重组NDV HN基因乳酸菌穿梭表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

为构建新城疫病毒乳酸菌穿梭表达载体,采用RT-PCR方法从新城疫病毒中扩增了HN基因,将其克隆到pMD18-T Simple Vector中。经测序鉴定正确后,定向克隆至乳酸菌表达载体pW425et中,并转化入表达宿主菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blotting检测重组菌在大肠杆菌中的表达情况。结果表明:NDVHN基因与表达载体pW425et正确重组,且该重组菌传50代次以上,重组质粒依然稳定。SDS-PAGE显示表达出约63 kD的条带,与已知表达的HN蛋白大小相符。Western blotting进一步证实该蛋白能被NDV阳性抗体所识别,具有反应原性。表明构建了重组NDVHN基因乳酸菌穿梭表达载体。