因,并将该基因构建到pET-28a载体上,形成pET-28a-LDHC重组表达载体、将重组载体转化至大肠杆菌表达宿主BL21(DE3),诱导表达获得重组人LDHC4蛋白,将重组蛋白... 目的 制备兔抗人乳酸脱氢酶C4(LDHC4)的多克隆抗体。方法 采用PCR点突变LDHC基因,并将该基因构建到pET-28a载体上,形成pET-28a-LDHC重组表达载体、将重组载体转化至大肠杆菌表达宿主BL21(DE3),诱导表达获得重组人LDHC4蛋白,将重组蛋白作为抗原免疫新西兰兔,3次加强免疫后得到抗血清,采用ELISA检测抗血清效价,采用Western blot法检测抗血清的特异性,采用免疫组织化学法检测人三阴性乳腺癌组织中LDHC4的表达。结果 获得了特异性的兔抗人LDHC4多克隆抗体,抗体效价达1∶51 200,该抗体可用于Western blot法和免疫组织化学法。结论 成功制备了特异性兔抗人LDHC4多克隆抗体。 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶c4(LDHc4) 重组蛋白 多克隆抗体
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精液乳酸脱氢酶C4同功酶的底物选择性测定法
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作者 陈复 罗比 王萍 《四川医学》 CAS 2001年第11期1065-1066,共2页
目的 建立一种简便、准确测定精浆、精子中的 L DH- C4同功酶的检测方法。方法 采用特异底物的酶动力学分光光度法测定人精子、精浆中 L DH- C4同功酶活性。其结果与常规的丙稀酰胺凝胶电泳分离 ,活性染色 ,光密度扫描法进行比较。结... 目的 建立一种简便、准确测定精浆、精子中的 L DH- C4同功酶的检测方法。方法 采用特异底物的酶动力学分光光度法测定人精子、精浆中 L DH- C4同功酶活性。其结果与常规的丙稀酰胺凝胶电泳分离 ,活性染色 ,光密度扫描法进行比较。结果 两种方法间存在较好的相关 ( r=0 .93 2 ,n=12 8)。以 5 .0 mmol/ L的α-酮己酸底物浓度可以选择性的检测出精液样品的 L DH- C4活性。结论 本方法具有微量、快速的优点 ,适于在临床检验中推广应用。 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶c4同功 精子 精浆 动力学测定 精液 底物选择性测定法
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乳酸脱氢酶C4的精子免疫荧光定位特性 被引量:3
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作者 封树林 贲昆龙 +1 位作者 王云美 梁志国 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 1995年第1期62-72,共11页
用14个抗小鼠LDH-C4的单克隆抗体对小鼠、树鼯和人精子的LDH-C4进行了间接免疫荧光定 位。结果显示:不同的单抗可以结合到小鼠精子表面不同的位置,其中PA1(K021)在尾部,PA2 (K022)、PA4和PA5... 用14个抗小鼠LDH-C4的单克隆抗体对小鼠、树鼯和人精子的LDH-C4进行了间接免疫荧光定 位。结果显示:不同的单抗可以结合到小鼠精子表面不同的位置,其中PA1(K021)在尾部,PA2 (K022)、PA4和PA5(K023)在中段和尾部, SM1、 SM2和PG2在中段, SM3和SM4在顶体, SM5 在顶体和赤道板。人和树鼯精子表面的LDH-C4也呈现类似的情况。这些研究表明精子表面的 LDH-C4呈现多位点分区分布,精子的不同部位暴露的LDH-C4的抗原决定簇不同。在被检动物中, LDH-C4显示明显的同源性。 展开更多
关键词 精子 单克隆抗体 免疫荧光定位 乳酸脱氢酶c4
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乳酸脱氢酶C4与恶性肿瘤的研究进展 被引量:3
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作者 林颖烽 周峰 +1 位作者 陈燕 崔兆磊 《中国癌症防治杂志》 CAS 2019年第6期528-531,共4页
乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)依赖性激酶,属于乳酸脱氢酶家族的同工酶,特异性存在于哺乳动物精子等生殖细胞中。研究表明,LDH-C4在肺癌、乳腺癌和肾... 乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)依赖性激酶,属于乳酸脱氢酶家族的同工酶,特异性存在于哺乳动物精子等生殖细胞中。研究表明,LDH-C4在肺癌、乳腺癌和肾细胞癌等肿瘤组织中呈高表达,且可能通过糖酵解以及肿瘤免疫途径参与肿瘤发生发展,有望成为肿瘤早期诊断和预后评估的一种新型标志物。本文就LDH-C4与恶性肿瘤关系的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 肿瘤 乳酸脱氢酶c4 糖酵解 标志物 诊断
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三硝基甲苯对小鼠精子乳酸脱氢酶同工酶C_4的影响
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作者 李建秀 刘惠民 王俊红 《职业与健康》 CAS 2003年第8期39-40,共2页
关键词 三硝基甲苯 小鼠 精子 乳酸同工c4
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不明原因男性不育人群中睾丸特异性乳酸脱氢酶基因突变的发现及其意义 被引量:5
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作者 李博 张朵 +5 位作者 曾健 富显果 柯龙凤 颜水堤 严爱贞 兰风华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第4期445-450,共6页
为了研究睾丸特异性乳酸脱氢酶,即乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)基因突变在男性不育发病中的作用,利用LDH-C4特异性底物对100名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C4进行活性显色,用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C4活性低下的患者进行LDHC基... 为了研究睾丸特异性乳酸脱氢酶,即乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)基因突变在男性不育发病中的作用,利用LDH-C4特异性底物对100名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C4进行活性显色,用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C4活性低下的患者进行LDHC基因PCR产物的突变筛查,对DHPLC峰形异常的PCR产物进行序列测定.筛选到一组精子LDH-C4活性明显下降的患者,其中1名患者的LDHC基因PCR产物在DHPLC中呈异常洗脱峰.对这一PCR产物进行序列测定,发现患者LDHC基因第5外显子的115位碱基发生了T→A的杂合改变(GenBank登录号GU479375),该突变使LDHC基因的178位密码子由原来的TTG(编码亮氨酸)变为TAG(终止密码子),形成截短的C亚基.T克隆-测序进一步证实了该无义突变的杂合状态.这是在人类LDHC基因上发现的第一个突变,提示LDHC基因突变可能是男性不育发病的原因之一. 展开更多
关键词 不育症 睾丸特异性乳酸 乳酸脱氢酶c4 DHPLc 基因突变
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构建睾丸特异性乳酸脱氢酶真核表达载体稳定转染HeLa细胞并成功表达
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作者 崔兆磊 郑德柱 +5 位作者 刘耀华 陈良远 张朵 曾章新 林天寿 兰风华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1322-1325,共4页
睾丸(精子)特异性乳酸脱氢酶(testis-specific lactate dehydrogenase),是上世纪60年代发现的乳酸脱氢酶同工酶之一,早期称乳酸脱氢酶-X,现称乳酸脱氢酶C4(lactatedehydrogenase C4,LDHC4)。LDHC4的合成受LDHC基因的控制,该基因... 睾丸(精子)特异性乳酸脱氢酶(testis-specific lactate dehydrogenase),是上世纪60年代发现的乳酸脱氢酶同工酶之一,早期称乳酸脱氢酶-X,现称乳酸脱氢酶C4(lactatedehydrogenase C4,LDHC4)。LDHC4的合成受LDHC基因的控制,该基因开放读码框为999 bp, 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶c4 LDHc 真核表达 HELA细胞 稳定转染
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人精子特异性乳酸脱氢酶结构和功能的计算生物学分析
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作者 汤莹 颜水堤 +3 位作者 郑德柱 张朵 林宇翔 兰风华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1088-1096,共9页
精子特异性乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH),又称乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4),特异性地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸组织中,与精子的生成、代谢、获能等有密切关系.根据GenBank数据库中人LDH-C4氨基酸序列(P... 精子特异性乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH),又称乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4),特异性地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸组织中,与精子的生成、代谢、获能等有密切关系.根据GenBank数据库中人LDH-C4氨基酸序列(P07864),利用PROSITE数据库预测人LDH-C4的功能基序;利用Clustalw2、TreeView1.6.6进行LDH-C4进化树的构建;利用I-TASSER软件预测人LDH-C4的二、三、四级结构以及功能位点.结果表明:在190!196位有1个LDH活性位点,该位点为脊椎动物各亚型乳酸脱氢酶共有的催化位点,为进化中的1个保守序列;从进化树来看,LDHC和LDHB的亲缘关系比较近;人LDH-C4与小鼠LDH-C4的二级、三级结构具有很高的相似性;LDH-C4属乳酸脱氢酶-苹果酸脱氢酶(LDH-MDH)超家族中的LDH-1(cd05293)家族的成员,属于NAD依赖性酶,拥有LDH-1家族具备的基本结构特点.以上结果为研究LDH-C4基因突变对其功能的影响打下基础. 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶c4 精子特异性乳酸 计算生物学
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人血清IgG类抗LDH-C4抗体的ELISA检测及其意义 被引量:2
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作者 陈平 兰风华 +3 位作者 辛娜 张朵 陈勇 苏东辉 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第9期1399-1401,共3页
目的建立检测人血清IgG类抗精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)抗体的ELISA法,探讨人血清抗LDH-C4抗体与免疫性不育的关系。方法以重组人LDH-C4(rhLDH-C4)作为包被抗原,建立人血清IgG类抗LDH-C4抗体检测的间接ELISA方法。应用该方法检测74例... 目的建立检测人血清IgG类抗精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)抗体的ELISA法,探讨人血清抗LDH-C4抗体与免疫性不育的关系。方法以重组人LDH-C4(rhLDH-C4)作为包被抗原,建立人血清IgG类抗LDH-C4抗体检测的间接ELISA方法。应用该方法检测74例健康人群(正常生育组)和177例不育人群(不育组)血清IgG类抗LDH-C4抗体。结果初步建立了检测人血清IgG类抗LDH-C4抗体的间接ELISA方法。不育组血清IgG类抗LDH-C4抗体阳性率(30.51%)显著高于正常生育组(9.46%)(P<0.01),女性不育组阳性率(31.46%)与男性不育组(29.55%)差异不显著(P>0.05)。结论人血清中存在着IgG类抗LDH-C4抗体,此类抗体可能与免疫性不育有密切关系。 展开更多
关键词 抗精子抗体 乳酸脱氢酶c4 免疫性不育 联免疫吸附测定法
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Activty of Lactate Dehydrogenase Isoenzyme C4 in Spermatozoa and Seminal Plasma from Infertile Men 被引量:1
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作者 罗比 王平 +1 位作者 兰君 彭宪生 《Journal of Reproduction and Contraception》 CAS 1990年第2期34-39,共6页
A study on the activity of lactate dehydrogenase isoenzyme C4(LDH-C4) in spermatozoa and seminal plasma was performed in the following subjects: normal males were recruited as control, infertile men with or without no... A study on the activity of lactate dehydrogenase isoenzyme C4(LDH-C4) in spermatozoa and seminal plasma was performed in the following subjects: normal males were recruited as control, infertile men with or without normal semen quality were recruited as groups Inf. I and Inf. H, oligospermic patients were recruited as the 4th group. The ratios of LDH-C4 in seminal plasma to that in spermatozoa were 0.528(Pso) in the control, 0.88, 2.85 and 4.01 in Inf, I, H and oligospermic groups respectivel.v. All differences between the normal and the other groups were significant(P <0.005). The activity of LDH-C4 in spermatozoa might become an important biochemical index for estimation of semen quality and male fertility. A good correlation between LDH-C4 in spermatozoa was found (r = 0.9593). 展开更多
关键词 乳酸同工c4 作用机制 男性不育症 血浆 精子
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鼠兔睾丸特异乳酸脱氢酶抑制物的筛选 被引量:2
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作者 龚静 黄林 贺庆华 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期573-578,共6页
乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4)被认为是研发节育药物的一个很好的靶蛋白。本研究进行了对鼠兔LDH-C4蛋白有抑制作用的小分子化合物的虚拟筛选和体外酶动力学筛选。筛选出了4个IC_(50)小于100μm的小分子化合物,其ZINC... 乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4)被认为是研发节育药物的一个很好的靶蛋白。本研究进行了对鼠兔LDH-C4蛋白有抑制作用的小分子化合物的虚拟筛选和体外酶动力学筛选。筛选出了4个IC_(50)小于100μm的小分子化合物,其ZINC数据库编号分别为ZINC05328871(5μm)、ZINC01699287(36μm)、ZINC17995347(53μm)、ZINC05390471(87μm)。这4个化合物和已报道的LDH-C4抑制物的结构均不相同,属于新的结构支架,可以作为靶向鼠兔LDH-C4的节育药物先导化合物进行进一步的研究。 展开更多
关键词 鼠害 抑制物 乳酸脱氢酶c4 鼠兔 筛选
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