BALB/c小鼠金属硫蛋白-1 cDNA基因在乳酸菌质粒表达载体pNZ2103上的克隆

目的用乳酸菌质粒表达载体pNZ2103克隆BALB/c小鼠金属硫蛋白(MT)-1 cDNA基因。方法设计一对含有限制酶Pst1和H indⅢ位点的引物。以质粒pET21 a-MT为模板,采用PCR法扩增BALB/c小鼠MT-1cDNA。用限制性内切酶Pst1和H indⅢ将MT-1 cDNA克隆于质粒pNZ2103形成重组质粒pNZ2103-MT。将pN2103-MT转化进入大肠埃希菌DH5α。采用PCR法和Pst1、H indⅢ双酶切方法鉴定含有pNZ2103-MT的转化子。12%SDS-PAGE鉴定pNZ2103-MT在大肠埃希菌DH5α的表达水平。结果获得含有pNZ2103-MT的DH5α转化子。结论以乳酸菌质粒表达载体pNZ2103构建的pNZ2103-MT在大肠埃希菌中表达水平较低,采用SDS-PAGE难以检测到表达水平的金属硫蛋白。

乳酸菌质粒的研究进展

乳酸菌是一种公认的食品级微生物,它广泛存在于自然界中。很多编码其独特性状的基因位于游离于基因组DNA之外的质粒上。本文就乳酸菌质粒的提取方法、复制模式与特点以及改造和应用等方面进行概述,旨在揭示乳酸菌质粒的最新研究进展,为今后改造乳酸菌质粒,构建合适的基因工程载体提供参考与借鉴。